f*j
2 楼
原来的吸尘器好像不为宠物家庭设计的 每次吸地只能把埋在地毯里面的狗毛吸到表面
上来 然后地毯看上去更脏了的样子
好像有一种吸尘器是专门给宠物毛设计的 有用的好的牌子请同学们推荐一下吧 多谢
如果有人可以教我怎么发包子的话 我尽量包子答谢
上来 然后地毯看上去更脏了的样子
好像有一种吸尘器是专门给宠物毛设计的 有用的好的牌子请同学们推荐一下吧 多谢
如果有人可以教我怎么发包子的话 我尽量包子答谢
x*e
3 楼
最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
g*0
4 楼
I want to be a billionaire.
I want rainbows and unicorns, too.
I want rainbows and unicorns, too.
m*h
5 楼
miele,一劳永逸
【在 f********j 的大作中提到】
: 原来的吸尘器好像不为宠物家庭设计的 每次吸地只能把埋在地毯里面的狗毛吸到表面
: 上来 然后地毯看上去更脏了的样子
: 好像有一种吸尘器是专门给宠物毛设计的 有用的好的牌子请同学们推荐一下吧 多谢
: 如果有人可以教我怎么发包子的话 我尽量包子答谢
【在 f********j 的大作中提到】
: 原来的吸尘器好像不为宠物家庭设计的 每次吸地只能把埋在地毯里面的狗毛吸到表面
: 上来 然后地毯看上去更脏了的样子
: 好像有一种吸尘器是专门给宠物毛设计的 有用的好的牌子请同学们推荐一下吧 多谢
: 如果有人可以教我怎么发包子的话 我尽量包子答谢
s*s
6 楼
没空debug的，摇20个试管，combine中提不就行了
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
x*o
7 楼
miele跟Dyson比哪个更强大啊
a*d
8 楼
isopropanol precipitation -20度 overnight， then spin down
x*o
9 楼
r*e
10 楼
你怎么知道是降解？产量少？是不是抗生素不行了啊，摇时间长了就这样。
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
m*h
11 楼
of course Miele
【在 x********o 的大作中提到】
: miele跟Dyson比哪个更强大啊
【在 x********o 的大作中提到】
: miele跟Dyson比哪个更强大啊
s*2
12 楼
如果是Amp抗性的话，摇菌别超过14小时。或者用carbenicillin
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
f*j
13 楼
好贵啊 有没有100多块的推荐啊
【在 m***h 的大作中提到】
: of course Miele
【在 m***h 的大作中提到】
: of course Miele
i*l
14 楼
见过这种（2例）
1.路霉素扩增质粒不扩增细菌
2用小管（同楼上） 或者固体平板长，平板长完了刮下来细菌用
1.路霉素扩增质粒不扩增细菌
2用小管（同楼上） 或者固体平板长，平板长完了刮下来细菌用
p*f
15 楼
I like Miele for its quietness and cleanliness. The turbo power tool works
extremely well with carpet as well as floors. However, the smaller
attachments do not have the extra power that only comes with the turbo power
tool. So when it comes to clean hair off of the cat tree, I still have to
use the old sticky roller.
【在 m***h 的大作中提到】
: of course Miele
extremely well with carpet as well as floors. However, the smaller
attachments do not have the extra power that only comes with the turbo power
tool. So when it comes to clean hair off of the cat tree, I still have to
use the old sticky roller.
【在 m***h 的大作中提到】
: of course Miele
x*e
16 楼
这样么？那为什么摇5ml没问题，以前其他质粒中提也没问题
【在 s**2 的大作中提到】
: 如果是Amp抗性的话，摇菌别超过14小时。或者用carbenicillin
【在 s**2 的大作中提到】
: 如果是Amp抗性的话，摇菌别超过14小时。或者用carbenicillin
t*u
17 楼
对付tile有推荐吗？
x*e
18 楼
现在就准备这么做
【在 s******s 的大作中提到】
: 没空debug的，摇20个试管，combine中提不就行了
【在 s******s 的大作中提到】
: 没空debug的，摇20个试管，combine中提不就行了
c*d
19 楼
My experience:
Dyson dc25 is great for bigger house but above your budget ($200-$300).
Dyson dc24 may be ok if you have smaller space and cheaper. sometimes Frys
have old model Dyson dc17 refurbished. The best deal is to check target
clearance if you are not in rush. I did not get the animal model (which has
an additional accessory for $$$)
Hoover windtunnel is also great (below $100) but only for the first six months or so then
lose suction.
