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co-ip 问题

co-ip 问题# Biology - 生物学

m*t2015-05-06 07:05

1 楼

我试IP 一个蛋白tagged with 6his，用COBALT BEADS IP的，没用抗体，看它是不是和
SMAD３ BIND 在一起。接果发现空VECTOR 的样本ip 的也有很强的smad3条带，有
CELL LYSATE作为阳性对照。抗体没有任何问题. 各位不吝赐教。怎样肇成的？如何解
决？谢先

e*s2015-05-06 07:05

2 楼

这应该是pull down 而不是IP.
Non-specific binding 很正常，特别是His-tag pulldown
首先看看his蛋白Bait本身结合到beads怎样。
其次，如果bait本身信号弱，增加表达量。
再次，摸洗涤条件
最后一个问题，你怎么洗脱的？

【在 m******t 的大作中提到】

: 我试IP 一个蛋白tagged with 6his，用COBALT BEADS IP的，没用抗体，看它是不是和
: SMAD３ BIND 在一起。接果发现空VECTOR 的样本ip 的也有很强的smad3条带，有
: CELL LYSATE作为阳性对照。抗体没有任何问题. 各位不吝赐教。怎样肇成的？如何解
: 决？谢先