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CRISPR/CAS9为啥要用virus delivery system呢？
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CRISPR/CAS9为啥要用virus delivery system呢？# Biology - 生物学
i*e
1 楼
我之期做过一段时间POSTDOC，当时是Ａ老板付我钱我在Ｂ老板实验室做实验，但是最
后因为Ｐａｐｅｒ的事情曾经和Ａ有些不愉快，后来走人了，但是多少Ａ对我有些不满
，跟Ｂ我们一直关系很好，我现在背景调查，要写这一段工作经历的话，老板写Ａ还是
Ｂ呢，写Ａ　会不会对我不利？还是没关系
谢谢大家！！！
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r*8
2 楼
今天frys的ad上写了note 10.1 $350, 结果frys耍赖不给. 回来后打电话给BB PM, 结
果BB很爽气就给了, 还没有拆封, 呵呵.
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m*D
3 楼
（这个问题本来是放在另一网友的回帖里的，没有人注意或回答，就再拉出来示众。）
转化（transfection)效率低的话，cell sorting或Puro selection不是可以解决吗？
我只觉得两种情况下需要virus delivery system--
1。Pool all cells, no need to clone cell line。这个是siRNA里经常的问题。但
siRNA有时间问题（不能超过十天左右），也就是transfection后不能等太长。而
CRISPR/cas9是permanent genome editing，没有时间问题；同时又不能保证
transfected cells一定有genome editing发生，这和siRNA显然不一样。
2。deliver a library of guide-sequence-cas9-vector。这个我一直很感兴趣。最近
的两篇文章，一个library是针对18000个基因，另一个是73000个基因。这个对找一个
compound针对的signal transduction cascade还是不错的。我也想作这个project,找
出我们自己compound针对的signal transduction cascade。老板说主意不错（当然布
什我自己的主意），可得有钱啊。不知道这两个library是不是可以买或者借来用。不
过，这library不用自己建吧。
恕我愚钝。谢谢指教！
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i*e
4 楼
ding
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l*x
5 楼
这价格不错
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j*i
6 楼
干细胞，体内等，都需要virus才能高效进去。对于cas9的应用，virus可以控制MOI,
transfection一转就是一坨。估计大家一看这个问题，就在纳闷是哪个新phd学生在提
问。。。
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i*e
7 楼
upupup
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s*3
8 楼
买来干嘛呢，我觉得android板子真没啥用
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m*D
9 楼
嘿嘿，cas9对我就是生物对新Ph.D.么。：）。
对需要transfection效率需要高的体系，你说的体内可以理解。对少数细胞系因
transfection效率低，不是可以筛选吗？
“一转就是一坨”是只转进去的DNA太多，怕off-target?
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s*p
10 楼
没经验，帮你顶一下
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r*8
11 楼
看PDF, 写comments, notes, 这点ipad做不到

【在 s********3 的大作中提到】
: 买来干嘛呢，我觉得android板子真没啥用
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m*2
12 楼
有一些细胞在体外不能培养超过五天，有一些细胞对抗性筛选很敏感。
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G*i
13 楼
背景调查一般只负责调查证实你过去经历是否真实
跟你工作表现无关。。

【在 i******e 的大作中提到】
: 我之期做过一段时间POSTDOC，当时是Ａ老板付我钱我在Ｂ老板实验室做实验，但是最
: 后因为Ｐａｐｅｒ的事情曾经和Ａ有些不愉快，后来走人了，但是多少Ａ对我有些不满
: ，跟Ｂ我们一直关系很好，我现在背景调查，要写这一段工作经历的话，老板写Ａ还是
: Ｂ呢，写Ａ　会不会对我不利？还是没关系
: 谢谢大家！！！
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r*8
14 楼
是啊, 自从3个月前上市以来, 还没有看到过降价

【在 l***x 的大作中提到】
: 这价格不错
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j*i
15 楼
即使可以筛选也是效率越高越好是不？DNA太多当然有off-target的问题，还有一些特殊
的应用，比如screen的时候，就会希望一个细胞只有一种gRNA。

【在 m*********D 的大作中提到】
: 嘿嘿，cas9对我就是生物对新Ph.D.么。：）。
: 对需要transfection效率需要高的体系，你说的体内可以理解。对少数细胞系因
: transfection效率低，不是可以筛选吗？
: “一转就是一坨”是只转进去的DNA太多，怕off-target?
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i*e
16 楼
调查的第三方会不会直接打电话给前老板A 啊，怕他使坏说我坏话啊

【在 G******i 的大作中提到】
: 背景调查一般只负责调查证实你过去经历是否真实
: 跟你工作表现无关。。
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s*3
17 楼
好吧
我还是等surface pro吧，就不花冤枉钱了

【在 r*****8 的大作中提到】
: 看PDF, 写comments, notes, 这点ipad做不到
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m*D
18 楼
谢谢！这种情况还没有碰到过，开眼界。

【在 m********2 的大作中提到】
: 有一些细胞在体外不能培养超过五天，有一些细胞对抗性筛选很敏感。
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i*e
19 楼
up
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A*D
20 楼
不错的价格

【在 r*****8 的大作中提到】
: 是啊, 自从3个月前上市以来, 还没有看到过降价
avatar
m*D
21 楼
你说的screen和我说的library是同一回事，理解。谢谢！