【在 f********j 的大作中提到】
: 原来的吸尘器好像不为宠物家庭设计的 每次吸地只能把埋在地毯里面的狗毛吸到表面
: 上来 然后地毯看上去更脏了的样子
: 好像有一种吸尘器是专门给宠物毛设计的 有用的好的牌子请同学们推荐一下吧 多谢
: 如果有人可以教我怎么发包子的话 我尽量包子答谢
Dyson dc25 is great for bigger house but above your budget ($200-$300).
Dyson dc24 may be ok if you have smaller space and cheaper. sometimes Frys
have old model Dyson dc17 refurbished. The best deal is to check target
clearance if you are not in rush. I did not get the animal model (which has
an additional accessory for $$$)
Hoover windtunnel is also great (below $100) but only for the first six months or so then
lose suction.
【在 f********j 的大作中提到】
: 原来的吸尘器好像不为宠物家庭设计的 每次吸地只能把埋在地毯里面的狗毛吸到表面
: 上来 然后地毯看上去更脏了的样子
: 好像有一种吸尘器是专门给宠物毛设计的 有用的好的牌子请同学们推荐一下吧 多谢
: 如果有人可以教我怎么发包子的话 我尽量包子答谢
x*e
20 楼
菌浓度正常，用isopropanol提完跑胶发现100bp以下有很亮的一团，质粒所在的条带浓
度却很特别低
摇了大概16小时
【在 r***e 的大作中提到】
: 你怎么知道是降解？产量少？是不是抗生素不行了啊，摇时间长了就这样。
度却很特别低
摇了大概16小时
【在 r***e 的大作中提到】
: 你怎么知道是降解？产量少？是不是抗生素不行了啊，摇时间长了就这样。
m*u
21 楼
$100以下，推荐eureka，带pet字样的款，walmart就有。我当年买的也就60块吧，都用
了3年多了，还是很好用。
了3年多了，还是很好用。
s*s
22 楼
和生长曲线有关。你如果严格控制接种方法，接种量，时间等，
大瓶子多半也能摇出来，不过一般不值得这么做，直接多摇几
管子就行了
【在 x********e 的大作中提到】
: 这样么？那为什么摇5ml没问题，以前其他质粒中提也没问题
大瓶子多半也能摇出来，不过一般不值得这么做，直接多摇几
管子就行了
【在 x********e 的大作中提到】
: 这样么？那为什么摇5ml没问题，以前其他质粒中提也没问题
f*j
23 楼
Thanks a lot.
I only got a small apartment, so I guess the dc24 should be enough for me
has
months or so then
【在 c********d 的大作中提到】
: My experience:
: Dyson dc25 is great for bigger house but above your budget ($200-$300).
: Dyson dc24 may be ok if you have smaller space and cheaper. sometimes Frys
: have old model Dyson dc17 refurbished. The best deal is to check target
: clearance if you are not in rush. I did not get the animal model (which has
: an additional accessory for $$$)
: Hoover windtunnel is also great (below $100) but only for the first six months or so then
: lose suction.
I only got a small apartment, so I guess the dc24 should be enough for me
has
months or so then
【在 c********d 的大作中提到】
: My experience:
: Dyson dc25 is great for bigger house but above your budget ($200-$300).
: Dyson dc24 may be ok if you have smaller space and cheaper. sometimes Frys
: have old model Dyson dc17 refurbished. The best deal is to check target
: clearance if you are not in rush. I did not get the animal model (which has
: an additional accessory for $$$)
: Hoover windtunnel is also great (below $100) but only for the first six months or so then
: lose suction.
