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请教：如何灵敏检测 40-50 nt viral RNA
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请教：如何灵敏检测 40-50 nt viral RNA# Biology - 生物学
t*2
1 楼
请教版上的同学们，我有个比较棘手的J1豁免的问题
我是2009年到美国，J1签证在美国一年，是美国这边的老板给的工资。这段时间国内的
硕士还没有毕业。2010年转成F1在美国读书，也是美国老板给工资，直到现在，预计明
年毕业。
在2011年的时候，我回中科院硕士答辩。但是没有硕士学位证，硕士毕业证。我当时拿
到了所里面给开的信，证明同所里结清了经济关系，所里同意我办理J1豁免。
如果说我没有毕业证和学位证，只有所里的信，能不能办理J1豁免哪？眼看就要毕业了
，有点着急
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o*a
2 楼
问问前辈们，
我5月毕业，没有参加毕业典礼。现在是OPT实习期刚开始。
如果参加12月的毕业典礼，父母能以这个理由签过来看看我么？（我F1，当年一签过，
一直没有回过国）
妈妈10年前商务来访美国两次，良好记录。
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m*1
3 楼
?
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v*n
4 楼
晕死, 前段时间忙着准备面试忘了买apple care. 郁闷.
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d*1
5 楼
基本思路就是用JS/HMTL建立简单的界面， 用户点击一番产生一些SQL QUERY, 通过API
传给SERVER上的数据库 （MYSQL之类的）， QUERY结果返回CLIENT生成一些DASHBOARD
， VISUALIZATION之类。
工具吗， 比较欣赏JQuery/Bootstrap/Publisher这样的library. 主要的原因是在以前
的工作中很有限的接触过用这套框架生产的web app. 觉得很酷， 自己也在这套框架中
做过一点修修补补，依葫芦画瓢的工作， 但是理解不深， 没有独立deploy的能力。
有可能自学吗？　有没有什么step by step 的tutorial吗？
再次叩谢了。
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z*m
6 楼
本人生物菜鸟，请教版上牛人，万分感谢！！！
想检测老鼠体外培养细胞中病毒感染前期，病毒RNA是否和目标蛋白结合成RNP complex。
目标蛋白IP抗体available，想检测的viral RNA 为40－50 nt的leader sequence （
LeRNA）。
做了些homework，准备用目标蛋白pulldown，PK处理，纯化RNA组分，northern检测。
问题：
1）由于个人原因，不想用同位素标记探真做northern，不知可否用dig－probe做
northern，主要担心RNA量太少，不知道dig的灵敏度是否足够。
2）由于目标RNA只有40－50 nt，请问northern 的DNA或RNA probe是否只能是这40－
50nt的序列？如果probe只有40－50 nt，是否太短？尤其是用dig－UTP标记？可否适当
延长probe至200 nt－300nt（后续sequence是病毒的另外一个高表达基因，如果该基因
mRNA也和目标蛋白结合最好，如果不和目标蛋白结合，是否延长的probe检测不到40－50nt的leRNA？）
3）除了northern，
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h*n
7 楼
谁规定了没有毕业证不能办豁免？

【在 t****2 的大作中提到】
: 请教版上的同学们，我有个比较棘手的J1豁免的问题
: 我是2009年到美国，J1签证在美国一年，是美国这边的老板给的工资。这段时间国内的
: 硕士还没有毕业。2010年转成F1在美国读书，也是美国老板给工资，直到现在，预计明
: 年毕业。
: 在2011年的时候，我回中科院硕士答辩。但是没有硕士学位证，硕士毕业证。我当时拿
: 到了所里面给开的信，证明同所里结清了经济关系，所里同意我办理J1豁免。
: 如果说我没有毕业证和学位证，只有所里的信，能不能办理J1豁免哪？眼看就要毕业了
: ，有点着急
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s*g
8 楼
毕业典礼的理由不是那么好用的。
我妈就是第一次说毕业典礼没过，第二次就是说来看女儿女婿就过了。
所以还是实话实说，就是看女儿来的。
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t*d
9 楼
所以美元更坚挺啊。加上量化宽松淡出，美元涨，黄金跌是中长期趋势。
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p*2
10 楼
用angular吧

API
DASHBOARD

【在 d*******1 的大作中提到】
: 基本思路就是用JS/HMTL建立简单的界面， 用户点击一番产生一些SQL QUERY, 通过API
: 传给SERVER上的数据库 （MYSQL之类的）， QUERY结果返回CLIENT生成一些DASHBOARD
: ， VISUALIZATION之类。
: 工具吗， 比较欣赏JQuery/Bootstrap/Publisher这样的library. 主要的原因是在以前
: 的工作中很有限的接触过用这套框架生产的web app. 觉得很酷， 自己也在这套框架中
: 做过一点修修补补，依葫芦画瓢的工作， 但是理解不深， 没有独立deploy的能力。
: 有可能自学吗？　有没有什么step by step 的tutorial吗？
: 再次叩谢了。
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a*e
11 楼
(1)try p32 probe, that's better than dig-probe. try use StarFire kit to
increase the sensitivity of your probe (~10x).
(2)40-50 nt probe is more than enough. People can usually blot small RNAs
with 20-30 nt probes (after StarFire labeling)
(3) you can try Tagman-qPCR or splinted-ligation assay, or LNA probe to do
northern blot
(4) deep sequencing w/ or w/o cloning
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s*u
12 楼
Seriously talk to Chinese Consulate officer who is in charge in your waiver.

