请教做knockin老鼠，用EGFP标记好还是luciferase好？ - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

请教做knockin老鼠，用EGFP标记好还是luciferase好？

请教做knockin老鼠，用EGFP标记好还是luciferase好？# Biology - 生物学

w*42014-01-27 08:01

1 楼

就是发面包子先放油锅稍微煎煎，然后放水蒸煮熟那种，不是某种特指的哦。
做了几次了，也摸不到窍门。在旁边看着，锅里还有水的时候包子都长大了，白白的，
圆滚滚的，锅里没水了，一打开锅，噗～～～眼看着包子的皮瘪下去，然后颜色也变暗
，象没蒸好的包子，丑丑的，然后得把上面再煎煎才勉强能见人能吃。
是包子皮太薄？馅太多？锅里水放多了（大约一半包子高度）？开锅开早了？火力大或
小了？
谁快来指导我一下吧，多谢啊！

B*y2014-01-27 08:01

2 楼

平常e-Rewards点的挺辛苦的，e-Rewards $25也只想当于500 UA Miles而已，换
Restaurant $50还是比较划算的，如果你现在不需要去维持UA Miles的Activity的话。

l*g2014-01-27 08:01

3 楼

想申请EB1a，审稿不够，现在突击审稿，审了十来个，感觉太累，文章大多数是熟人编
辑发来的，不敢太马虎，每审一篇都要读好几篇相应的文献，太花时间。总算完成了十
个，想请教一个十个审稿申请EBA1够不够。个人感觉条件攒的差不多了，文章二十多篇
，其中一作八九篇，CNS一作一篇，有不少媒体报道，感觉审稿这块不足，加强了一下
，不知道十个够不够，请大家给个意见。谢谢！

Z*52014-01-27 08:01

4 楼

这两种荧光蛋白的检测机器我们动物房都有
要在C57老鼠里过表达一个基因，rtTA诱导的，然后和手头的MMTV-Cre老鼠杂交实现乳
腺组织特异性表达，看老鼠自发乳腺癌是否会增多。
现在想在基因后面加一个IRES-EGFP，或者IRES-Luciferase，用来指示目的基因的过
表达情况。不知道加哪个好。

s*u2014-01-27 08:01

5 楼

面团没有发酵好？

g*a2014-01-27 08:01

6 楼

Restaurant.com $50不是只值几块钱么....

b*02014-01-27 08:01

7 楼

you are strong, claim: authorship, contribution and media report. put your
review into contribution

【在 l********g 的大作中提到】

: 想申请EB1a，审稿不够，现在突击审稿，审了十来个，感觉太累，文章大多数是熟人编
: 辑发来的，不敢太马虎，每审一篇都要读好几篇相应的文献，太花时间。总算完成了十
: 个，想请教一个十个审稿申请EBA1够不够。个人感觉条件攒的差不多了，文章二十多篇
: ，其中一作八九篇，CNS一作一篇，有不少媒体报道，感觉审稿这块不足，加强了一下
: ，不知道十个够不够，请大家给个意见。谢谢！

Z*52014-01-27 08:01

8 楼

听说EGFP观察更容易，不需要加底物。但问题是需要激发光，老鼠的自发荧光会有干扰
。虽然EGFP灵敏度比Luciferase高，但是有本底的干扰导致实际灵敏度还不如
Luciferase。
Luciferase好处是可以定量，不受自发荧光干扰。但是观察前需要腹腔或者血液注射底
物。据说灵敏度可以达到100个细胞，然后随着距离体表的深度每增加0.5cm，检测的灵
敏度升高一个数量级的细胞数。
两者可以说各有优缺点。总体感觉luciferase可能更好。但是发表出来的论文中貌似转
基因的多数都是EGFP标记，而luciferase大多是用来标记打入老鼠的外源肿瘤细胞。
这方面没啥经验，请有经验的朋友给个建议。

【在 Z******5 的大作中提到】

: 这两种荧光蛋白的检测机器我们动物房都有
: 要在C57老鼠里过表达一个基因，rtTA诱导的，然后和手头的MMTV-Cre老鼠杂交实现乳
: 腺组织特异性表达，看老鼠自发乳腺癌是否会增多。
: 现在想在基因后面加一个IRES-EGFP，或者IRES-Luciferase，用来指示目的基因的过
: 表达情况。不知道加哪个好。

B*n2014-01-27 08:01

9 楼

是塌下去，还是回缩回去，回缩是正常的

B*y2014-01-27 08:01

10 楼

500 UA Miles值几块钱？Restaurant.com $50几块钱得等Deal，平常买不会少于10块钱
的。就当块肥一点的苍蝇肉吃吧。。。

【在 g********a 的大作中提到】

: Restaurant.com $50不是只值几块钱么....

