V*t
2 楼
用BCA？得稀释多少倍啊
2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
那么多SDS BME 会干扰啊。
2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
那么多SDS BME 会干扰啊。
s*m
3 楼
取钱按现汇买入价
s*s
4 楼
记得先沉淀下来，再换buffer？
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
s*r
5 楼
BOA 更划算。
d*i
6 楼
你的配方跟biorad的不一样？
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
s*r
7 楼
BOA中国建行取钱更划算。
e*s
8 楼
好像可以只加SDS来裂解细胞，
SDS在0.1%以下，对检测结果的干扰就不大了。一般测总蛋白，起码稀释100-500倍，
SDS浓度就不高了。跑胶的时候再和正常的Laemmi buffer混起来。
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
SDS在0.1%以下，对检测结果的干扰就不大了。一般测总蛋白，起码稀释100-500倍，
SDS浓度就不高了。跑胶的时候再和正常的Laemmi buffer混起来。
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
d*j
9 楼
boa汇率好，但有limit。要大额的话还是私人方便。
【在 N******n 的大作中提到】
: BOA取钱的汇率什么汇率？
: 谢谢
【在 N******n 的大作中提到】
: BOA取钱的汇率什么汇率？
: 谢谢
V*t
10 楼
照着sigma官网的配方配的啊
【在 d****i 的大作中提到】
: 你的配方跟biorad的不一样？
:
: .8.
【在 d****i 的大作中提到】
: 你的配方跟biorad的不一样？
:
: .8.
V*t
11 楼
TCA沉淀？有必要吗
【在 s******s 的大作中提到】
: 记得先沉淀下来，再换buffer？
:
: .8.
【在 s******s 的大作中提到】
: 记得先沉淀下来，再换buffer？
:
: .8.
V*t
12 楼
48个样品 。。。
【在 s******s 的大作中提到】
: 记得先沉淀下来，再换buffer？
:
: .8.
【在 s******s 的大作中提到】
: 记得先沉淀下来，再换buffer？
:
: .8.
m*u
13 楼
pierce 660 nm works well.
f*d
14 楼
还没有人提到Bca assay reduced sample compatible.
d*i
15 楼
The kit enables you to measure protein concentration in samples that contain
thiol-reductants dithiothreitol (DTT) and 2-mercaptoethanol (BME), and
comes with 20 96-well microplates.
https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/23252
【在 f*******d 的大作中提到】
: 还没有人提到Bca assay reduced sample compatible.
g*r
16 楼
I used this protocol many years ago. YOu may want to give it a try,
> Load 5ul standards or samples onto NC membrance, air dry for 5min
> wash membrane with 50% Methanol for 5min,
> stain with amido black for 15 min
> wash membrane with 50% Methol for about 30min, until background clear
> air dry for 20-30min ( not too dry)
> cut dot with punch and disolve inabout 200-400ul 0.1N NaOH , dark for
30min, read at 600nm
Good lucks!
> Load 5ul standards or samples onto NC membrance, air dry for 5min
> wash membrane with 50% Methanol for 5min,
> stain with amido black for 15 min
> wash membrane with 50% Methol for about 30min, until background clear
> air dry for 20-30min ( not too dry)
> cut dot with punch and disolve inabout 200-400ul 0.1N NaOH , dark for
30min, read at 600nm
Good lucks!
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