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请问Co-IP with FLAG tagged proteins

请问Co-IP with FLAG tagged proteins# Biology - 生物学

c*t2010-04-18 07:04

1 楼

如果想证明A和B相互作用，在CELL LINE里表达FLAG epitope-tagged A
然后证明B也能一起被PULL DOWN
这个方法有什么缺点吗（我觉得这种大量表达某种蛋白可能会造成某些ARTEFACT？）
为什么要用FLAG TAGGED A呢
直接拿cell lysate做CoIP为什么不行呀
请达人指点下，多谢！：）

i*d2010-04-18 07:04

2 楼

anti-FLAG的抗体做IP比较好，的确外源性表达的蛋白有可能出现artifical effect.
直接用cell lysate的话，可能因为目的蛋白抗体的原因，不适合做IP，或是很难做，
外源性tagged的蛋白好做多了。

s*y2010-04-18 07:04

3 楼

可能是因为内源蛋白的量不够多，做出来的结果不漂亮呗。
这个当然可能会造成假象。

【在 c*********t 的大作中提到】

: 如果想证明A和B相互作用，在CELL LINE里表达FLAG epitope-tagged A
: 然后证明B也能一起被PULL DOWN
: 这个方法有什么缺点吗（我觉得这种大量表达某种蛋白可能会造成某些ARTEFACT？）
: 为什么要用FLAG TAGGED A呢
: 直接拿cell lysate做CoIP为什么不行呀
: 请达人指点下，多谢！：）