特殊

【在 j******i 的大作中提到】
: 即使可以筛选也是效率越高越好是不？DNA太多当然有off-target的问题，还有一些特殊
: 的应用，比如screen的时候，就会希望一个细胞只有一种gRNA。
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P*1
22 楼
如果公司hired我，给我的是programmer的title,但是我做的只是help desk support.
resume上面我是应该写programmer还是help desk support specialist? 写
programmer又觉得mislead人家。 基本上没有写过什么program.
background check 的时候，如果resume上面写的是help desk support specialist,有
没有问题？
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w*u
23 楼
我一个多月前原价买的，这个价格很不错
note我最满意的是电池，非常耐用，
屏幕分辨率不高，但是看起来也算舒服
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n*y
24 楼
High transducing efficiency, 楼上Jessecai正解，作genome wide screening 的时
候，MOI要小，希望每个细胞一个sgRNA。就是你不希望有的sgRNA因为转染效率而错过吧
没人看Feng Zhang的workshop吗
也请教中西博后提出的第二个问题。
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p*9
25 楼
good reader for ipad都可以干

【在 r*****8 的大作中提到】
: 看PDF, 写comments, notes, 这点ipad做不到
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m*D
26 楼
你是问那个library的availability吧？我也感兴趣。
我倒是觉得genome screening不是大问题。如果一个细胞里进去3-5个guide seq.，三
五个基因knockout,外加off-target,一deep seq,基本就知道了对象。这个思维在没有
好的合适自动化的high-throughput screening的时候，一个样品里加十个compounds,
有了效应在一个一个分析差不多。倒是用这样的library,细胞的转化效率确实要考虑。
不用virus delivery,效率低，会比较麻烦。
mousemice网友说的有些细胞对筛选敏感我自己体会过。我用的deliver方式是有25-50%
的细胞能被transfected。但我筛选后只有大约1%细胞survive。以前和这里一个网友交
流时，他/她用sorting，也是1%。我想很多transfected细胞也许表达量不足，过不料
筛选这关。不知道cas9的表达量和genome edit的效应的平衡点如何，太多会有太多off
-target,太少连自己的target也切不了。估计也是不同细胞不一样。
我还顺便问个有关off-target的问题：目前看到的都是找几个最可能的off-targets来
证明没有off-target,没有整个genome sequencing的。对于off-target的质疑，可不可
以用多个clone来回答？这就和stable cell line有关integration site的疑问一样，
不同的细胞line的integration site不一样，如果效应一样就可以了。我作的mutation
,有多个克隆，也在考虑是完全seq呢，还是看几个不同克隆的表性，如果一直就可以了。

过吧

【在 n***y 的大作中提到】
: High transducing efficiency, 楼上Jessecai正解，作genome wide screening 的时
: 候，MOI要小，希望每个细胞一个sgRNA。就是你不希望有的sgRNA因为转染效率而错过吧
: 没人看Feng Zhang的workshop吗
: 也请教中西博后提出的第二个问题。
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w*u
27 楼
不一样，note带电磁笔的，记笔记更方便
而且可以把屏幕对半分，记笔记时候还可以上网查资料

【在 p******9 的大作中提到】
: good reader for ipad都可以干
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a*n
29 楼
同意，就这两点甩其他tablet几条街,还很轻
要是屏幕分辨率提高，系统是windows就是我的首选了

【在 w*****u 的大作中提到】
: 不一样，note带电磁笔的，记笔记更方便
: 而且可以把屏幕对半分，记笔记时候还可以上网查资料
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s*o
31 楼
以前特fan带笔的平板，后来发现自己字写的丑，也不会画画，对笔就再也不感冒了
况且note 10这分辨率看pdf也不怎么样吧
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m*D
32 楼
谢谢两位的信息！大概看了一下，还不那么容易。我可能还是走多克隆的路线。我手中
每个mutation都有三四个克隆，看能不能过关。
commercially available library找到了。网上地址是：
http://www.cellecta.com/technology-portfolio/crispr-cas9-for-ge
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v*r
33 楼
对半分只有那几个原带的程序可以吧

【在 w*****u 的大作中提到】
: 不一样，note带电磁笔的，记笔记更方便
: 而且可以把屏幕对半分，记笔记时候还可以上网查资料
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F*y
34 楼
你太走运了，fatwallet和slickdeals上全部都是抱怨去frys买不到的
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p*r
35 楼

Considering all higher resolution(1080P or even higher N10) tablets are
just $269-$399. The deal is just so so unless you really need the S-Pen and
its related features.

【在 r*****8 的大作中提到】
: 今天frys的ad上写了note 10.1 $350, 结果frys耍赖不给. 回来后打电话给BB PM, 结
: 果BB很爽气就给了, 还没有拆封, 呵呵.
avatar
d*0
36 楼
不写字买这个干啥

and

【在 p*********r 的大作中提到】
:
: Considering all higher resolution(1080P or even higher N10) tablets are
: just $269-$399. The deal is just so so unless you really need the S-Pen and
: its related features.
avatar
r*8
37 楼
本来就是冲着s-pen去的, 我有note 1, 感觉s-pen太方便有用了

and

【在 p*********r 的大作中提到】
:
: Considering all higher resolution(1080P or even higher N10) tablets are
: just $269-$399. The deal is just so so unless you really need the S-Pen and
: its related features.
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r*8
38 楼
昨晚试了一下, 确实就几个原带的程序可以分屏

【在 v*r 的大作中提到】
: 对半分只有那几个原带的程序可以吧
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