求助~如何在sample浓度大的情况下跑出比较漂亮整齐的western?# Biology - 生物学
M*9
1 楼
1987-W $50 (1 oz.) Proof Gold Eagle NGC PF70 Ultra Cameo
1750 PP GIFT，包邮。
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p*s
2 楼
谢谢
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s*k
3 楼
班里有个小孩威信很高，对手下不错，但是要手下绝对服从，
否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵，还是
被孤立？那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。
否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵，还是
被孤立？那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。
r*m
4 楼
因为要detect的protein浓度比较小，所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
serum. 这让sample狠粘，跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下，调整哪些条件让胶跑的整齐漂
亮点？
我们用的是全套invitrogen nupage system
sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的，说是比100度煮，条带
可以sharp点。instruction说10分钟，我还加了5分钟）
4%-12% bis-tris gel， 160 v 跑1个半小时的样子。
非常感谢~~~~~~~！！
serum. 这让sample狠粘，跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下，调整哪些条件让胶跑的整齐漂
亮点？
我们用的是全套invitrogen nupage system
sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的，说是比100度煮，条带
可以sharp点。instruction说10分钟，我还加了5分钟）
4%-12% bis-tris gel， 160 v 跑1个半小时的样子。
非常感谢~~~~~~~！！
m*g
5 楼
要按照娃的年龄，每个年龄都有他们自己的fantasy，如果你在照片里面实现fantasy，
对他们来说很美妙，对看的人来说也是一种新鲜的体验
对他们来说很美妙，对看的人来说也是一种新鲜的体验
p*9
6 楼
小时候当过兵的人飘走...
r*m
7 楼
绝望的自己顶以下。。。
我能想到的，就是电压小点，慢慢的跑。。。不知道对不
mouse
【在 r******m 的大作中提到】
: 因为要detect的protein浓度比较小，所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
: serum. 这让sample狠粘，跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
: 请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下，调整哪些条件让胶跑的整齐漂
: 亮点？
: 我们用的是全套invitrogen nupage system
: sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的，说是比100度煮，条带
: 可以sharp点。instruction说10分钟，我还加了5分钟）
: 4%-12% bis-tris gel， 160 v 跑1个半小时的样子。
: 非常感谢~~~~~~~！！
我能想到的，就是电压小点，慢慢的跑。。。不知道对不
mouse
【在 r******m 的大作中提到】
: 因为要detect的protein浓度比较小，所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
: serum. 这让sample狠粘，跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
: 请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下，调整哪些条件让胶跑的整齐漂
: 亮点？
: 我们用的是全套invitrogen nupage system
: sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的，说是比100度煮，条带
: 可以sharp点。instruction说10分钟，我还加了5分钟）
: 4%-12% bis-tris gel， 160 v 跑1个半小时的样子。
: 非常感谢~~~~~~~！！
b*t
8 楼
比如，娃娃捧个巨大的鸡蛋？把你那个西瓜换成鸡蛋就成。
s*k
9 楼
你当时的长官对你说：咱们不和xxx玩么？要是没说过，那还算个好长官。
【在 p********9 的大作中提到】
: 小时候当过兵的人飘走...
【在 p********9 的大作中提到】
: 小时候当过兵的人飘走...
l*e
10 楼
才能跑5ul啊，我们的一个孔可以跑60ul...
