Re: 请问Co-IP中的几个问题# Biology - 生物学
r*o
1 楼
1. 一般LYSIS BUFFER里头SDS的浓度比较低，最多只有1%，所以
不至於让蛋白质变性，破坏正常的结合能力。不过很难讲，你要
试试。如果你要用lysate做enzyme assay,那就最好不要用SDS，因为
会降低酶活性。
2. 不太清楚，常规的LYSIS BUFFER并不一定需要Sodium fluoride.
查了一下，NaF好像是一种phosphatase的抑制剂。
3. 选择HEPES还是TRIS主要是看在特定pH 附近的缓冲能力。HEPES
是一种酸，用它配pH从5到7.5都还可以，再偏硷性，比如到8，就不是
很好了。TRIS则是一种硷，Pka比HEPES大，配pH8到7之间的缓冲液，
还可以，再偏酸性就不合适了。
如果你要做crosslinking，并且用的是amine coupling的crosslinker,
就不能用TRIS，因为TRIS分子有四个氨基，很容易与crosslinker发生
耦联。
4. 非离子型去垢剂，Nonidet P-40 是最温和的一种。 Triton X-100
也可以。
5. 不太清楚，但是我觉得问题不大。只要你保
不至於让蛋白质变性，破坏正常的结合能力。不过很难讲，你要
试试。如果你要用lysate做enzyme assay,那就最好不要用SDS，因为
会降低酶活性。
2. 不太清楚，常规的LYSIS BUFFER并不一定需要Sodium fluoride.
查了一下，NaF好像是一种phosphatase的抑制剂。
3. 选择HEPES还是TRIS主要是看在特定pH 附近的缓冲能力。HEPES
是一种酸，用它配pH从5到7.5都还可以，再偏硷性，比如到8，就不是
很好了。TRIS则是一种硷，Pka比HEPES大，配pH8到7之间的缓冲液，
还可以，再偏酸性就不合适了。
如果你要做crosslinking，并且用的是amine coupling的crosslinker,
就不能用TRIS，因为TRIS分子有四个氨基，很容易与crosslinker发生
耦联。
4. 非离子型去垢剂，Nonidet P-40 是最温和的一种。 Triton X-100
也可以。
5. 不太清楚，但是我觉得问题不大。只要你保