Cas9编辑后碱基的插入或者切除是随机的吗?# Biology - 生物学y*72016-05-24 07:051 楼YELLOW PAGE 吗, SUPERPAGE吗?网上没有看到ORDER的啊, 想ORDER一本我这个CITY的黄页,请问去哪里ORDER啊? 以前看过一个网站,现在找不到了。貌似是免费的。
b*n2016-05-24 07:052 楼假设Cas9已经在DNA上切了一刀了,那么究竟是添加或者去除1,2,3个碱基是完全随机的吗?如果是这样,不是意味着有三分之一的可能性不会移码突变?如果以上猜测正确,能否表达多个sgRNA在一个基因上不同的位置编辑从而提高移码突变的可能性?
i*a2016-05-24 07:053 楼who still uses paper yellow pages...www.yellowpages.comwww.google.comCITY【在 y*****7 的大作中提到】: YELLOW PAGE 吗, SUPERPAGE吗?网上没有看到ORDER的啊, 想ORDER一本我这个CITY: 的黄页,请问去哪里ORDER啊? 以前看过一个网站,现在找不到了。貌似是免费的。
m*D2016-05-24 07:054 楼我的理解是随机的。但有文章说,80%的概率是DSB后,没有indel,直接连回去。我自己的结果是一半直接连,没有indel.两个DSB是可以的。这样是把两个DSB之间的那端delete了。我就是这么干的。但多一个guide, 就多了off-target的担忧。
y*72016-05-24 07:055 楼 有的,还是经常有免费的发到家里,不知道为什么。 恩YP.COM 是我经常用的。我以为PAPER BACK的会全面一些,GOOGLE的信息我觉得倒一般,还是黄页集中一点。【在 i****a 的大作中提到】: who still uses paper yellow pages...: www.yellowpages.com: www.google.com: : CITY
b*n2016-05-24 07:056 楼如果是直接连回去那么你怎么会知道它曾经切过一刀呢?如果不能产生突变的概率是这么高的话,在体内没有药物筛选环境下进行所谓的基因切除就是纸上谈兵了。【在 m*********D 的大作中提到】: 我的理解是随机的。但有文章说,80%的概率是DSB后,没有indel,直接连回去。我自己: 的结果是一半直接连,没有indel.: 两个DSB是可以的。这样是把两个DSB之间的那端delete了。我就是这么干的。但多一个: guide, 就多了off-target的担忧。
h*82016-05-24 07:057 楼local land line phone companyCITY【在 y*****7 的大作中提到】: YELLOW PAGE 吗, SUPERPAGE吗?网上没有看到ORDER的啊, 想ORDER一本我这个CITY: 的黄页,请问去哪里ORDER啊? 以前看过一个网站,现在找不到了。貌似是免费的。
m*D2016-05-24 07:059 楼我用了两个DSB,有没有indel自然一目了然了。另外,只作indel,直接连回去的,只要还有guide/cas9,往往会被再切,一直到guide或PAM出现问题。【在 b*****n 的大作中提到】: 如果是直接连回去那么你怎么会知道它曾经切过一刀呢?: 如果不能产生突变的概率是这么高的话,在体内没有药物筛选环境下进行所谓的基因切: 除就是纸上谈兵了。
b*n2016-05-24 07:0510 楼嗯,你后面那句话给了我足够信息,多谢!【在 m*********D 的大作中提到】: 我用了两个DSB,有没有indel自然一目了然了。另外,只作indel,直接连回去的,只要: 还有guide/cas9,往往会被再切,一直到guide或PAM出现问题。
I*p2016-05-24 07:0511 楼你这个观察(会被再切,一直到guide或PAM出现问题)确实很有意思。我想请教一下:我们得到一共40几个转基因的很小个体(两个基因),都经过抗性筛选,但是测序后没有一个有Indel。如果让这些小个体长大,有没有可能Cas9 表达量加大,最终出现Indel?起初怀疑,转基因插入到基因沉默区域,但是抗性基因却起作用,所以是其它原因了。是向别人要来的载体,他们发文章说60-85% 的编辑频率,不知道要不要用Cas9 抗体看看蛋白有没有表达。去做些无谓的Trouble Shooting真费劲,也许干脆换一个载体。谢谢!【在 m*********D 的大作中提到】: 我用了两个DSB,有没有indel自然一目了然了。另外,只作indel,直接连回去的,只要: 还有guide/cas9,往往会被再切,一直到guide或PAM出现问题。