m*n
11 楼
你这话是影射谁？谁要谁服从谁了？
如果你家孩子撞上同学对别人说他坏话，你会让他和那个同学哥俩好吗？还是你会让你
家小孩躲着那个同学点，和别的同学玩？ 如果你让你家小孩以后少和那个同学玩，是
不是就是在教他搞小团体？
如果你家孩子撞上同学对别人说他坏话，你会让他和那个同学哥俩好吗？还是你会让你
家小孩躲着那个同学点，和别的同学玩？ 如果你让你家小孩以后少和那个同学玩，是
不是就是在教他搞小团体？
T*t
12 楼
跑大胶，厚胶？
y*i
13 楼
有啥证据吗？
真人秀里听见啥了？
【在 s******k 的大作中提到】
: 班里有个小孩威信很高，对手下不错，但是要手下绝对服从，
: 否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵，还是
: 被孤立？那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。
真人秀里听见啥了？
【在 s******k 的大作中提到】
: 班里有个小孩威信很高，对手下不错，但是要手下绝对服从，
: 否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵，还是
: 被孤立？那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。
r*a
14 楼
跑一个小时看看
sample加样前先高速离心
mouse
【在 r******m 的大作中提到】
: 因为要detect的protein浓度比较小，所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
: serum. 这让sample狠粘，跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
: 请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下，调整哪些条件让胶跑的整齐漂
: 亮点？
: 我们用的是全套invitrogen nupage system
: sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的，说是比100度煮，条带
: 可以sharp点。instruction说10分钟，我还加了5分钟）
: 4%-12% bis-tris gel， 160 v 跑1个半小时的样子。
: 非常感谢~~~~~~~！！
sample加样前先高速离心
mouse
【在 r******m 的大作中提到】
: 因为要detect的protein浓度比较小，所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
: serum. 这让sample狠粘，跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
: 请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下，调整哪些条件让胶跑的整齐漂
: 亮点？
: 我们用的是全套invitrogen nupage system
: sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的，说是比100度煮，条带
: 可以sharp点。instruction说10分钟，我还加了5分钟）
: 4%-12% bis-tris gel， 160 v 跑1个半小时的样子。
: 非常感谢~~~~~~~！！
y*i
15 楼
我只知道，6进5之前，刘忻同学还给ls和hc留饭，并且一个一个剥虾皮给她们来着呢。
f*r
16 楼
与细胞/组织匀浆不同，血清中dna极低。粘稠主要因为蛋白和血脂。楼上说超高速离心
，是个不错的办法。能够去掉很多悬浊微粒。如果样品量有限，可以加过lysis buffer
以后再离心。
稀释总蛋白浓度。如果5ul/well这个量不能再降低，可以象楼上所说，用大胶、厚胶，
想办法增加volume/well。
如果有条件，可以用filter过滤掉不需要的蛋白。一般，条带扭曲多发生在小分子量。我估计你要的蛋白就不大。那么，你可以根据分子量，过滤掉大分子蛋白。millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
条带形状不规整，很大程度上还因为蛋白denature得不够好。可以适当在loading buffer里增加sds浓度。
由于loading buffer与running buffer之间在表面活性上有差异，可以造成条带的扭曲
。为此，可以选用taurin buffer（代替glycin buffer）以弱化条带扭曲。甚至，有的
pi曾经建议，在上样之前，空跑至少10分钟。
用一般的样品跑胶，那么胶的品牌与型号之间的优劣不是很明显。你的sample比较特殊
，可能就放大了各厂家产品之间
，是个不错的办法。能够去掉很多悬浊微粒。如果样品量有限，可以加过lysis buffer
以后再离心。
稀释总蛋白浓度。如果5ul/well这个量不能再降低，可以象楼上所说，用大胶、厚胶，
想办法增加volume/well。
如果有条件，可以用filter过滤掉不需要的蛋白。一般，条带扭曲多发生在小分子量。我估计你要的蛋白就不大。那么，你可以根据分子量，过滤掉大分子蛋白。millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
条带形状不规整，很大程度上还因为蛋白denature得不够好。可以适当在loading buffer里增加sds浓度。
由于loading buffer与running buffer之间在表面活性上有差异，可以造成条带的扭曲
。为此，可以选用taurin buffer（代替glycin buffer）以弱化条带扭曲。甚至，有的
pi曾经建议，在上样之前，空跑至少10分钟。
用一般的样品跑胶，那么胶的品牌与型号之间的优劣不是很明显。你的sample比较特殊
，可能就放大了各厂家产品之间
p*9
17 楼
早忘了，只记得大家都小鸡似的躲在某大姐大的照耀之下，天天xx姐姐的叫……
【在 s******k 的大作中提到】
: 你当时的长官对你说：咱们不和xxx玩么？要是没说过，那还算个好长官。
【在 s******k 的大作中提到】
: 你当时的长官对你说：咱们不和xxx玩么？要是没说过，那还算个好长官。
r*m
18 楼
Thank you sooooo much~!!!!!
