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求助~如何在sample浓度大的情况下跑出比较漂亮整齐的western?
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求助~如何在sample浓度大的情况下跑出比较漂亮整齐的western?# Biology - 生物学
M*9
1
1987-W $50 (1 oz.) Proof Gold Eagle NGC PF70 Ultra Cameo
1750 PP GIFT,包邮。
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p*s
2
谢谢
◆ Sent from OneTap MITBBS Reader for Windows Phone
[发表自未名空间手机版 - m.mitbbs.com]
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s*k
3
班里有个小孩威信很高,对手下不错,但是要手下绝对服从,
否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵,还是
被孤立?那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。
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r*m
4
因为要detect的protein浓度比较小,所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
serum. 这让sample狠粘,跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下,调整哪些条件让胶跑的整齐漂
亮点?
我们用的是全套invitrogen nupage system
sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的,说是比100度煮,条带
可以sharp点。instruction说10分钟,我还加了5分钟)
4%-12% bis-tris gel, 160 v 跑1个半小时的样子。
非常感谢~~~~~~~!!
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m*g
5
要按照娃的年龄,每个年龄都有他们自己的fantasy,如果你在照片里面实现fantasy,
对他们来说很美妙,对看的人来说也是一种新鲜的体验
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p*9
6
小时候当过兵的人飘走...
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r*m
7
绝望的自己顶以下。。。
我能想到的,就是电压小点,慢慢的跑。。。不知道对不

mouse

【在 r******m 的大作中提到】
: 因为要detect的protein浓度比较小,所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
: serum. 这让sample狠粘,跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
: 请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下,调整哪些条件让胶跑的整齐漂
: 亮点?
: 我们用的是全套invitrogen nupage system
: sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的,说是比100度煮,条带
: 可以sharp点。instruction说10分钟,我还加了5分钟)
: 4%-12% bis-tris gel, 160 v 跑1个半小时的样子。
: 非常感谢~~~~~~~!!

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b*t
8
比如,娃娃捧个巨大的鸡蛋?把你那个西瓜换成鸡蛋就成。
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s*k
9
你当时的长官对你说:咱们不和xxx玩么?要是没说过,那还算个好长官。

【在 p********9 的大作中提到】
: 小时候当过兵的人飘走...
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l*e
10
才能跑5ul啊,我们的一个孔可以跑60ul...
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m*n
11
你这话是影射谁?谁要谁服从谁了?
如果你家孩子撞上同学对别人说他坏话,你会让他和那个同学哥俩好吗?还是你会让你
家小孩躲着那个同学点,和别的同学玩? 如果你让你家小孩以后少和那个同学玩,是
不是就是在教他搞小团体?
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T*t
12
跑大胶,厚胶?
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y*i
13
有啥证据吗?
真人秀里听见啥了?

【在 s******k 的大作中提到】
: 班里有个小孩威信很高,对手下不错,但是要手下绝对服从,
: 否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵,还是
: 被孤立?那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。

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r*a
14
跑一个小时看看
sample加样前先高速离心

mouse

【在 r******m 的大作中提到】
: 因为要detect的protein浓度比较小,所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
: serum. 这让sample狠粘,跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
: 请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下,调整哪些条件让胶跑的整齐漂
: 亮点?
: 我们用的是全套invitrogen nupage system
: sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的,说是比100度煮,条带
: 可以sharp点。instruction说10分钟,我还加了5分钟)
: 4%-12% bis-tris gel, 160 v 跑1个半小时的样子。
: 非常感谢~~~~~~~!!

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y*i
15
我只知道,6进5之前,刘忻同学还给ls和hc留饭,并且一个一个剥虾皮给她们来着呢。
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f*r
16
与细胞/组织匀浆不同,血清中dna极低。粘稠主要因为蛋白和血脂。楼上说超高速离心
,是个不错的办法。能够去掉很多悬浊微粒。如果样品量有限,可以加过lysis buffer
以后再离心。
稀释总蛋白浓度。如果5ul/well这个量不能再降低,可以象楼上所说,用大胶、厚胶,
想办法增加volume/well。
如果有条件,可以用filter过滤掉不需要的蛋白。一般,条带扭曲多发生在小分子量。我估计你要的蛋白就不大。那么,你可以根据分子量,过滤掉大分子蛋白。millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
条带形状不规整,很大程度上还因为蛋白denature得不够好。可以适当在loading buffer里增加sds浓度。
由于loading buffer与running buffer之间在表面活性上有差异,可以造成条带的扭曲
。为此,可以选用taurin buffer(代替glycin buffer)以弱化条带扭曲。甚至,有的
pi曾经建议,在上样之前,空跑至少10分钟。
用一般的样品跑胶,那么胶的品牌与型号之间的优劣不是很明显。你的sample比较特殊
,可能就放大了各厂家产品之间
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p*9
17
早忘了,只记得大家都小鸡似的躲在某大姐大的照耀之下,天天xx姐姐的叫……