【在 t****2 的大作中提到】
: 请教版上的同学们，我有个比较棘手的J1豁免的问题
: 我是2009年到美国，J1签证在美国一年，是美国这边的老板给的工资。这段时间国内的
: 硕士还没有毕业。2010年转成F1在美国读书，也是美国老板给工资，直到现在，预计明
: 年毕业。
: 在2011年的时候，我回中科院硕士答辩。但是没有硕士学位证，硕士毕业证。我当时拿
: 到了所里面给开的信，证明同所里结清了经济关系，所里同意我办理J1豁免。
: 如果说我没有毕业证和学位证，只有所里的信，能不能办理J1豁免哪？眼看就要毕业了
: ，有点着急
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s*x
13 楼
没错。许多人以为毕业典礼是尚方宝剑，拿了根鸡毛就当令箭了，但是其实这个借口很
一般。
美国签证官也许会想：在中国大学毕业的时候，有多少家长去毕业典礼的？许多学生自
己都不去。现在要去美国了，倒想到这个借口了？
尤其楼主的情况，大多数学校12月都没有毕业典礼，即使有，规模的形式都远远不如夏
天的。而且绝大多数学校都允许秋天毕业的学生选择参加来年夏天的正规毕业典礼。所
以你现在用这个作理由更不能让签证官信服。

【在 s*******g 的大作中提到】
: 毕业典礼的理由不是那么好用的。
: 我妈就是第一次说毕业典礼没过，第二次就是说来看女儿女婿就过了。
: 所以还是实话实说，就是看女儿来的。
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d*1
14 楼
也好啊，　有没有什么step by step的教程呢？

【在 p*****2 的大作中提到】
: 用angular吧
:
: API
: DASHBOARD
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z*m
15 楼
谢谢了！能再请问一下tagman－qPCR具体有什么注意事项吗？LNA probe是不是可以避
免同位素?包子感谢了！

【在 a***e 的大作中提到】
: (1)try p32 probe, that's better than dig-probe. try use StarFire kit to
: increase the sensitivity of your probe (~10x).
: (2)40-50 nt probe is more than enough. People can usually blot small RNAs
: with 20-30 nt probes (after StarFire labeling)
: (3) you can try Tagman-qPCR or splinted-ligation assay, or LNA probe to do
: northern blot
: (4) deep sequencing w/ or w/o cloning
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s*u
16 楼
See
See
http://www.mitbbs.com/article_t2/Postdoc/31282425.html

【在 t****2 的大作中提到】
: 请教版上的同学们，我有个比较棘手的J1豁免的问题
: 我是2009年到美国，J1签证在美国一年，是美国这边的老板给的工资。这段时间国内的
: 硕士还没有毕业。2010年转成F1在美国读书，也是美国老板给工资，直到现在，预计明
: 年毕业。
: 在2011年的时候，我回中科院硕士答辩。但是没有硕士学位证，硕士毕业证。我当时拿
: 到了所里面给开的信，证明同所里结清了经济关系，所里同意我办理J1豁免。
: 如果说我没有毕业证和学位证，只有所里的信，能不能办理J1豁免哪？眼看就要毕业了
: ，有点着急
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o*a
17 楼
谢谢！您说的这个我还真是没有想到过。谢谢你的提醒！

【在 s******x 的大作中提到】
: 没错。许多人以为毕业典礼是尚方宝剑，拿了根鸡毛就当令箭了，但是其实这个借口很
: 一般。
: 美国签证官也许会想：在中国大学毕业的时候，有多少家长去毕业典礼的？许多学生自
: 己都不去。现在要去美国了，倒想到这个借口了？
: 尤其楼主的情况，大多数学校12月都没有毕业典礼，即使有，规模的形式都远远不如夏
: 天的。而且绝大多数学校都允许秋天毕业的学生选择参加来年夏天的正规毕业典礼。所
: 以你现在用这个作理由更不能让签证官信服。
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a*e
19 楼
haven't used taqman-qPRC myself.
LNA probe is still p32 labeling, haven't tried that myself either.
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l*n
21 楼
关键是找个好模板。

【在 l**********n 的大作中提到】
: 这东西还需要tutorial？直接找个模板就上手了
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S*w
22 楼
能推荐个模板吗

【在 l**********n 的大作中提到】
: 关键是找个好模板。
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T*e
23 楼
磨刀不误砍柴工，先学学JS吧，真的不是Java
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