我是这样稀释我的标准曲线的:
大体确定一个起始浓度,然后混合好 (Vortex离心,Vortex离心,至少两次)。然后
在10个新管子里加450微升的PCR级的水,分别表上10x 的浓度。从混合好的管子里取50
微升,加到第一个管子(0.1x),然后混合好 (Vortex, 离心,Vortex, 离心,至少
两次)。从这0.1x 管子里取出50微升,加到第二个管子(0.01x),然后混合好 (
Vortex离心,Vortex离心,至少两次)。依此稀释下去。 做qPCR时,所有的稀释浓度
都加上。根据扩增的Ct值取几个最好的浓度作以后的标准曲线用
注意:1。体积一定要至少50微升,这样减少pipetting误差。2。一定要混合的非
常好。Vortex离心,Vortex离心,至少两次。
如果可能,可以用回收的DNA片断。有人用所有样品的混合物,然后加不同的上样量以
形成不同的浓度梯度,这样有点麻烦, 而且cDNA量不多, 非常珍贵时,最好不用此方法
。