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qPCR一个问题# Biology - 生物学
k*e
1
接了一review,是一个原来被major revision,major revision之后被reject,reject之后作者appeal。我现在就在审这个appeal。请问这个的情况是应该象平时那样审,还是看看作者有没有在major revision的时候have addressed all the referees'
concerns. 另外再问一个,可不可以就这个审appeal在PL的judgement部分作文章?如果可以,该怎么做?谢谢了!
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i*0
2
这个问题可能问的比较的挫:我从同事们拿来几个cDNA的样品(不同gene 的KO HSC的
样品),想看看一个target gene的表达,在不知道同事们做1st strand synthesis 起
始RNA 样品量的情况下,仅靠reference gene (比如beta-actin)和target gene 的
相对ct数值的差异能确定不同样品中target gene 的表达么?样品浓度差异会不会对结
果造成影响?
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c*g
3


【在 k******e 的大作中提到】
: 接了一review,是一个原来被major revision,major revision之后被reject,reject之后作者appeal。我现在就在审这个appeal。请问这个的情况是应该象平时那样审,还是看看作者有没有在major revision的时候have addressed all the referees'
: concerns. 另外再问一个,可不可以就这个审appeal在PL的judgement部分作文章?如果可以,该怎么做?谢谢了!

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l*e
4
差得不多的话(比如说5倍以内), 应该没关系. 反正最后都要用house keeping gene
normalize一下的. 不放心的话, 可以做2个house keeping

【在 i*********0 的大作中提到】
: 这个问题可能问的比较的挫:我从同事们拿来几个cDNA的样品(不同gene 的KO HSC的
: 样品),想看看一个target gene的表达,在不知道同事们做1st strand synthesis 起
: 始RNA 样品量的情况下,仅靠reference gene (比如beta-actin)和target gene 的
: 相对ct数值的差异能确定不同样品中target gene 的表达么?样品浓度差异会不会对结
: 果造成影响?

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d*i
5
个人理解:用reference gene矫正过以后的同一个group里各个sample如果数值稳定结
果就可以用。
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f*f
6
严格来说,样品浓度不同会导致rt-pcr效率不同,一般最好得确定pcr线性范围,不过
rt本身是相对定量,所以尽量保证reference gene的Ct相当。

【在 i*********0 的大作中提到】
: 这个问题可能问的比较的挫:我从同事们拿来几个cDNA的样品(不同gene 的KO HSC的
: 样品),想看看一个target gene的表达,在不知道同事们做1st strand synthesis 起
: 始RNA 样品量的情况下,仅靠reference gene (比如beta-actin)和target gene 的
: 相对ct数值的差异能确定不同样品中target gene 的表达么?样品浓度差异会不会对结
: 果造成影响?

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i*0
7
谢谢大家的评论。我准备先做一个house keeping gene 的qPCR,然后做dilution,把
它们的ct值调到相当,再做我要的target gene 的qPCR吧。
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