I need to print this out and keep it to my protocol record.
suggest banzhu to add it to jinghuaqu ah...
buffer
。我估计你要的蛋白就不大。那么，你可以根据分子量，过滤掉大分子蛋白。
millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
buffer里增加sds浓度。
【在 f*********r 的大作中提到】
: 与细胞/组织匀浆不同，血清中dna极低。粘稠主要因为蛋白和血脂。楼上说超高速离心
: ，是个不错的办法。能够去掉很多悬浊微粒。如果样品量有限，可以加过lysis buffer
: 以后再离心。
: 稀释总蛋白浓度。如果5ul/well这个量不能再降低，可以象楼上所说，用大胶、厚胶，
: 想办法增加volume/well。
: 如果有条件，可以用filter过滤掉不需要的蛋白。一般，条带扭曲多发生在小分子量。我估计你要的蛋白就不大。那么，你可以根据分子量，过滤掉大分子蛋白。millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
: 条带形状不规整，很大程度上还因为蛋白denature得不够好。可以适当在loading buffer里增加sds浓度。
: 由于loading buffer与running buffer之间在表面活性上有差异，可以造成条带的扭曲
: 。为此，可以选用taurin buffer（代替glycin buffer）以弱化条带扭曲。甚至，有的
: pi曾经建议，在上样之前，空跑至少10分钟。
I need to print this out and keep it to my protocol record.
suggest banzhu to add it to jinghuaqu ah...
buffer
。我估计你要的蛋白就不大。那么，你可以根据分子量，过滤掉大分子蛋白。
millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
buffer里增加sds浓度。
【在 f*********r 的大作中提到】
: 与细胞/组织匀浆不同，血清中dna极低。粘稠主要因为蛋白和血脂。楼上说超高速离心
: ，是个不错的办法。能够去掉很多悬浊微粒。如果样品量有限，可以加过lysis buffer
: 以后再离心。
: 稀释总蛋白浓度。如果5ul/well这个量不能再降低，可以象楼上所说，用大胶、厚胶，
: 想办法增加volume/well。
: 如果有条件，可以用filter过滤掉不需要的蛋白。一般，条带扭曲多发生在小分子量。我估计你要的蛋白就不大。那么，你可以根据分子量，过滤掉大分子蛋白。millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
: 条带形状不规整，很大程度上还因为蛋白denature得不够好。可以适当在loading buffer里增加sds浓度。
: 由于loading buffer与running buffer之间在表面活性上有差异，可以造成条带的扭曲
: 。为此，可以选用taurin buffer（代替glycin buffer）以弱化条带扭曲。甚至，有的
: pi曾经建议，在上样之前，空跑至少10分钟。
i*a
19 楼
小女孩里的那个小九九可不是盖的。
那会三四年级的时候，我们班上两个女生都是漂亮聪明型，明争暗斗的不可开交。一致
于其中一个的老妈找到我们家来要我在班上选择表态。我们三个算是成绩前三吧，只是
我丑一点，又是典型的闷葫芦，这位老妈可是我妈的顶头上司啊，在我们家讲了半天，
我没有吭声也不肯承诺自己会表态，她走了以后，我被老妈臭骂了一顿。其实呢我是觉
得她女儿性格更好一些，虽然我和另一个女生因为住在同一幢楼里走得近一些（这位可
不是吃素的）。不过我顶讨厌大家搞这些乱七八糟的，实力说活。
那会三四年级的时候，我们班上两个女生都是漂亮聪明型，明争暗斗的不可开交。一致
于其中一个的老妈找到我们家来要我在班上选择表态。我们三个算是成绩前三吧，只是
我丑一点，又是典型的闷葫芦，这位老妈可是我妈的顶头上司啊，在我们家讲了半天，
我没有吭声也不肯承诺自己会表态，她走了以后，我被老妈臭骂了一顿。其实呢我是觉
得她女儿性格更好一些，虽然我和另一个女生因为住在同一幢楼里走得近一些（这位可
不是吃素的）。不过我顶讨厌大家搞这些乱七八糟的，实力说活。
r*m
20 楼
you mean shorter time, higher voltage?
【在 r******a 的大作中提到】
: 跑一个小时看看
: sample加样前先高速离心
:
: mouse
【在 r******a 的大作中提到】
: 跑一个小时看看
: sample加样前先高速离心
:
: mouse
s*k
21 楼
我怎么教导我的小孩是我的事，我不会让别的小孩教导我的小孩，
也不会让我的小孩教导别的小孩。我自己也不会教导别人家的小孩。
【在 m********n 的大作中提到】
: 你这话是影射谁？谁要谁服从谁了？
: 如果你家孩子撞上同学对别人说他坏话，你会让他和那个同学哥俩好吗？还是你会让你
: 家小孩躲着那个同学点，和别的同学玩？ 如果你让你家小孩以后少和那个同学玩，是
: 不是就是在教他搞小团体？
也不会让我的小孩教导别的小孩。我自己也不会教导别人家的小孩。
【在 m********n 的大作中提到】
: 你这话是影射谁？谁要谁服从谁了？
: 如果你家孩子撞上同学对别人说他坏话，你会让他和那个同学哥俩好吗？还是你会让你
: 家小孩躲着那个同学点，和别的同学玩？ 如果你让你家小孩以后少和那个同学玩，是
: 不是就是在教他搞小团体？
h*6
22 楼
I remember there is antibody-bead method for pull down abundant albumin in
serum.