l*22014-01-27 08:01

11 楼

越多越好吧，好象单独claim的话最好能有20个。

q*g2014-01-27 08:01

12 楼

我也不太懂，随便说一下。
我想你需要观察动物的乳腺，看该蛋白是否有表达。
如果你有红色的荧光蛋白，mCherry, Tomato之类的，肯定不存在自发荧光干扰得问题
。这应该是最好的选择。
但考虑到你看的自发乳腺癌，离表皮比较近，或许干扰比较小。这你需要查下文献。
luciferase用于活体观察没有问题。但如果你想分离乳腺细胞，做流式细胞仪分析，可
能荧光蛋白更好。

h*02014-01-27 08:01

13 楼

文学城里著名的毛毛妈说：和面要加小苏打，做好不能着急揭盖子，要等上5分钟再揭
锅盖。
不知是否管用？我自己没有试过。

【在 w*****4 的大作中提到】

: 就是发面包子先放油锅稍微煎煎，然后放水蒸煮熟那种，不是某种特指的哦。
: 做了几次了，也摸不到窍门。在旁边看着，锅里还有水的时候包子都长大了，白白的，
: 圆滚滚的，锅里没水了，一打开锅，噗～～～眼看着包子的皮瘪下去，然后颜色也变暗
: ，象没蒸好的包子，丑丑的，然后得把上面再煎煎才勉强能见人能吃。
: 是包子皮太薄？馅太多？锅里水放多了（大约一半包子高度）？开锅开早了？火力大或
: 小了？
: 谁快来指导我一下吧，多谢啊！

g*e2014-01-27 08:01

14 楼

99% time you can buy 50 restaurant.com certificate below 10.

【在 B******y 的大作中提到】

: 500 UA Miles值几块钱？Restaurant.com $50几块钱得等Deal，平常买不会少于10块钱
: 的。就当块肥一点的苍蝇肉吃吧。。。

G*02014-01-27 08:01

15 楼

可以了，准备申请材料还要花时间，这段时间再审一些

j*x2014-01-27 08:01

16 楼

我们一般用EGFP-Luc fusion protein，效果非常好

B*n2014-01-27 08:01

17 楼

冷了还是会缩的，一开始密封性好，空气在高温下会膨胀，但是遇冷就自然收缩了，所
以如果收缩是正常的，但是塌掉是不正常的，得问清楚是塌掉还是收缩
以前买生煎馒头的时候，冷的生煎一眼就看出来了，会比刚出锅的扁

