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请教前辈：神经干细胞NSC培养，谢谢~！

请教前辈：神经干细胞NSC培养，谢谢~！# Biology - 生物学

l*o2013-07-22 07:07

1 楼

biomedical high profile journal(IF more than 5) need a reviewer to review one paper.
If you have background on modification of p53, apoptotic machinery, lung
carcinogenesis, and have title above postdoctoral position, such as
Instructor, research assistant professor etc, please send your CV to my 站内
信箱

J*92013-07-22 07:07

2 楼

新课题，需要培养小鼠侧脑室（LV）取材的神经干细胞(NSC，)，进行“悬浮培养神经
球（neurosphere）。我也是第一次接触这个技术，很多方面不懂，虽然看了不少参考
资料。
我的大致实验步骤：LV切割下来后，消化细胞，细胞板计数后，按照5000个细胞/孔，
每孔0.5ml 液体量，接种到non-treated 24-wells培养板，进行悬浮生长。
培养基为：DMEM/F12, bFGF,EGF, B27, N2。（每2-3天添加新鲜培养液0.5ml。）
今天是接种第9天，显微镜下观察，大量悬浮细胞，成片状，中间夹着着一些小的“神
经球”。
问题：
1，组织消化后接种，那些非神经干细胞来源的细胞，12-24小时后就不能存活了，
成为死细胞。这些死细胞如何可以从培养孔中清除？因为我每隔2天，仅仅添加等量的
新鲜培养基，那些死细胞仍然残留在培养孔里面。今天是第9天，虽然能看到神经球，
但是神经球周围大量成片的死细胞，很影响照相。
2，我这种情况，是否需要“半量换液”来清除死细胞？大家是如何进行半量换液
的？看了不少文献，还是有点模糊。
3，我的取材是1月龄、3月龄小鼠两组动物，请问这种月龄的小鼠，LV来源的NSC，
在培养第9-10天，神经球的数量和体积是不是应该很多、很大？我观察我的样本，神经
球很少（一个孔，不超过10个神经球），体积也很小。

l*o2013-07-22 07:07

3 楼

somebody already took it. thanks

h*o2013-07-22 07:07

4 楼

不会， adult NSC培养的前一个礼拜neurosphere 很少的
你看到的大部分片状的东西不是细胞，应该是debris，等到能看到neurophere的时候
要通过离心来除掉debris
我们都是养在flask里面，长出大量neurosphere以后在dissociate，然后进行下一步试
验的，那种直接养96孔板，离心去debris 貌似比较麻烦

J*92013-07-22 07:07

5 楼

谢谢赐教~！再追问几个技术问题：
1，如何通过离心去掉debris ？多少rpm？如果离心的话，神经球和debris不是都沉底
了吗？
2，你们原代养在flask里面的神经球，一般多久可以长出大量的神经球？如何提取神
经球？也就是只含有神经球，没有那些细胞杂质和碎片。如果能将神经球与其他死细胞
、组织碎片杂质分离出来，那么接下来的实验，就容易多了。
谢谢指点·！

【在 h*******o 的大作中提到】

: 不会， adult NSC培养的前一个礼拜neurosphere 很少的
: 你看到的大部分片状的东西不是细胞，应该是debris，等到能看到neurophere的时候
: 要通过离心来除掉debris
: 我们都是养在flask里面，长出大量neurosphere以后在dissociate，然后进行下一步试
: 验的，那种直接养96孔板，离心去debris 貌似比较麻烦

J*92013-07-22 07:07

6 楼

另外，在falsk里面养悬浮神经球，半量换液，如何操作？
吸管吸取瓶子里面陈旧培养液的时候，不是有可能将神经球也顺带吸取出来了吗？