serum.
s*k
23 楼
鉴于你的逻辑理解能力，再明确说一下：刘愿意和谁玩是她自己的事，
无论什么原因去影响别人去孤立一个人都是我讨厌的。
刘自己保李留下杨我没意见，但是影响大众投票淘汰陆不可以。
【在 s******k 的大作中提到】
: 我怎么教导我的小孩是我的事，我不会让别的小孩教导我的小孩，
: 也不会让我的小孩教导别的小孩。我自己也不会教导别人家的小孩。
无论什么原因去影响别人去孤立一个人都是我讨厌的。
刘自己保李留下杨我没意见，但是影响大众投票淘汰陆不可以。
【在 s******k 的大作中提到】
: 我怎么教导我的小孩是我的事，我不会让别的小孩教导我的小孩，
: 也不会让我的小孩教导别的小孩。我自己也不会教导别人家的小孩。
I*a
24 楼
最近泡了一个高溶度胶，一塌糊涂
m*n
25 楼
她想影响别人是一回事，她能不能影响别人是另一回事。 参加投票的都是大人，他们
的投票是不是被某人影响了谁能证明？ 就凭几个20岁上下的女生可以影响1000个成年
人，（这还是总决赛初期，粉丝群还未成型），那她们几个也太能呼风唤雨了，还参加
什么快女呀。
【在 s******k 的大作中提到】
: 鉴于你的逻辑理解能力，再明确说一下：刘愿意和谁玩是她自己的事，
: 无论什么原因去影响别人去孤立一个人都是我讨厌的。
: 刘自己保李留下杨我没意见，但是影响大众投票淘汰陆不可以。
的投票是不是被某人影响了谁能证明？ 就凭几个20岁上下的女生可以影响1000个成年
人，（这还是总决赛初期，粉丝群还未成型），那她们几个也太能呼风唤雨了，还参加
什么快女呀。
【在 s******k 的大作中提到】
: 鉴于你的逻辑理解能力，再明确说一下：刘愿意和谁玩是她自己的事，
: 无论什么原因去影响别人去孤立一个人都是我讨厌的。
: 刘自己保李留下杨我没意见，但是影响大众投票淘汰陆不可以。
p*l
26 楼
到哪不都是这样吗。出了个国越发单纯了。
【在 s******k 的大作中提到】
: 班里有个小孩威信很高，对手下不错，但是要手下绝对服从，
: 否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵，还是
: 被孤立？那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。
【在 s******k 的大作中提到】
: 班里有个小孩威信很高，对手下不错，但是要手下绝对服从，
: 否则就孤立她。你是希望你家小孩听话给这个小孩当兵，还是
: 被孤立？那时候你就明白为啥这种搞小集团的讨厌了。
s*k
27 楼
教唆大人犯罪就清白了？这个逻辑有意思。就算没有一个人被影响，她就做对了？
你知道什么叫杀人终止，强奸未遂么？
另外，谁说过刘的铁粉都是总决赛前吸的？请站出来。
【在 m********n 的大作中提到】
: 她想影响别人是一回事，她能不能影响别人是另一回事。 参加投票的都是大人，他们
: 的投票是不是被某人影响了谁能证明？ 就凭几个20岁上下的女生可以影响1000个成年
: 人，（这还是总决赛初期，粉丝群还未成型），那她们几个也太能呼风唤雨了，还参加
: 什么快女呀。
你知道什么叫杀人终止，强奸未遂么？
另外，谁说过刘的铁粉都是总决赛前吸的？请站出来。
【在 m********n 的大作中提到】
: 她想影响别人是一回事，她能不能影响别人是另一回事。 参加投票的都是大人，他们
: 的投票是不是被某人影响了谁能证明？ 就凭几个20岁上下的女生可以影响1000个成年
: 人，（这还是总决赛初期，粉丝群还未成型），那她们几个也太能呼风唤雨了，还参加
: 什么快女呀。
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