【在 h********0 的大作中提到】

: 文学城里著名的毛毛妈说：和面要加小苏打，做好不能着急揭盖子，要等上5分钟再揭
: 锅盖。
: 不知是否管用？我自己没有试过。

h*a2014-01-27 08:01

18 楼

restaurant $50在二手板
我$2块钱一个求了一堆

【在 B******y 的大作中提到】

: 500 UA Miles值几块钱？Restaurant.com $50几块钱得等Deal，平常买不会少于10块钱
: 的。就当块肥一点的苍蝇肉吃吧。。。

d*i2014-01-27 08:01

19 楼

太强了！有这个最好。如果没有，需要分离细胞或者tissue用GFP，需要活体动物水平
观察，建议用luciferase。

【在 j****x 的大作中提到】

: 我们一般用EGFP-Luc fusion protein，效果非常好

B*n2014-01-27 08:01

20 楼

咔咔，还搜到了一个帖子
牛
http://www.guokr.com/question/508861/
今天老妈蒸馒头，又遇到“鬼捏馒头”了！先上图：
所谓的鬼捏馒头，是蒸馒头时遇到的一种非常奇怪的现象。我相信，很多北方经常吃馒
头的朋友，应该见过或者听说过这种现象。
具体描述如下：
通常，蒸一锅馒头大概少的有八九个，多的有十几二十几个。同样的面粉，同样的老面
头，同样的手工，同样的蒸锅。。。总之所有的条件都一样。就在蒸好之后，打开锅盖
的那一瞬间，有可能奇迹就产生了：只见一锅白白的馒头非常漂亮，可是，其中的某个
或者某几个馒头，眼睁睁从一个白白软软的馒头，迅速萎缩成一个硬邦邦的褐色面疙瘩
！整个过程，大概5秒钟左右可以完成！发生这种变化的馒头，有可能是在蒸笼的中央
位置，也可能是在靠边的位置，看不出有什么规律。
农村人迷信，就把这种现象叫做“鬼捏馒头”。意思是，馒头被鬼恶作剧，捏扁了。显
然，这是不可能的。
可是，我们又该如何解释这种现象呢？需要运用到哪些方面的知识呢？
百思不得其解啊！
-------------------------------
这个现象其实有个名称的，称为“面团缩死”。现在一般认为的形成原因如下。
蒸馒头的时候，馒头内的发酵气体受热膨胀，将内部淀粉和面筋（主要是蛋白质）一起
挤成蜂窝状的小室，从而形成大而蓬松的馒头。又由于馒头表皮和水蒸气直接接触，表
皮淀粉、面筋和多量的水混合受热，形成较为密实的皮层。打个比方，馒头就好比一个
薄皮包裹的多孔结构。
这个多孔结构内部存在几个力：一个是淀粉-水混合物的支持力，因为淀粉水混合物在
高温下流动性较强，温度降低则刚性较强（热馒头软，冷馒头硬就是这个道理），还有
一个是面筋相互交联形成的网状结构的回缩力。这个回缩力，实际上是馒头“筋道”口
感的一大来源。
在锅内时，内部的小室结构除了依靠淀粉支撑外，较高温度的气体也对维持小室形态起
到一定帮助。但当开盖后，温度温迅速下降，一些小室会由于气压变化而破裂。在正常
情况下，随着温度下降，由于淀粉-水混合物刚性增加，能够继续支持绝大多数小室结
构不坍塌。但是在一些情况下，由于小室壁被破坏，淀粉-水支持力不能抵抗面筋的回
缩力，使的更多的小室壁被破坏，形成连锁反应，最后使得馒头内部气体被压出，馒头
体积缩小，于是就造成了“面团缩死”的现象。
面团缩死是一个随机产生的现象，从总体来说，和所用面粉的面筋含量、面粉内杂质含
量和淋水等因素有一些关系。面筋含量过高的面粉，由于回缩力较强，较容易发生面团
缩死。有杂质和被淋水也会发生。一般而言，在生产上，有1.7%左右概率发生面团缩死
现象。
-----------------------------------------
我来补充一点，发生塌缩的馒头或者其他面制品，最大的可能是蒸的过程中沾了水。
1、蒸锅下部的水位过高，导致沸水冲入蒸笼接触到了馒头包子，开盖后就会立刻塌缩。
2、蒸锅下部的水不够清，曾经煮过东西或者甚至是粥类，造成水位虽然不高，但是会
产生大量的气泡，冒入蒸笼。
一般情况下你直接打开蒸笼，哪怕存在压差，也很难出现塌缩，但是过程中如果沾了水
，就会看到以肉眼可见的速度塌缩下去
本人有丰富经验，但是不能解释为何沾水的蒸物就会迅速塌缩。

g*a2014-01-27 08:01

21 楼

以前只知道便宜，不知道这么便宜，给跪了...那看来还是UA 500miles比较合算...
不过还是谢谢楼主分享信息~

【在 h********a 的大作中提到】

: restaurant $50在二手板
: 我$2块钱一个求了一堆

r*z2014-01-27 08:01

22 楼

你这个IRES-EGFP是加在最后一个外显子的终止密码子后面还是插入到最后一个外显子
中？

B*n2014-01-27 08:01

23 楼

http://www.ld001.com/OnlinePaperShow.aspx?StagesId=20100701&Edi

B*y2014-01-27 08:01

24 楼

昏，这里的二手板还有这好处。。。谢谢了！

【在 h********a 的大作中提到】

: restaurant $50在二手板
: 我$2块钱一个求了一堆

s*a2014-01-27 08:01

25 楼

EGFP也可以定量吧，如果是过表达我想自发荧光应该不是问题吧。
同意楼上的EGFP-luc，双保险。

【在 Z******5 的大作中提到】

: 听说EGFP观察更容易，不需要加底物。但问题是需要激发光，老鼠的自发荧光会有干扰
: 。虽然EGFP灵敏度比Luciferase高，但是有本底的干扰导致实际灵敏度还不如
: Luciferase。
: Luciferase好处是可以定量，不受自发荧光干扰。但是观察前需要腹腔或者血液注射底
: 物。据说灵敏度可以达到100个细胞，然后随着距离体表的深度每增加0.5cm，检测的灵
: 敏度升高一个数量级的细胞数。
: 两者可以说各有优缺点。总体感觉luciferase可能更好。但是发表出来的论文中貌似转
: 基因的多数都是EGFP标记，而luciferase大多是用来标记打入老鼠的外源肿瘤细胞。
: 这方面没啥经验，请有经验的朋友给个建议。

