C*n
2 楼
先感谢版上的各位大虾,经过trouble-shooting,CRISPR在我们这个真菌里总算work了
。不过现在有个现象我解释不清楚,由于本人遗传学不是很强,所以想再次请教一下专
家。
我拿到单mutant后,sequence了target,但是很奇怪,sequencing结果显示我们这个
diploid的真菌只有一个单一的mutated target,这是为什么呢?NHEJ是随机的,理论
上说, diploid应该会出现两个allel不同的情况。是发生了gene conversion了,还是
其他原因?谢谢
。不过现在有个现象我解释不清楚,由于本人遗传学不是很强,所以想再次请教一下专
家。
我拿到单mutant后,sequence了target,但是很奇怪,sequencing结果显示我们这个
diploid的真菌只有一个单一的mutated target,这是为什么呢?NHEJ是随机的,理论
上说, diploid应该会出现两个allel不同的情况。是发生了gene conversion了,还是
其他原因?谢谢
r*e
4 楼
w*a
5 楼
偶也有介个问题,genomic PCR以后测了20个克隆,全部是一摸一样的突变。
估计NHEJ修复的时候,某些错误出现的频率很高吧,
所以也不见得就是完全随机的mutation。也许跟guide sequence target的位置有关。
【在 C****n 的大作中提到】
: 先感谢版上的各位大虾,经过trouble-shooting,CRISPR在我们这个真菌里总算work了
: 。不过现在有个现象我解释不清楚,由于本人遗传学不是很强,所以想再次请教一下专
: 家。
: 我拿到单mutant后,sequence了target,但是很奇怪,sequencing结果显示我们这个
: diploid的真菌只有一个单一的mutated target,这是为什么呢?NHEJ是随机的,理论
: 上说, diploid应该会出现两个allel不同的情况。是发生了gene conversion了,还是
: 其他原因?谢谢
估计NHEJ修复的时候,某些错误出现的频率很高吧,
所以也不见得就是完全随机的mutation。也许跟guide sequence target的位置有关。
【在 C****n 的大作中提到】
: 先感谢版上的各位大虾,经过trouble-shooting,CRISPR在我们这个真菌里总算work了
: 。不过现在有个现象我解释不清楚,由于本人遗传学不是很强,所以想再次请教一下专
: 家。
: 我拿到单mutant后,sequence了target,但是很奇怪,sequencing结果显示我们这个
: diploid的真菌只有一个单一的mutated target,这是为什么呢?NHEJ是随机的,理论
: 上说, diploid应该会出现两个allel不同的情况。是发生了gene conversion了,还是
: 其他原因?谢谢
n*y
14 楼
一个allele利用另一个allele作为修复的模板,两个alleles切割和修复不是同时发生
的,一前一后
。可以参考我以前发的帖子,MCR。
的,一前一后
。可以参考我以前发的帖子,MCR。
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