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[请教]DAPI live cell staining的毒性问题
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s*t
2 楼
邻居老美大爷说是早上好
我怎么觉得傍晚，太阳下山后比较好？ 一周2次就够了？
草坪浇水就可以了吗？ 要不要浇肥呀？ 哪里买？
草坪已经发黄了，怎么挽救？
想种些别的花花草草，有什么伺候简单的植物推荐吗？ 谢谢
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C*n
3 楼
最近在用DAPI染丝状真菌的细胞核，步骤完全是照着教科书或者paper做的。突然发现
DAPI可能会导致细胞核破裂，造成了严重的fake结果。
比如without DAPI staining, 用显微镜观察NLS-GFP是细胞核定位的；但是在DAPI染色
（10min）后观察，GFP的定位变成 cytoplasmic了。然后我做了一个time elapse的实
验，很诡异的发现在某一个时间点细胞核突然间破裂了，定位在细胞核里的GFP突然
distribute to the entire hyphae。
请教各位大虾这是因为DAPI的毒性照成的吗？因为sample比较多，实在不想fix以后再
immunostaining 观察，除此之外有什么好方法吗？十分感谢！
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A*u
4 楼
凌晨四五点钟开始最好，连续浇三四个小时。

【在 s*****t 的大作中提到】
: 邻居老美大爷说是早上好
: 我怎么觉得傍晚，太阳下山后比较好？ 一周2次就够了？
: 草坪浇水就可以了吗？ 要不要浇肥呀？ 哪里买？
: 草坪已经发黄了，怎么挽救？
: 想种些别的花花草草，有什么伺候简单的植物推荐吗？ 谢谢
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q*g
5 楼
好像一般用Hoechst
https://en.wikipedia.org/wiki/DAPI
DAPI can be used for fixed cell staining. The concentration of DAPI needed
for live cell staining is generally very high; it is rarely used for live
cells
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c*o
6 楼
嗯，就像楼上说的，早上4，5点开始叫，连续叫2，3个小时就可以了
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C*n
7 楼
恩，谢谢，我也注意到了Hoechst这个dye了，正在计划中。
可能是各种细胞膜的通透性不一样，所以DAPI浓度有区别，有些需要很高。 我用的
DAPI浓度倒是不大（0.2ug/ml）。我试过植物protoplast，这个只有细胞膜的植物细胞
通透性很差，DAPI基本上进不去。所以我对Wiki的理解是对于某些细胞也许需要很高的
DAPI浓度。

【在 q******g 的大作中提到】
: 好像一般用Hoechst
: https://en.wikipedia.org/wiki/DAPI
: DAPI can be used for fixed cell staining. The concentration of DAPI needed
: for live cell staining is generally very high; it is rarely used for live
: cells
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f*i
8 楼
多大的lot啊，要2-3个小时

【在 c****o 的大作中提到】
: 嗯，就像楼上说的，早上4，5点开始叫，连续叫2，3个小时就可以了
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b*2
9 楼
你这是不是细胞在分裂啊？
一般活细胞染色用hoeschet 33342更多一些吧。
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s*a
10 楼
时间和lot size又没有关系。

【在 f****i 的大作中提到】
: 多大的lot啊，要2-3个小时
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C*n
11 楼
我一开始也猜测是在分裂，但后来一想，分裂不可能同步发生在所有的hyphae里。当然
也有可能是DAPI促使了所有细胞核的分裂。

【在 b***2 的大作中提到】
: 你这是不是细胞在分裂啊？
: 一般活细胞染色用hoeschet 33342更多一些吧。
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z*n
12 楼
要连续浇10小时以上才有效果

【在 s****a 的大作中提到】
: 时间和lot size又没有关系。
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O*J
13 楼
早上4，5点开始, 30 minutes each station, every other day.
enough time before the sun comes up for water to go into the
soil and attract grass roots to go deep. The sun will then dry
up any extra water to prevent grass damage.
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S*t
14 楼
啊，水不要钱啊，浇那么多！
网上有个计算器，可以根据草地种类，zip code，算各个季节每个月应该浇多少水量。
我这里算出来是6月份每周3天，每天2次，每次5分钟。

【在 O**J 的大作中提到】
: 早上4，5点开始, 30 minutes each station, every other day.
: enough time before the sun comes up for water to go into the
: soil and attract grass roots to go deep. The sun will then dry
: up any extra water to prevent grass damage.
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z*a
15 楼
每次5分钟.............草叶子都没湿呢

【在 S********t 的大作中提到】
: 啊，水不要钱啊，浇那么多！
: 网上有个计算器，可以根据草地种类，zip code，算各个季节每个月应该浇多少水量。
: 我这里算出来是6月份每周3天，每天2次，每次5分钟。
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T*4
16 楼
Link? Thanks.