w*42014-01-27 08:01

26 楼

面团发的就我自己感觉还挺大的。。。

【在 s**********u 的大作中提到】

: 面团没有发酵好？

a*x2014-01-27 08:01

27 楼

汗。。。

【在 B******y 的大作中提到】

: 昏，这里的二手板还有这好处。。。谢谢了！

w*42014-01-27 08:01

28 楼

谢谢黑桃mm的回帖，你真有科研精神啊，呵呵，回头我在仔细研究研究你的帖子：）我
觉得我的情况应该是回缩，是整个外皮都缩回去，所以开始的时候看着皱皱的，颜色也
从白变成发暗。回缩我觉得应该不正常吧，以前还看过一次水煎包的视频，别人打开锅
，包子好好的，实在想不明白啊。。。
我同样的面水比例，水温，发面效果，馅的量，蒸的包子就好好的，白白的，宣宣的，
软软的，就是煎就不行，难看死了，还招待了一次客人，真丢脸啊。。。我先试试少点
馅，水稍微少放点看效果会不会好些

【在 B********n 的大作中提到】

: 是塌下去，还是回缩回去，回缩是正常的

r*e2014-01-27 08:01

29 楼

我都是$45换$25macy's gc

【在 B******y 的大作中提到】

: 平常e-Rewards点的挺辛苦的，e-Rewards $25也只想当于500 UA Miles而已，换
: Restaurant $50还是比较划算的，如果你现在不需要去维持UA Miles的Activity的话。

T*u2014-01-27 08:01

30 楼

我做过几次，有时非常好，一个都不塌，有时就很多塌了，我也不知道是什么道理，都
是一样做的

【在 w*****4 的大作中提到】

: 谢谢黑桃mm的回帖，你真有科研精神啊，呵呵，回头我在仔细研究研究你的帖子：）我
: 觉得我的情况应该是回缩，是整个外皮都缩回去，所以开始的时候看着皱皱的，颜色也
: 从白变成发暗。回缩我觉得应该不正常吧，以前还看过一次水煎包的视频，别人打开锅
: ，包子好好的，实在想不明白啊。。。
: 我同样的面水比例，水温，发面效果，馅的量，蒸的包子就好好的，白白的，宣宣的，
: 软软的，就是煎就不行，难看死了，还招待了一次客人，真丢脸啊。。。我先试试少点
: 馅，水稍微少放点看效果会不会好些

B*y2014-01-27 08:01

31 楼

平常我都看吃的去了，e-Rewards换PizzaHut是1：1的兑换，不过$4的Coupon必须买$20
以上的消费，比较坑爹。。。

【在 r****e 的大作中提到】

: 我都是$45换$25macy's gc

r*62014-01-27 08:01

32 楼

关火以后闷5分钟再开盖子。老婆做了几年了，一开始也是塌，我老妈来了才搞定。

g*n2014-01-27 08:01

33 楼

restaurant经常25刀券卖2刀吧
50也就4刀
不过话说
e-rewards我怎么总也赚不到分啊
每次只能赚几毛钱
到现在还不到10块钱。。

r*n2014-01-27 08:01

34 楼

恩，我妈也说下面屉里的容易塌是被水滋死了。。

【在 B********n 的大作中提到】

: 咔咔，还搜到了一个帖子
: 牛
: http://www.guokr.com/question/508861/
: 今天老妈蒸馒头，又遇到“鬼捏馒头”了！先上图：
: 所谓的鬼捏馒头，是蒸馒头时遇到的一种非常奇怪的现象。我相信，很多北方经常吃馒
: 头的朋友，应该见过或者听说过这种现象。
: 具体描述如下：
: 通常，蒸一锅馒头大概少的有八九个，多的有十几二十几个。同样的面粉，同样的老面
: 头，同样的手工，同样的蒸锅。。。总之所有的条件都一样。就在蒸好之后，打开锅盖
: 的那一瞬间，有可能奇迹就产生了：只见一锅白白的馒头非常漂亮，可是，其中的某个

B*y2014-01-27 08:01

35 楼

我一直以为Restaurant是个比较好的东西，没想到卖的那么贱。。。e-Rewards 需要你
在My Profile里面把你的兴趣扩大一点，最好是全选，于是你就会有大量的Survey涌入
。我一个月拿10块钱不是问题。但Survey太多也很烦，很多我干脆就放弃了。。。

