Ni柱提纯蛋白为什么总有14KD杂带？镍柱不好用吗？ - 未名空间MITBBS历史存档

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Ni柱提纯蛋白为什么总有14KD杂带？镍柱不好用吗？

Ni柱提纯蛋白为什么总有14KD杂带？镍柱不好用吗？# Biology - 生物学

s*n2010-03-04 08:03

1 楼

好期待2015年年底的汇率再现

b*z2010-03-04 08:03

2 楼

如果有人，加入美国国籍，那他的中国国籍没了。
接下来，如果再加入新加坡国籍，那的美国国籍会没吗？还是可以同时拥有。？

a*t2010-03-04 08:03

3 楼

家里有亲戚来，说是要逛逛这边的古董市场，不是美国那种跳蚤市场，是要正儿八经的
亚洲古董的那种市场或者拍卖行什么的，有知道的大仙儿能给指个路么？谢谢了

c*g2010-03-04 08:03

4 楼

【以下文字转载自 BibleStudy 俱乐部】
发信人: wheatthin (点点), 信区: BibleStudy
标题: 基督徒该怎么看待不好的婆媳关系
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Jun 23 11:36:52 2011, 美东)
我公婆去年来跟我们住了两个月，因为一些原因，对我百般挑剔。老公开始还帮我说话
，时间久了，因为我从来不说他们不好，只有他们说我不好，老公开始偏向他们，帮着
一起说我。
我虽然信主有一些年，灵命还是比较软弱。我自己知道，他们再呆下去，我会毫不犹豫
地离婚的。感谢主的怜悯，家里又发生一件事情，他们提前回去了。周围的交心姐妹也
觉得可能是主看我快支持不下去而帮我移开了这个负担。
读经的时候，每每看到教导我们原谅别人的经文，我总能感到主对我的期望，也在那个
时刻，我愿意放下心里的哀怨，完全原谅他们。
可是在网上，也会不由自主地去看媳妇抱怨公婆的帖子。一般如果公婆真的苦待了媳妇
，回帖里基本是看不见“原谅”这个词。反而，会说媳妇一味忍让，才有公婆变本加厉
。我的一个亲近的朋友，也是主里的姐妹，听我诉苦以后，直觉上凭血气的第一反应，
也是说我太软弱。
我基本上是想，以后再也不跟公婆有任何交往了。如果他们要再来，我就趁那个时间休
假回国。我也不跟老公一起回国了，最多我回国如果他们在家，我去看望他们一次，一
个小时。我的想法对吗？

m*m2010-03-04 08:03

5 楼

提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
了？大家说说有没有这种情况？
而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪

f*t2010-03-04 08:03

6 楼

US doesnt recognize dual citizenship. so i guess if you join Singapore
citizenship, you arent us citizen anymore as far US government is concerned.
it is not a bad thing, if you are doing well in Singapore. otherwise you
have to pay us taxes too.

b*w2010-03-04 08:03

7 楼

好东西都在老藏家手里藏着呢，你如果平时不玩收藏，很难进入他们的圈子，他们手里
的好东西也轻易不视人。。。市面上，如古董市场的，几乎没有什么能看的。

i*t2010-03-04 08:03

8 楼

什么原因？会让别人百般挑剔？

【在 c****g 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 BibleStudy 俱乐部】
: 发信人: wheatthin (点点), 信区: BibleStudy
: 标题: 基督徒该怎么看待不好的婆媳关系
: 发信站: BBS 未名空间站 (Thu Jun 23 11:36:52 2011, 美东)
: 我公婆去年来跟我们住了两个月，因为一些原因，对我百般挑剔。老公开始还帮我说话
: ，时间久了，因为我从来不说他们不好，只有他们说我不好，老公开始偏向他们，帮着
: 一起说我。
: 我虽然信主有一些年，灵命还是比较软弱。我自己知道，他们再呆下去，我会毫不犹豫
: 地离婚的。感谢主的怜悯，家里又发生一件事情，他们提前回去了。周围的交心姐妹也
: 觉得可能是主看我快支持不下去而帮我移开了这个负担。

W*e2010-03-04 08:03

9 楼

不是你蛋白的降解产物? 另外镍柱的特异性不好, 能拖下来很多杂蛋白

道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白

【在 m****m 的大作中提到】

: 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
: 了？大家说说有没有这种情况？
: 而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪

a*d2010-03-04 08:03

10 楼

美中的"不承认双重国籍"是不一样的：
加入其他国籍会令你失去中国国籍，中国只承认你的外国国籍。
加入其他国籍*不*会令你失去美国国籍，美国始终只承认你的美国国籍。

a*t2010-03-04 08:03

11 楼

谢谢，一般这些圈子的人都在哪里活动啊？莫非是需要熟人推荐的？
有像北京潘家园这样的地方可以逛逛么？谢谢提点啊~

【在 b*w 的大作中提到】

: 好东西都在老藏家手里藏着呢，你如果平时不玩收藏，很难进入他们的圈子，他们手里
: 的好东西也轻易不视人。。。市面上，如古董市场的，几乎没有什么能看的。

M*n2010-03-04 08:03

12 楼

婆婆是异教徒？

【在 i*****t 的大作中提到】

: 什么原因？会让别人百般挑剔？

a*a2010-03-04 08:03

13 楼

Ni-NTA下来的就永远不可能一条带

蛋白

【在 W*********e 的大作中提到】

: 不是你蛋白的降解产物? 另外镍柱的特异性不好, 能拖下来很多杂蛋白
:
: 道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白

m*r2010-03-04 08:03

14 楼

美中的"不承认双重国籍"是不一样的：
加入其他国籍会令你失去中国国籍，中国只承认你的外国国籍。
加入其他国籍*不*会令你失去美国国籍，美国只承认你的美国国籍当你对美国有用时。
美国只承认你的外国国籍当你对他没用时。。