【在 s******k 的大作中提到】
: 你当时的长官对你说:咱们不和xxx玩么?要是没说过,那还算个好长官。
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r*m
18
Thank you sooooo much~!!!!!
I need to print this out and keep it to my protocol record.
suggest banzhu to add it to jinghuaqu ah...

buffer
。我估计你要的蛋白就不大。那么,你可以根据分子量,过滤掉大分子蛋白。
millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
buffer里增加sds浓度。

【在 f*********r 的大作中提到】
: 与细胞/组织匀浆不同,血清中dna极低。粘稠主要因为蛋白和血脂。楼上说超高速离心
: ,是个不错的办法。能够去掉很多悬浊微粒。如果样品量有限,可以加过lysis buffer
: 以后再离心。
: 稀释总蛋白浓度。如果5ul/well这个量不能再降低,可以象楼上所说,用大胶、厚胶,
: 想办法增加volume/well。
: 如果有条件,可以用filter过滤掉不需要的蛋白。一般,条带扭曲多发生在小分子量。我估计你要的蛋白就不大。那么,你可以根据分子量,过滤掉大分子蛋白。millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
: 条带形状不规整,很大程度上还因为蛋白denature得不够好。可以适当在loading buffer里增加sds浓度。
: 由于loading buffer与running buffer之间在表面活性上有差异,可以造成条带的扭曲
: 。为此,可以选用taurin buffer(代替glycin buffer)以弱化条带扭曲。甚至,有的
: pi曾经建议,在上样之前,空跑至少10分钟。

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i*a
19
小女孩里的那个小九九可不是盖的。
那会三四年级的时候,我们班上两个女生都是漂亮聪明型,明争暗斗的不可开交。一致
于其中一个的老妈找到我们家来要我在班上选择表态。我们三个算是成绩前三吧,只是
我丑一点,又是典型的闷葫芦,这位老妈可是我妈的顶头上司啊,在我们家讲了半天,
我没有吭声也不肯承诺自己会表态,她走了以后,我被老妈臭骂了一顿。其实呢我是觉
得她女儿性格更好一些,虽然我和另一个女生因为住在同一幢楼里走得近一些(这位可
不是吃素的)。不过我顶讨厌大家搞这些乱七八糟的,实力说活。
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r*m
20
you mean shorter time, higher voltage?

【在 r******a 的大作中提到】
: 跑一个小时看看
: sample加样前先高速离心
:
: mouse

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s*k
21
我怎么教导我的小孩是我的事,我不会让别的小孩教导我的小孩,
也不会让我的小孩教导别的小孩。我自己也不会教导别人家的小孩。

【在 m********n 的大作中提到】
: 你这话是影射谁?谁要谁服从谁了?
: 如果你家孩子撞上同学对别人说他坏话,你会让他和那个同学哥俩好吗?还是你会让你
: 家小孩躲着那个同学点,和别的同学玩? 如果你让你家小孩以后少和那个同学玩,是
: 不是就是在教他搞小团体?

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h*6
22
I remember there is antibody-bead method for pull down abundant albumin in
serum.
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s*k
23
鉴于你的逻辑理解能力,再明确说一下:刘愿意和谁玩是她自己的事,
无论什么原因去影响别人去孤立一个人都是我讨厌的。
刘自己保李留下杨我没意见,但是影响大众投票淘汰陆不可以。

【在 s******k 的大作中提到】
: 我怎么教导我的小孩是我的事,我不会让别的小孩教导我的小孩,
: 也不会让我的小孩教导别的小孩。我自己也不会教导别人家的小孩。

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I*a
24
最近泡了一个高溶度胶,一塌糊涂
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m*n
25
她想影响别人是一回事,她能不能影响别人是另一回事。 参加投票的都是大人,他们
的投票是不是被某人影响了谁能证明? 就凭几个20岁上下的女生可以影响1000个成年
人,(这还是总决赛初期,粉丝群还未成型),那她们几个也太能呼风唤雨了,还参加
什么快女呀。

【在 s******k 的大作中提到】
: 鉴于你的逻辑理解能力,再明确说一下:刘愿意和谁玩是她自己的事,
: 无论什么原因去影响别人去孤立一个人都是我讨厌的。
: 刘自己保李留下杨我没意见,但是影响大众投票淘汰陆不可以。

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p*l
26
到哪不都是这样吗。出了个国越发单纯了。

【在 s******k 的大作中提到】
: 班里有个小孩威信很高,对手下不错,但是要手下绝对服从,
: 否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵,还是
: 被孤立?那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。

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s*k
27
教唆大人犯罪就清白了?这个逻辑有意思。就算没有一个人被影响,她就做对了?
你知道什么叫杀人终止,强奸未遂么?
另外,谁说过刘的铁粉都是总决赛前吸的?请站出来。

【在 m********n 的大作中提到】
: 她想影响别人是一回事,她能不能影响别人是另一回事。 参加投票的都是大人,他们
: 的投票是不是被某人影响了谁能证明? 就凭几个20岁上下的女生可以影响1000个成年
: 人,(这还是总决赛初期,粉丝群还未成型),那她们几个也太能呼风唤雨了,还参加
: 什么快女呀。

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