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有没有什么方法让抗体进入活的细胞内
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x*e
2
抗体进入细胞内不乱套了?

【在 h******n 的大作中提到】
: Rt
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z*6
3
弱问给抗体加个membrane permeabilized的peptide能不能实现这个...
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A*y
4
No, it is way too big.

【在 z*******6 的大作中提到】
: 弱问给抗体加个membrane permeabilized的peptide能不能实现这个...
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l*g
5
抗体不仅可以进入细胞,还可以再出来
搜关键词 antibody endocytosis

【在 x********e 的大作中提到】
: 抗体进入细胞内不乱套了?
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f*f
6
你是问技术手段么?micro-injection就可以。

【在 h******n 的大作中提到】
: Rt
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j*i
7
I might have a solution, but why this is useful?
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s*y
8
可是这个不算数吧?因为并没有真正进入细胞质内。虽然有非常小的一部分也能通过某
些未知途径而进入细胞质,但是大部分都被裹在泡泡内。

【在 l******g 的大作中提到】
: 抗体不仅可以进入细胞,还可以再出来
: 搜关键词 antibody endocytosis

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h*n
9
我是想target细胞膜里面的一个蛋白,但是不是表达在表面,所以想用什么方法让抗体
停留在细胞膜里面。
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l*a
10
你这回帖真是有一种满满的ws的味道

【在 j******i 的大作中提到】
: I might have a solution, but why this is useful?
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s*9
12
如果你可以让抗体efficiently进入细胞内,我可以非常负责的说,明天就专利这个技
术(想法),10年之内你就可以获得noble prize,20年之内你就是世界首富。
如果抗体可以进入细胞内,你可以target无数的transcription factor,
intracellular protein,调节protein-protein interaction,整个生物医药将发生
革命,创造无数的就业机会。
抗体size太大,要跨膜几乎不可能。当然你说,可以通过endocytosis,但是但是进入
endosome就出不来了(这个也是SiRNA最大的问题)。你如果能,在不toxic细胞的情况
下,控制让抗体(甚至siRNA)出endosome就足够赚很多很多钱了。

【在 j******i 的大作中提到】
: I might have a solution, but why this is useful?
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x*e
13
我是说epitope暴露在细胞质里

【在 l******g 的大作中提到】
: 抗体不仅可以进入细胞,还可以再出来
: 搜关键词 antibody endocytosis

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j*i
14
看来真是个演说的好手!能把生物说的这么激动人心!恕我愚昧,有几个地方不懂。(
1)如果要跟踪protein-protein interation,难道不是用基因编辑的方法在内源蛋白
上加个标记更可行?(2)即使用某种方法把抗体转到细胞质,不是还需要加二抗和底
物吗?(3)我确实有方法将小蛋白转进细胞质,抗体可能太大了(150kd?),看来成不
了首富了。

【在 s****9 的大作中提到】
: 如果你可以让抗体efficiently进入细胞内,我可以非常负责的说,明天就专利这个技
: 术(想法),10年之内你就可以获得noble prize,20年之内你就是世界首富。
: 如果抗体可以进入细胞内,你可以target无数的transcription factor,
: intracellular protein,调节protein-protein interaction,整个生物医药将发生
: 革命,创造无数的就业机会。
: 抗体size太大,要跨膜几乎不可能。当然你说,可以通过endocytosis,但是但是进入
: endosome就出不来了(这个也是SiRNA最大的问题)。你如果能,在不toxic细胞的情况
: 下,控制让抗体(甚至siRNA)出endosome就足够赚很多很多钱了。

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q*g
15
可以让peptide进入细胞,然后让细胞死亡。但抗体似乎太大了。
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s*9
16
不是跟踪protein-protein interaction,是用抗体bind住interaction的位点,调节
或者阻断interaction。
不是用于检测,而是用来作为drug target。

