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请教高手如何胶回收17Kb质粒

请教高手如何胶回收17Kb质粒# Biology - 生物学

p*e2010-02-28 08:02

1 楼

昨天和妈妈提到炒茄子和豇豆。
我妈妈的传统方法是：炒茄子用大量的油；炒豇豆用水炖很久。
我最近新学的招数是：炒茄子前先泡水；豇豆前先用水焯软了再炒。
我妈妈说，茄子泡水，营养会被水泡掉；豇豆水焯营养损失更大，还是她的传统作法最
有效的保持了营养。
我的观点是，炒茄子那么大的油很不健康；炒豇豆如果炖很久，营养成分也都被破坏了
，虽然焯会损失一些营养，但焯后过一下油就好，大大缩短了烹饪时间，反而能多保存
一些营养。
大家是怎么看待这个蔬菜营养流失问题的？
多谢～

c*c2010-02-28 08:02

2 楼

hi,
Can anyone help suggest one appl on iphone 3G for free text to CHINA?
thanks,
5c

h*02010-02-28 08:02

3 楼

正在克隆700bp片段到17kb质粒，试了好久，未果。试过将片段插入到pBlueskript(3kb
),效率很高，估计是载体问题。用一般的Qiagen柱子胶回收不了这个酶切过的质粒,只
好用spin-x,但效率很低，还需要PC8。我估计提高质粒的产量和质量会有助提高连接效
率。轻高手指教一下，谢谢。

q*u2010-02-28 08:02

4 楼

我的观点，只吃多种维生素片，不吃菜

【在 p*****e 的大作中提到】

: 昨天和妈妈提到炒茄子和豇豆。
: 我妈妈的传统方法是：炒茄子用大量的油；炒豇豆用水炖很久。
: 我最近新学的招数是：炒茄子前先泡水；豇豆前先用水焯软了再炒。
: 我妈妈说，茄子泡水，营养会被水泡掉；豇豆水焯营养损失更大，还是她的传统作法最
: 有效的保持了营养。
: 我的观点是，炒茄子那么大的油很不健康；炒豇豆如果炖很久，营养成分也都被破坏了
: ，虽然焯会损失一些营养，但焯后过一下油就好，大大缩短了烹饪时间，反而能多保存
: 一些营养。
: 大家是怎么看待这个蔬菜营养流失问题的？
: 多谢～

J*n2010-02-28 08:02

5 楼

"用一般的Qiagen柱子胶回收不了这个酶切过的质粒"
why?
加1倍体积的isopropanol，就可以了吧。

S*a2010-02-28 08:02

6 楼

这样肝脏的负担很容易加大啊。

【在 q**u 的大作中提到】

: 我的观点，只吃多种维生素片，不吃菜

s*r2010-02-28 08:02

7 楼

你可以试试低熔点胶。

正在克隆700bp片段到17kb质粒，试了好久，未果。试过将片段插入到pBlueskript(3kb
),效率很高，估计是载体问题。用一般的Qiagen柱子胶回收不了这个酶切过的质粒,只
好用spin-x,但效率很低，还需要PC8。我估计提高质粒的产量和质量会有助提高连接效
率。轻高手指教一下，谢谢。

【在 h*******0 的大作中提到】

: 正在克隆700bp片段到17kb质粒，试了好久，未果。试过将片段插入到pBlueskript(3kb
: ),效率很高，估计是载体问题。用一般的Qiagen柱子胶回收不了这个酶切过的质粒,只
: 好用spin-x,但效率很低，还需要PC8。我估计提高质粒的产量和质量会有助提高连接效
: 率。轻高手指教一下，谢谢。

S*a2010-02-28 08:02

8 楼

“紫茄子富含维生素P，可软化微细血管，防止小血管出血，对高血压、动脉硬化、咯
血、紫癜(皮下出血、瘀血)及坏血病患者均有益。茄子纤维中所含的维生素C和皂草甙
，具有降低胆固醇的功效。此外，茄子所含的B族维生素对痛经、慢性胃炎及肾炎水肿
等也有一定辅助治疗作用。也有些人不适宜吃茄子。茄子性凉，体弱胃寒的人不宜多吃
。老茄子，特别是秋后的老茄子有较多茄碱，对人体有害，不宜多吃。油炸茄子会造成
维生素P大量损失，挂糊上浆后炸制能减少这种损失。在茄子萼片与果实相连接的地方
，有一圈浅色环带，这条带越宽、越明显、就说明茄子果实正快速生长，没有老化。如
果环带不明显，说明茄子采收时已停止生长，此时的茄子已经变老，影响食用。茄子里
的维生素(毫克)A(微克)B1B2B6B12(微克)CD(微克)E630.030.040.06-8-1.13生物素(微
克)K(微克)P(微克)胡萝卜素叶酸(微克)泛酸烟酸矿物质元素(毫克)钙-99000.04190.60
.532铁磷钾钠铜镁锌(微克)硒(微克)”
转的，随便看看哈。
油只会有利于脂容性维生素吸收，中国菜大油的做法一般都不好，高温过程中别说蔬菜
，假使用

