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请问病毒包装细胞会表达你要表达的那个基因吗？

请问病毒包装细胞会表达你要表达的那个基因吗？# Biology - 生物学

r*l2015-12-01 08:12

1 楼

我们用预先导入A基因的Phoenix-ECO cell去转染T cell，但是flow看不到A基因的表达
。人家说你可以先run flow看看Phoenix-ECO cell里面这个基因是否表达？
很好奇Phoenix-ECO cell会直接表达这个基因吗？用PCR check是不是有A基因的DNA才
对吧？
不是很懂，请大侠帮忙看看，谢谢！

s*s2015-12-01 08:12

2 楼

你用啥promoter？没有TF或者clone出错，
没有表达吗mRNA自然看不到。产病毒的时候，
有病毒RNA可以表达。

【在 r***l 的大作中提到】

: 我们用预先导入A基因的Phoenix-ECO cell去转染T cell，但是flow看不到A基因的表达
: 。人家说你可以先run flow看看Phoenix-ECO cell里面这个基因是否表达？
: 很好奇Phoenix-ECO cell会直接表达这个基因吗？用PCR check是不是有A基因的DNA才
: 对吧？
: 不是很懂，请大侠帮忙看看，谢谢！

C*42015-12-01 08:12

3 楼

应该会表达，试试包装一个GFP的病毒重复一下你的实验你就能看到这个细胞里面有表
达（因为一般是做转染瞬间表达）。再用它感染你的T细胞。就可以直接检测荧光赖看
表达了，在知道大概的感染效率之后再做FLOW才有意义因为有时候病毒滴度太低你的检
测很难。。

s*s2015-12-01 08:12

4 楼

包装细胞里面表达不等于在实验细胞里面表达。我前面说了，实验细胞里面是否表达
取决于promoter，包装细胞估计产生的病毒RNA直接当mRNA用了，所以总是有表达。

【在 C*******4 的大作中提到】

: 应该会表达，试试包装一个GFP的病毒重复一下你的实验你就能看到这个细胞里面有表
: 达（因为一般是做转染瞬间表达）。再用它感染你的T细胞。就可以直接检测荧光赖看
: 表达了，在知道大概的感染效率之后再做FLOW才有意义因为有时候病毒滴度太低你的检
: 测很难。。

r*l2015-12-01 08:12

5 楼

谢谢大家，检测了发现包装细胞有表达，就是转染后没有，可能没转进去！
t cell好难转-_-||

C*42015-12-01 08:12

6 楼

呵呵，我们说的没矛盾啊。一般用CMV启动子在实验细胞里面应该有表达。
他的问题可能是病毒滴度低，所有我要他从头开始就用GFP做快检的指针。
再有，如果是RETRO病毒，碰到不怎么分裂的细胞转导效率很低。可以用LENTI病毒做。
即使病毒没大问题，转导的条件有时候是比较TRICKY的。

的检

【在 s******s 的大作中提到】

: 包装细胞里面表达不等于在实验细胞里面表达。我前面说了，实验细胞里面是否表达
: 取决于promoter，包装细胞估计产生的病毒RNA直接当mRNA用了，所以总是有表达。

s*s2015-12-01 08:12

7 楼

嗯。不过CMV最好早点看，有些细胞里面会被silence掉

有表
赖看

【在 C*******4 的大作中提到】

: 呵呵，我们说的没矛盾啊。一般用CMV启动子在实验细胞里面应该有表达。
: 他的问题可能是病毒滴度低，所有我要他从头开始就用GFP做快检的指针。
: 再有，如果是RETRO病毒，碰到不怎么分裂的细胞转导效率很低。可以用LENTI病毒做。
: 即使病毒没大问题，转导的条件有时候是比较TRICKY的。
:
: 的检

r*l2015-12-01 08:12

8 楼

，确实是retro，所以条件很难摸！

有表
赖看

【在 C*******4 的大作中提到】