【在 j******i 的大作中提到】
: 看来真是个演说的好手!能把生物说的这么激动人心!恕我愚昧,有几个地方不懂。(
: 1)如果要跟踪protein-protein interation,难道不是用基因编辑的方法在内源蛋白
: 上加个标记更可行?(2)即使用某种方法把抗体转到细胞质,不是还需要加二抗和底
: 物吗?(3)我确实有方法将小蛋白转进细胞质,抗体可能太大了(150kd?),看来成不
: 了首富了。

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d*t
17
嗯,用于检测的话single cell microinjection很早就有人用了,如果要高效的让大量
antibody进入细胞目前好像还没有看到什么办法

【在 s****9 的大作中提到】
: 不是跟踪protein-protein interaction,是用抗体bind住interaction的位点,调节
: 或者阻断interaction。
: 不是用于检测,而是用来作为drug target。

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x*e
18
off target这一点你就解决不了吧

【在 s****9 的大作中提到】
: 不是跟踪protein-protein interaction,是用抗体bind住interaction的位点,调节
: 或者阻断interaction。
: 不是用于检测,而是用来作为drug target。

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l*y
19
想干嘛?考虑一下nanobody吧, 15kd,小小的,fuse个信号肽或者直接和一种什么肽
coincubate,都可能钻进去。

【在 h******n 的大作中提到】
: Rt
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l*a
20
看完你们对话,我都不知道该说什么好了,就你的1,2点来说,我只能说抗体不光是用
来做research的好不好

【在 j******i 的大作中提到】
: 看来真是个演说的好手!能把生物说的这么激动人心!恕我愚昧,有几个地方不懂。(
: 1)如果要跟踪protein-protein interation,难道不是用基因编辑的方法在内源蛋白
: 上加个标记更可行?(2)即使用某种方法把抗体转到细胞质,不是还需要加二抗和底
: 物吗?(3)我确实有方法将小蛋白转进细胞质,抗体可能太大了(150kd?),看来成不
: 了首富了。

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l*a
21
兄弟,别激动,知道二硫键是怎么work的吗?别太付责任了。

【在 s****9 的大作中提到】
: 如果你可以让抗体efficiently进入细胞内,我可以非常负责的说,明天就专利这个技
: 术(想法),10年之内你就可以获得noble prize,20年之内你就是世界首富。
: 如果抗体可以进入细胞内,你可以target无数的transcription factor,
: intracellular protein,调节protein-protein interaction,整个生物医药将发生
: 革命,创造无数的就业机会。
: 抗体size太大,要跨膜几乎不可能。当然你说,可以通过endocytosis,但是但是进入
: endosome就出不来了(这个也是SiRNA最大的问题)。你如果能,在不toxic细胞的情况
: 下,控制让抗体(甚至siRNA)出endosome就足够赚很多很多钱了。

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l*a
22
没什么实际价值,也就是灌灌水啦

【在 s*****o 的大作中提到】
: 搜索一下"intrabody",可以发现很多方法。我不做这个,前段时间碰巧听说这个领域
: 的工作。
: http://en.wikipedia.org/wiki/Intrabody_(protein)

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s*x
23
前面有人提了,nanobody很小十几kd,而且可以在胞内工作,不必须有二流健。细胞内
还原环境让一般的抗体二流健破坏无法正常折叠,但是很多那 nobody可以在报纸内发
挥作用。

【在 l******a 的大作中提到】
: 兄弟,别激动,知道二硫键是怎么work的吗?别太付责任了。
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H*s
24
能不能多说两句让听的人也长点见识?谢谢了。

【在 l******a 的大作中提到】
: 兄弟,别激动,知道二硫键是怎么work的吗?别太付责任了。
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H*s
25
一个非常重要的话题,牵扯到生命科学的很多方面。谢谢楼主扔出这块砖头来。

【在 h******n 的大作中提到】
: Rt
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l*a
26
我说的还不够明白吗?不都说了二硫键了吗?
the disulfide bond holding antibody to fold will get reduced inside the cell.