【在 S********t 的大作中提到】
: 啊，水不要钱啊，浇那么多！
: 网上有个计算器，可以根据草地种类，zip code，算各个季节每个月应该浇多少水量。
: 我这里算出来是6月份每周3天，每天2次，每次5分钟。
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s*t
17 楼
浇水2，3小时？没开玩笑吧？ 周围人家从没看见浇水这么久的？
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s*t
18 楼
其他问题，也请帮忙回答，别忘了，谢谢
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B*4
19 楼
浇水时间长度，以水渗透到土壤10厘米以下下为“足够了”。太短不行，太长浪费水。
浇水时机，不要在有太阳的时候浇，否则水分蒸发浪费水。所以早晚都可以浇水。但又有人说晚上浇水叶子干不了会长霉菌（我对此保留看法）。所以据说最好是大清早浇水，但是除了有定时器的，谁能天没亮起来浇水？我和我们附近的邻居都是一直傍晚浇水，没有长霉菌。
草地当然要施肥，一般至少两次，春天和秋天各一次。草发黄是干旱，要多浇水。
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s*t
20 楼
非常感谢

又有人说晚上浇水叶子干不了会长霉菌（我对此保留看法）。所以据说最好是大清早浇
水，但是除了有定时器的，谁能天没亮起来浇水？我和我们附近的邻居都是一直傍晚浇
水，没有长霉菌。

【在 B********4 的大作中提到】
: 浇水时间长度，以水渗透到土壤10厘米以下下为“足够了”。太短不行，太长浪费水。
: 浇水时机，不要在有太阳的时候浇，否则水分蒸发浪费水。所以早晚都可以浇水。但又有人说晚上浇水叶子干不了会长霉菌（我对此保留看法）。所以据说最好是大清早浇水，但是除了有定时器的，谁能天没亮起来浇水？我和我们附近的邻居都是一直傍晚浇水，没有长霉菌。
: 草地当然要施肥，一般至少两次，春天和秋天各一次。草发黄是干旱，要多浇水。
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d*a
21 楼
当然是早上好，一是太阳没出来，地温还没上去，浇水不容易蒸发；二是紧接着太阳出
来，植物生长旺盛周期。
晚上浇水一是植物生长周期接近低潮，二是容易跟黑天接上，召虫子。
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c*e
22 楼
me, 6 zones, 1 hr each round, 2 rounds each time

【在 s*****t 的大作中提到】
: 浇水2，3小时？没开玩笑吧？ 周围人家从没看见浇水这么久的？
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R*r
23 楼
我家从来不浇水

【在 s*****t 的大作中提到】
: 邻居老美大爷说是早上好
: 我怎么觉得傍晚，太阳下山后比较好？ 一周2次就够了？
: 草坪浇水就可以了吗？ 要不要浇肥呀？ 哪里买？
: 草坪已经发黄了，怎么挽救？
: 想种些别的花花草草，有什么伺候简单的植物推荐吗？ 谢谢
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h*u
24 楼
这个草地真是浪费水，花钱，还搭功夫
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c*o
25 楼
这个跟XXOO一样，持续时间比频率重要

【在 S********t 的大作中提到】
: 啊，水不要钱啊，浇那么多！
: 网上有个计算器，可以根据草地种类，zip code，算各个季节每个月应该浇多少水量。
: 我这里算出来是6月份每周3天，每天2次，每次5分钟。
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m*d
26 楼
这是给野草浇水呢

【在 S********t 的大作中提到】
: 啊，水不要钱啊，浇那么多！
: 网上有个计算器，可以根据草地种类，zip code，算各个季节每个月应该浇多少水量。
: 我这里算出来是6月份每周3天，每天2次，每次5分钟。
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e*w
27 楼
这个和我们家的一样。

【在 O**J 的大作中提到】
: 早上4，5点开始, 30 minutes each station, every other day.
: enough time before the sun comes up for water to go into the
: soil and attract grass roots to go deep. The sun will then dry
: up any extra water to prevent grass damage.
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s*l
28 楼
你们种的是水草吧？

【在 z*********n 的大作中提到】
: 要连续浇10小时以上才有效果
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s*t
29 楼
设定时间，自动浇啊

【在 h***u 的大作中提到】
: 这个草地真是浪费水，花钱，还搭功夫
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a*s
30 楼
当今社会，家草给得少，野草给得多。

【在 m*****d 的大作中提到】
: 这是给野草浇水呢
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