b*s
24 楼
你检查下你中提的kit有没有加RNase
【在 x********e 的大作中提到】
: 菌浓度正常，用isopropanol提完跑胶发现100bp以下有很亮的一团，质粒所在的条带浓
: 度却很特别低
: 摇了大概16小时
【在 x********e 的大作中提到】
: 菌浓度正常，用isopropanol提完跑胶发现100bp以下有很亮的一团，质粒所在的条带浓
: 度却很特别低
: 摇了大概16小时
a*g
25 楼
同意楼上，RNA把柱子给饱和了
【在 b*****s 的大作中提到】
: 你检查下你中提的kit有没有加RNase
【在 b*****s 的大作中提到】
: 你检查下你中提的kit有没有加RNase
s*g
26 楼
我曾大提死活出不来，最后换了新买的抗生素Amp，出来了！
【在 r***e 的大作中提到】
: 你怎么知道是降解？产量少？是不是抗生素不行了啊，摇时间长了就这样。
【在 r***e 的大作中提到】
: 你怎么知道是降解？产量少？是不是抗生素不行了啊，摇时间长了就这样。
x*e
27 楼
加了 跟试剂无关
用QIAGEN的kit或者isopropanol提都不行
【在 b*****s 的大作中提到】
: 你检查下你中提的kit有没有加RNase
用QIAGEN的kit或者isopropanol提都不行
【在 b*****s 的大作中提到】
: 你检查下你中提的kit有没有加RNase
x*e
28 楼
我是有positive ctrl的
空载体没问题，有insertion的不行。而且insertion的位置貌似还有关系
【在 s*****g 的大作中提到】
: 我曾大提死活出不来，最后换了新买的抗生素Amp，出来了！
空载体没问题，有insertion的不行。而且insertion的位置貌似还有关系
【在 s*****g 的大作中提到】
: 我曾大提死活出不来，最后换了新买的抗生素Amp，出来了！
r*k
29 楼
我maxiprep的时候遇到过类似情况，miniprep没问题，但是maxiprep出来的consturct
，transfect到细胞里面的时候就是表达不出蛋白。后来发现可能是maxiprep的时候用
枪吹的太剧烈了，导致dna被切断了，跑胶的时候很多弥散。
，transfect到细胞里面的时候就是表达不出蛋白。后来发现可能是maxiprep的时候用
枪吹的太剧烈了，导致dna被切断了，跑胶的时候很多弥散。
r*n
30 楼
我遇到过好多次很类似的情况，应该是construct某种原因不稳定或者有一定毒性。我
出现问题的construct里面共同点是有很多loxP site，还有很多别的重复的sequence。
Culture总是无法扩大。没有这些序列的载体就没什么问题。最后合并了多个小culture
来提高产量。另外我的经验是这些construct在耐受性好的细胞里稳定些，比如NEB的5-
alpha F'Iq或者Invitrogen的stbl cell。
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
出现问题的construct里面共同点是有很多loxP site，还有很多别的重复的sequence。
Culture总是无法扩大。没有这些序列的载体就没什么问题。最后合并了多个小culture
来提高产量。另外我的经验是这些construct在耐受性好的细胞里稳定些，比如NEB的5-
alpha F'Iq或者Invitrogen的stbl cell。
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
t*z
31 楼
顶。是这个道理。没有抗生素的选择压力，细菌就倾向于不保留质粒。
【在 r***e 的大作中提到】
: 你怎么知道是降解？产量少？是不是抗生素不行了啊，摇时间长了就这样。
【在 r***e 的大作中提到】
: 你怎么知道是降解？产量少？是不是抗生素不行了啊，摇时间长了就这样。
m*z
32 楼
最后怎么解决的？我现在面临同样的问题，更惨的是我连小提都拿不到质粒了。。。
culture
5-
【在 r********n 的大作中提到】
: 我遇到过好多次很类似的情况，应该是construct某种原因不稳定或者有一定毒性。我
: 出现问题的construct里面共同点是有很多loxP site，还有很多别的重复的sequence。
: Culture总是无法扩大。没有这些序列的载体就没什么问题。最后合并了多个小culture
: 来提高产量。另外我的经验是这些construct在耐受性好的细胞里稳定些，比如NEB的5-
: alpha F'Iq或者Invitrogen的stbl cell。
culture
5-
【在 r********n 的大作中提到】
: 我遇到过好多次很类似的情况，应该是construct某种原因不稳定或者有一定毒性。我
: 出现问题的construct里面共同点是有很多loxP site，还有很多别的重复的sequence。
: Culture总是无法扩大。没有这些序列的载体就没什么问题。最后合并了多个小culture
: 来提高产量。另外我的经验是这些construct在耐受性好的细胞里稳定些，比如NEB的5-
: alpha F'Iq或者Invitrogen的stbl cell。
x*e
33 楼
你怎么知道是对的菌呢？如果小提都没有，可能根本没质粒啊
【在 m*****z 的大作中提到】
: 最后怎么解决的？我现在面临同样的问题，更惨的是我连小提都拿不到质粒了。。。
:
: culture
: 5-
【在 m*****z 的大作中提到】
: 最后怎么解决的？我现在面临同样的问题，更惨的是我连小提都拿不到质粒了。。。
:
: culture
: 5-
S*a
34 楼
我刚遇到类似的问题解决了，希望解决方案对你有帮助。
我的质粒表达hairpin shRNA,对细菌有毒性。涂板的时候克隆长出来没有问题，但是摇
菌的时候长的不好，拿到的质粒dna浓度很稀。
我是买来的质粒，所以打电话问了公司客服。他们建议：
1.用 terrific broth (TB)而不是普通LB摇菌；
2.用 carbenicillin，不要用Ampicillin (如果你的细菌是amp抗性的话）；
3.如果还不行，可以尝试room temperature 摇菌两到三天。
我的问题换了TB就解决了，祝你好运！
我的质粒表达hairpin shRNA,对细菌有毒性。涂板的时候克隆长出来没有问题，但是摇
菌的时候长的不好，拿到的质粒dna浓度很稀。
我是买来的质粒，所以打电话问了公司客服。他们建议：
1.用 terrific broth (TB)而不是普通LB摇菌；
2.用 carbenicillin，不要用Ampicillin (如果你的细菌是amp抗性的话）；
3.如果还不行，可以尝试room temperature 摇菌两到三天。
我的问题换了TB就解决了，祝你好运！
L*T
35 楼
你咋测定质粒浓度的？如果像你描述这样电泳结果，很可能大部分EB被前面的RNA结合
了，说不定你质粒的量其实还可以。另外肯定一点你大抽Kit的RNase不足。
【在 x********e 的大作中提到】
: 菌浓度正常，用isopropanol提完跑胶发现100bp以下有很亮的一团，质粒所在的条带浓
: 度却很特别低
: 摇了大概16小时
了，说不定你质粒的量其实还可以。另外肯定一点你大抽Kit的RNase不足。
【在 x********e 的大作中提到】
: 菌浓度正常，用isopropanol提完跑胶发现100bp以下有很亮的一团，质粒所在的条带浓
: 度却很特别低
: 摇了大概16小时
x*e
36 楼
取1ul跑电泳，EB不可能被RNA deplete
之所以觉得是降解的DNA而不是RNA，是因为我两个样品一个是摇了马上提，另一个过了
两三个小时后提，后者的非特异条带比前者亮很多
【在 L****T 的大作中提到】
: 你咋测定质粒浓度的？如果像你描述这样电泳结果，很可能大部分EB被前面的RNA结合
: 了，说不定你质粒的量其实还可以。另外肯定一点你大抽Kit的RNase不足。
之所以觉得是降解的DNA而不是RNA，是因为我两个样品一个是摇了马上提，另一个过了
两三个小时后提，后者的非特异条带比前者亮很多
【在 L****T 的大作中提到】
: 你咋测定质粒浓度的？如果像你描述这样电泳结果，很可能大部分EB被前面的RNA结合
: 了，说不定你质粒的量其实还可以。另外肯定一点你大抽Kit的RNase不足。
m*z
37 楼
colony genotyping是对的。。。。
【在 x********e 的大作中提到】
: 你怎么知道是对的菌呢？如果小提都没有，可能根本没质粒啊
【在 x********e 的大作中提到】
: 你怎么知道是对的菌呢？如果小提都没有，可能根本没质粒啊
l*g
38 楼
质粒不稳定，size down了，降低温度到30度过夜，应该可以解决问题
l*g
39 楼
病毒载体这种情况也不少，我用30度长过夜解决问题。换Stabl3或者4对于我的经验是
效果有限。
效果有限。
x*e
40 楼
30度是个什么原理呢？我只知道BAC有的是要在30度摇
【在 l*****g 的大作中提到】
: 病毒载体这种情况也不少，我用30度长过夜解决问题。换Stabl3或者4对于我的经验是
: 效果有限。
【在 l*****g 的大作中提到】
: 病毒载体这种情况也不少，我用30度长过夜解决问题。换Stabl3或者4对于我的经验是
: 效果有限。
q*7
41 楼
E*i
42 楼
EPI400试试吧
或者PCR整个质粒
或者PCR整个质粒
s*a
43 楼
我遇到过类似情况，最后问题竟然是 isoproponol，可能分装到塑料管里的失效了，后
来用的原装棕色瓶里的，问题就解决了。之前浪费了好多maxi。
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
来用的原装棕色瓶里的，问题就解决了。之前浪费了好多maxi。
【在 x********e 的大作中提到】
: 最近构建了几个12k的construct, 小提酶切检验送测序都没问题。但当我想做中提就死
: 活做不出。目前troubleshooting的结果是做50-100ml的overnight culture质粒就会降
: 结解。有人遇到过类似的情况吗？有没有好的解决方法？
x*e
44 楼
我的问题更离奇一点。我的positive ctrl质粒中提一点问题没有。最后是做了好多个小
提合一起解决的。TE溶的时候发现DNA特别难溶解，我放37度摇床里过夜了precipitati
on才消失。不知道是不是这个原因用kit提不出来。
【在 s**********a 的大作中提到】
: 我遇到过类似情况，最后问题竟然是 isoproponol，可能分装到塑料管里的失效了，后
: 来用的原装棕色瓶里的，问题就解决了。之前浪费了好多maxi。
提合一起解决的。TE溶的时候发现DNA特别难溶解，我放37度摇床里过夜了precipitati
on才消失。不知道是不是这个原因用kit提不出来。
【在 s**********a 的大作中提到】
: 我遇到过类似情况，最后问题竟然是 isoproponol，可能分装到塑料管里的失效了，后
: 来用的原装棕色瓶里的，问题就解决了。之前浪费了好多maxi。
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