【在 H****s 的大作中提到】
: 能不能多说两句让听的人也长点见识?谢谢了。
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l*a
27
不是基于抗体的scafold都有immunogencity的issue。

【在 s********x 的大作中提到】
: 前面有人提了,nanobody很小十几kd,而且可以在胞内工作,不必须有二流健。细胞内
: 还原环境让一般的抗体二流健破坏无法正常折叠,但是很多那 nobody可以在报纸内发
: 挥作用。

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l*a
28
你知道抗体领域做了多少年了吗,你以为大牛们都是傻子,这些没人想过吗?我承认要
think out of box,但那都是基于在你的领域有扎实的基础,知道人们都做过些什么的
,为什么有些东西还没有人做的情况下。几前年我也天真的觉得为什么很多很牛逼的
idea没有人做,也都悄悄写在一个pi idea的本子上。这两年一边做薄厚一边test 一些
idea为申请faculty做准备,才发现很多obvious 的 idea之所以没有人做都是有很大问
题的。这也是为什么现在很多大牛喜欢分一部分人做discovery based research比如筛
选。因为太rational的idea大家都能想到。

【在 H****s 的大作中提到】
: 一个非常重要的话题,牵扯到生命科学的很多方面。谢谢楼主扔出这块砖头来。
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l*a
29
不开玩笑了,正经的说,如果只是发文章灌水,无所谓了。看你也是个明白人,其实这
里面问题很多,包括folding, specificity,当然最最最主要问题是efficiency,如果
有highly efficiency的办法即使只是in vitro对科研也是有极大的帮助的,not just
antibody。到了in vivo问题就更多了,比如injection method, bioavailability,
biodistribution, efficiency, immunogenecity。我不是专门做这个的,但是我知道
其实这个方向有很多人搞的。

【在 s********x 的大作中提到】
: 前面有人提了,nanobody很小十几kd,而且可以在胞内工作,不必须有二流健。细胞内
: 还原环境让一般的抗体二流健破坏无法正常折叠,但是很多那 nobody可以在报纸内发
: 挥作用。

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H*s
30
谢谢你的发言,我获益匪浅。我不是做这个的,但是一直在思考一个问题。有一些病原
菌可以把细菌毒素输送到细胞质里面去,那些毒素也是有二硫键的呀,那为什么细菌毒
素仍然可以保持折叠后的构象并且仍然有生物活性?同样的还原性环境,为什么抗体就
不行了呢?利用细菌的毒素输送系统,一系列不同的蛋白(最大的有200KD)已经被完
整地输送到哺乳动物细胞的细胞质里面。为什么那些蛋白就可以,同样都是有二硫键的
,抗体就不行了呢?

【在 l******a 的大作中提到】
: 你知道抗体领域做了多少年了吗,你以为大牛们都是傻子,这些没人想过吗?我承认要
: think out of box,但那都是基于在你的领域有扎实的基础,知道人们都做过些什么的
: ,为什么有些东西还没有人做的情况下。几前年我也天真的觉得为什么很多很牛逼的
: idea没有人做,也都悄悄写在一个pi idea的本子上。这两年一边做薄厚一边test 一些
: idea为申请faculty做准备,才发现很多obvious 的 idea之所以没有人做都是有很大问
: 题的。这也是为什么现在很多大牛喜欢分一部分人做discovery based research比如筛
: 选。因为太rational的idea大家都能想到。

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l*a
31
进endosome, lysosome,golgi和ER跟cytosol是两个完全不同的概念。你能link一篇
reference吗?antibody也可以进endosome,并且被recycle出来,但是进不了cytosol。

【在 H****s 的大作中提到】
: 谢谢你的发言,我获益匪浅。我不是做这个的,但是一直在思考一个问题。有一些病原
: 菌可以把细菌毒素输送到细胞质里面去,那些毒素也是有二硫键的呀,那为什么细菌毒
: 素仍然可以保持折叠后的构象并且仍然有生物活性?同样的还原性环境,为什么抗体就
: 不行了呢?利用细菌的毒素输送系统,一系列不同的蛋白(最大的有200KD)已经被完
: 整地输送到哺乳动物细胞的细胞质里面。为什么那些蛋白就可以,同样都是有二硫键的
: ,抗体就不行了呢?