【在 a*******d 的大作中提到】

: 美中的"不承认双重国籍"是不一样的：
: 加入其他国籍会令你失去中国国籍，中国只承认你的外国国籍。
: 加入其他国籍*不*会令你失去美国国籍，美国始终只承认你的美国国籍。

b*w2010-03-04 08:03

15 楼

如果走马观花，纽约曼哈顿有几家古董商的店可以看看，但不会有合适的东西买。

【在 a********t 的大作中提到】

: 谢谢，一般这些圈子的人都在哪里活动啊？莫非是需要熟人推荐的？
: 有像北京潘家园这样的地方可以逛逛么？谢谢提点啊~

i*t2010-03-04 08:03

16 楼

哦。有一方估计加尔文派的

【在 M******n 的大作中提到】

: 婆婆是异教徒？

a*y2010-03-04 08:03

17 楼

14 kd的杂带在Ni column很常见，35 mM 能洗掉

道lysozyme没被洗掉吗？按理
lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白

【在 m****m 的大作中提到】

Q*K2010-03-04 08:03

18 楼

加入美国国籍后，再加入其它承认双重国籍的国家，你就可以有两个国籍了
很多印度人和台湾人都有两本护照
希望中国什么时候也承认

a*t2010-03-04 08:03

19 楼

谢谢，那华盛顿是不是就没有什么可以去的地方了?

【在 b*w 的大作中提到】

: 如果走马观花，纽约曼哈顿有几家古董商的店可以看看，但不会有合适的东西买。

E*m2010-03-04 08:03

20 楼

基督教沒用的

m*m2010-03-04 08:03

21 楼

NI柱特异性不好，那怎么办呢？
14 kd的杂带在Ni column很常见吗？，我是用35 mM 洗的，但是似乎没有完全洗掉
这么说不是LYSOZYME咯？

G*i2010-03-04 08:03

22 楼

中国海外公民众多
双重国籍问题错综复杂牵涉面太广
短期内不大可能实现。。。

【在 Q*K 的大作中提到】

: 加入美国国籍后，再加入其它承认双重国籍的国家，你就可以有两个国籍了
: 很多印度人和台湾人都有两本护照
: 希望中国什么时候也承认

m*m2010-03-04 08:03

23 楼

顶啊顶，帖子沉好快

a*d2010-03-04 08:03

24 楼

承认双重国籍，有很高的成本。
美国对绿卡都是全球征税，中国连自己公民全球征税都做不到的。
于是索性就放弃部分主权，任由其他国家的国籍/永久居住权剥夺本国国民的国籍。

【在 G******i 的大作中提到】

: 中国海外公民众多
: 双重国籍问题错综复杂牵涉面太广
: 短期内不大可能实现。。。

m*m2010-03-04 08:03

25 楼

降解了吗？不会那么容易降解吧？

蛋白

【在 W*********e 的大作中提到】

b*n2010-03-04 08:03

26 楼

贴个电泳图上来吧

【在 m****m 的大作中提到】

: 顶啊顶，帖子沉好快

a*e2010-03-04 08:03

27 楼

if you add lysozyme in lysis/purification, most probably it is the lysozyme.

道lysozyme没被洗掉吗？按理
lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白

【在 m****m 的大作中提到】

m*22010-03-04 08:03

28 楼

there are lots of proteins with multiple His residues. they bind to Ni-NTA.

道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白

【在 m****m 的大作中提到】

W*o2010-03-04 08:03

29 楼

I have same trouble before. After I removed lysome, only sonicate, then this
14 kD band disappeared.

a*e2010-03-04 08:03

30 楼

make sense. because that band is lysozyme, if supplemented with lysozyme in
lysis.
Some people even get crystals, but later on it proved to be lysozyme crystal.

this

【在 W*****o 的大作中提到】

: I have same trouble before. After I removed lysome, only sonicate, then this
: 14 kD band disappeared.

K*F2010-03-04 08:03

31 楼

用Cobalt柱！

b*n2010-03-04 08:03

32 楼

能说说Cobalt柱的好处么？

【在 K*F 的大作中提到】

: 用Cobalt柱！

k*u2010-03-04 08:03

33 楼

有些杂带bind Ni，但不bind Cobalt，亲身体会。。。
可以考虑尝试。个人的使用感受，cobalt特异性高一点，但是binding的affinity
没有NiNTA高。

【在 b******n 的大作中提到】

: 能说说Cobalt柱的好处么？