【在 g**n 的大作中提到】

: restaurant经常25刀券卖2刀吧
: 50也就4刀
: 不过话说
: e-rewards我怎么总也赚不到分啊
: 每次只能赚几毛钱
: 到现在还不到10块钱。。

w*42014-01-27 08:01

36 楼

前天有做了一次，面稍微硬了一点点，大概面水2：1吧，盖锅前放的水少些，三分之一
多一点包子高度，一点没塌，以后就这么弄了～

d*e2014-01-27 08:01

37 楼

好奇在说什么erewards，但是一看把restaurant当成宝，感觉很悲剧。。。

B*n2014-01-27 08:01

38 楼

体积比？重量比？

【在 w*****4 的大作中提到】

: 前天有做了一次，面稍微硬了一点点，大概面水2：1吧，盖锅前放的水少些，三分之一
: 多一点包子高度，一点没塌，以后就这么弄了～

B*y2014-01-27 08:01

39 楼

http://www.e-rewards.com/home.do
主要是我经常在外面吃饭，很多餐馆都是在Restaurant的List里面。以前都是很贵的买
Restaurant的Coupon，亏了很多钱啦。。。

【在 d********e 的大作中提到】

: 好奇在说什么erewards，但是一看把restaurant当成宝，感觉很悲剧。。。

s*l2014-01-27 08:01

40 楼

水煎包不知道，但是如果是蒸馒头或者包子，一定记得馒头揉好或包子包好后，放足够
的时间让它们重新发酵膨胀起来再凉水上屉。我这么做从来没失败过。
揭锅后有的缩有的不缩我怀疑是先揉好的没缩，因为之后放够了足够的时间，而后揉的
因为揉完直接进锅所以后来就塌了。

y*f2014-01-27 08:01

41 楼

难道这个也分人的吗，我的要75$才能换25macy
气愤

【在 r****e 的大作中提到】

: 我都是$45换$25macy's gc

x*g2014-01-27 08:01

42 楼

if you also put in some baking powder besides yeast, then it won't shrink.

【在 w*****4 的大作中提到】

a*x2014-01-27 08:01

43 楼

看来是的。俺是70

【在 y*****f 的大作中提到】

: 难道这个也分人的吗，我的要75$才能换25macy
: 气愤

y*f2014-01-27 08:01

44 楼

那只能xmjdh

【在 a***x 的大作中提到】

: 看来是的。俺是70

r*e2014-01-27 08:01

45 楼

I've had an account with them for many years, though.

【在 y*****f 的大作中提到】

: 难道这个也分人的吗，我的要75$才能换25macy
: 气愤

g*n2014-01-27 08:01

46 楼

我收到的survey其实挺多的
但是每次认真做了一大半就告诉我不符合
然后就只得个一两毛钱。。。
后来我就懒得做了。。。

【在 B******y 的大作中提到】

: 我一直以为Restaurant是个比较好的东西，没想到卖的那么贱。。。e-Rewards 需要你
: 在My Profile里面把你的兴趣扩大一点，最好是全选，于是你就会有大量的Survey涌入
: 。我一个月拿10块钱不是问题。但Survey太多也很烦，很多我干脆就放弃了。。。

r*y2014-01-27 08:01

47 楼

it was cheap when it came out... buy then increased the price....

w*e2014-01-27 08:01

48 楼

跟你的账户是什么邀请来的有关。
如果是开macys信用卡得到的邀请注册，才能45换25macy

【在 y*****f 的大作中提到】

: 难道这个也分人的吗，我的要75$才能换25macy
: 气愤

s*g2014-01-27 08:01

49 楼

restaurant.com的certificate对我来说就是废纸

l*o2014-01-27 08:01

50 楼

啊～～我还是上次申完chase卡之后大家聊天说起来ereward，等了一些天才申请了一个，
开始发到某人email，后来发现都是错过survey所以转到我email了，
也没好好做，每次都故意不合格，
可是到现在大概也就俩月？也早超过10刀了
你加油啊。

【在 g**n 的大作中提到】

: restaurant经常25刀券卖2刀吧
: 50也就4刀
: 不过话说
: e-rewards我怎么总也赚不到分啊
: 每次只能赚几毛钱
: 到现在还不到10块钱。。

l*o2014-01-27 08:01

51 楼

个，
看了下时间，也就40天。。

【在 l*****o 的大作中提到】

:
: 啊～～我还是上次申完chase卡之后大家聊天说起来ereward，等了一些天才申请了一个，
: 开始发到某人email，后来发现都是错过survey所以转到我email了，
: 也没好好做，每次都故意不合格，
: 可是到现在大概也就俩月？也早超过10刀了
: 你加油啊。