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l*y
32
有些SS容易断, 有些不容易。 toxin那些intra chain的不容易断吧,或者断了对构象
没啥影响。
另外,T3SS用来做protein drug delivery也有人在试。

【在 H****s 的大作中提到】
: 谢谢你的发言,我获益匪浅。我不是做这个的,但是一直在思考一个问题。有一些病原
: 菌可以把细菌毒素输送到细胞质里面去,那些毒素也是有二硫键的呀,那为什么细菌毒
: 素仍然可以保持折叠后的构象并且仍然有生物活性?同样的还原性环境,为什么抗体就
: 不行了呢?利用细菌的毒素输送系统,一系列不同的蛋白(最大的有200KD)已经被完
: 整地输送到哺乳动物细胞的细胞质里面。为什么那些蛋白就可以,同样都是有二硫键的
: ,抗体就不行了呢?

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H*s
33
兄弟,我可以非常确定他们用的系统是把蛋白输送到cytosol里面去。当时是去参加了
一个会,会上有个哈佛的人做了关于这个的专题讲座。好像是利用anthrax细菌的毒素
输送系统。会后我和这个人聊了二三十分钟,知道他们在尝试不同的蛋白(主要目的是
在试各种可能性,以获得足够的数据去证明Proof of concept来获得更多的经费资助。
他们好像申请了好几个专利)。我问的问题是他们是否尝试输送抗体到细胞质里面去,
他们说还没有,主要原因是抗体分子太大,并且结构不是很flexible(使用他们的那个
系统,被输送蛋白必须要融合到另外一个蛋白上去,才能输送)。但是他们试过scFv,
没有问题(这个我有点怀疑,因为他们回答得含糊其词,不是很有信心的样子)。我对
抗体这部分不感兴趣,我感兴趣的地方在于,到底什么蛋白可以进入仍然有活性,什么
蛋白彻底不可进入,这其中的规律是什么。

cytosol。

【在 l******a 的大作中提到】
: 进endosome, lysosome,golgi和ER跟cytosol是两个完全不同的概念。你能link一篇
: reference吗?antibody也可以进endosome,并且被recycle出来,但是进不了cytosol。

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H*s
34
这是个很合理的解释。问题是哈佛的那个小组说他们试过scFv了。按道理来说,scFv比
抗体应该更不稳定吧。

【在 l****y 的大作中提到】
: 有些SS容易断, 有些不容易。 toxin那些intra chain的不容易断吧,或者断了对构象
: 没啥影响。
: 另外,T3SS用来做protein drug delivery也有人在试。

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d*i
36
不是说有那个TAT吗?偶联上或者融合上一个大蛋白照样可以带到细胞里,就是缺乏细
胞特异性。如果抗体能够被工程性表达出来,那么就可以偶联,然后至少体外实验的话
就很容易进去了。
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H*s
37
http://micro.med.harvard.edu/faculty/collier.html

cytosol。

【在 l******a 的大作中提到】
: 进endosome, lysosome,golgi和ER跟cytosol是两个完全不同的概念。你能link一篇
: reference吗?antibody也可以进endosome,并且被recycle出来,但是进不了cytosol。

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a*a
38
google intrabody?

【在 h******n 的大作中提到】
: Rt
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l*a
40
哦,pore based mechanism,有很多例子,pitfall是in vitro level蛋白太大了进不
去,scfv也有disulfide,不过还算稳定,但是specificity差些。in vivo肯定有
biodistribusion和liver toxicity的问题。现阶段也就是灌水而已。

【在 H****s 的大作中提到】
: http://micro.med.harvard.edu/faculty/collier.html
:
: cytosol。

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