h*02010-02-28 08:02

9 楼

Qiagen的柱子主要是回收10kb以下的。加1倍体积的isopropanol并不能帮助回收这样大
的质粒（试过）。你试过这么大的质粒么？谢谢。

b*n2010-02-28 08:02

10 楼

生吃。茄子和豇豆都可以

h*02010-02-28 08:02

11 楼

什么是低熔点胶？为什么会帮助？不好意思，我孤陋寡闻。

n*w2010-02-28 08:02

12 楼

多高的温度会让橄榄油从不饱和转化成饱和从反式转成顺式？

60

【在 S******a 的大作中提到】

: “紫茄子富含维生素P，可软化微细血管，防止小血管出血，对高血压、动脉硬化、咯
: 血、紫癜(皮下出血、瘀血)及坏血病患者均有益。茄子纤维中所含的维生素C和皂草甙
: ，具有降低胆固醇的功效。此外，茄子所含的B族维生素对痛经、慢性胃炎及肾炎水肿
: 等也有一定辅助治疗作用。也有些人不适宜吃茄子。茄子性凉，体弱胃寒的人不宜多吃
: 。老茄子，特别是秋后的老茄子有较多茄碱，对人体有害，不宜多吃。油炸茄子会造成
: 维生素P大量损失，挂糊上浆后炸制能减少这种损失。在茄子萼片与果实相连接的地方
: ，有一圈浅色环带，这条带越宽、越明显、就说明茄子果实正快速生长，没有老化。如
: 果环带不明显，说明茄子采收时已停止生长，此时的茄子已经变老，影响食用。茄子里
: 的维生素(毫克)A(微克)B1B2B6B12(微克)CD(微克)E630.030.040.06-8-1.13生物素(微
: 克)K(微克)P(微克)胡萝卜素叶酸(微克)泛酸烟酸矿物质元素(毫克)钙-99000.04190.60

b*y2010-02-28 08:02

13 楼

用提质粒的柱子做回收

l*i2010-02-28 08:02

14 楼

为什么？

【在 S******a 的大作中提到】

: 这样肝脏的负担很容易加大啊。

s*r2010-02-28 08:02

15 楼

就是low melting agarose,
run完胶，65 C 就可以融化，这儿有个protocol
http://thalamus.wustl.edu/nonetlab/ResourcesF/clone.html
不过要向干净的话，还是要phenol extract, ethanol precipitation.
不用kit，不会bind在柱子上。

什么是低熔点胶？为什么会帮助？不好意思，我孤陋寡闻。

【在 h*******0 的大作中提到】

: 什么是低熔点胶？为什么会帮助？不好意思，我孤陋寡闻。

p*e2010-02-28 08:02

16 楼

豇豆生吃？有皂角素，有毒的，绝对不能生吃豇豆类的东西。
茄子有碱味，生吃的话口感估计像嚼棉花。
我知道中国茄子可以蒸着吃啦，但是总得换换口味，炒的茄子还是很香的。

【在 b*****n 的大作中提到】

: 生吃。茄子和豇豆都可以

l*12010-02-28 08:02

17 楼

You can use QiaEx II to recover DNAs up to 50kb:
http://www1.qiagen.com/Products/DnaCleanup/QIAEXIIGelExtractionSystem/QIAEXIIGelExtractionKit.aspx

3kb

【在 h*******0 的大作中提到】

s*e2010-02-28 08:02

18 楼

你对。茄子也是有细胞壁的，哪有那么简单泡下水就没有了。

【在 p*****e 的大作中提到】

h*02010-02-28 08:02

19 楼

我用过QiaEX II,效果也不好，产量也很低，也连不上去。

h*02010-02-28 08:02

20 楼

谢谢。我试试这个low melting agarose protocol.

a*k2010-02-28 08:02

21 楼

最简单的办法，跑完胶把band切下来包在parafilm里面，直接用手把水挤出来。那些
TAE/TBE就可以直接用来做ligation了。效率不高，但是doable

【在 h*******0 的大作中提到】

: 谢谢。我试试这个low melting agarose protocol.

l*12010-02-28 08:02

22 楼

Sorry to hear that but I've used that for 20kb vector + 350bp insert.
And it worked for me.

【在 h*******0 的大作中提到】

: 我用过QiaEX II,效果也不好，产量也很低，也连不上去。

h*02010-02-28 08:02

23 楼

那你用什么方法大提质粒的？我用Qiagen的柱子却大提不出来，小提没问题，后来用
CsCl的老方法，提倒是提出来了，产量还是不高。请教一下。谢谢。

l*12010-02-28 08:02

24 楼

I generally have no problems in midi preps for our transgenic constructs
which are usually around 15-21kb.
However, as suggested in the Qiagen protocols, you can pre-warm the elution
buffers to 65C to increase the yield of large plasmids. You could also try
to elute the DNAs slowly to increase the time needed for large DNAs to be
dissolved off the columns.

【在 h*******0 的大作中提到】

: 那你用什么方法大提质粒的？我用Qiagen的柱子却大提不出来，小提没问题，后来用
: CsCl的老方法，提倒是提出来了，产量还是不高。请教一下。谢谢。

h*02010-02-28 08:02

25 楼

This plasmid(villin-deta ATG) is really weird one. Thanks a lot for your
advice. I will give another try according to your advice.

f*u2010-02-28 08:02

26 楼

连接的时候试试看不要切胶回收载体，直接PCR回收
另外你可以用100ml或者更多的细菌做mini prep，
虽然按照protocol这么多体积应当作midi，
但是不用管它，把所有的裂解液都上到小柱子上再洗脱就是了，可以增加浓度。

【在 h*******0 的大作中提到】

: This plasmid(villin-deta ATG) is really weird one. Thanks a lot for your
: advice. I will give another try according to your advice.