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请教western的问题

请教western的问题# Biology - 生物学

a*02010-06-19 07:06

1 楼

妈妈下个月过来，初步打算在这边住半年。她的签证有效期明年4月。我姐姐在加拿大
，如果妈妈从美国去姐姐家住一段时间，那么可能到时候直接从加拿大回国，因为返美
签证可能已经过期。如果这样的话我觉得买单程机票比较好，但是这样过关时会不会遇
到麻烦？海关会不会怀疑不会按时返回？可以向官员解释打算去加拿大吗？

w*i2010-06-19 07:06

2 楼

如题，，，唯一的interest收入没有扣州税
谢谢～
f1 resident for tax purposes

f*l2010-06-19 07:06

3 楼

上周去HD，看见有打折，就买了割草的trimmer, 用gas的二冲程的引擎。仔细看了说明
书，二冲程的引擎烧的汽油要加添加剂。package带了一小瓶，可以用来加1 gallon汽
油。看完了，随手就把这些说明书和添加剂放车库里了，跟以前买的割草机的盒子放一
起。
今天去HD买了个1 gallon的汽油桶，倒了1 gallon汽油进去，随手从盒子里拿了一个小
瓶子出来。稍微看了看，以为就是那瓶添加剂，就倒入汽油里去了。使劲摇了摇，接着
倒入trimmer的engine。
然后去盒子找trimmer的说明书，结果看见添加剂的瓶子还在。糟糕，原来倒错了。仔
细看了看之前的瓶子，倒进去的是motor oil！完了，把机油当添加剂倒汽油里去了！
赶紧把engine里的汽油倒出来，倒回汽油桶。这下子好了， 1 gallon的汽油，混合了1
qt左右的motor oil，该怎么办哪？这汽油是废了，可是怎么回收啊？不能乱倒，可是
也不好乱放，那是易燃易爆物品啊。

G*U2010-06-19 07:06

4 楼

i have a LG 52" TV the display is broken, need panel

e*e2010-06-19 07:06

5 楼

我们表达了一个蛋白，三次免疫兔子后得到抗血清，与表达的蛋白质可以很好地免疫反
应，即使将抗血清稀释7000倍，但一旦与棉花和烟草的蛋白质进行 western时，却什么
条带也看不到，我们将植物蛋白上样量甚至提高到了100ug，抗血清稀释4000倍，仍然
检测不到信号，我不知道什么原因，难道提取的蛋白质中有抑制物质吗？盼赐教。

i*r2010-06-19 07:06

6 楼

还是买往返吧，而且单程也不一定比往返的便宜多少。

M*s2010-06-19 07:06

7 楼

都是0，报了如何，不报如何，留归你自己判断吧 LOL

c*w2010-06-19 07:06

8 楼

看来确实是用电的省心啊~
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A*s2010-06-19 07:06

9 楼

太有才了。。。

【在 G**U 的大作中提到】

: i have a LG 52" TV the display is broken, need panel

C*e2010-06-19 07:06

10 楼

你可以说得再清楚一些么
我估计看过贴的人都跟我一样不知道你说的是什么意思
什么叫“一旦与棉花和烟草的蛋白质进行 western时，却什么条带也看不到”
意思是说棉花和烟草的蛋白里也应该有你们表达的这个蛋白的同源蛋白么？
如果是的话，相似度又是多少呢
如果真是这个这样的情况，不一定说一个蛋白的抗血清一定能够识别它的同源蛋白的

【在 e**e 的大作中提到】

: 我们表达了一个蛋白，三次免疫兔子后得到抗血清，与表达的蛋白质可以很好地免疫反
: 应，即使将抗血清稀释7000倍，但一旦与棉花和烟草的蛋白质进行 western时，却什么
: 条带也看不到，我们将植物蛋白上样量甚至提高到了100ug，抗血清稀释4000倍，仍然
: 检测不到信号，我不知道什么原因，难道提取的蛋白质中有抑制物质吗？盼赐教。

x*i2010-06-19 07:06

11 楼

还是要报税，只是不用寄钱收钱。

【在 w*****i 的大作中提到】

: 如题，，，唯一的interest收入没有扣州税
: 谢谢～
: f1 resident for tax purposes

c*w2010-06-19 07:06

12 楼

听说sears那些个卖油的地方都有回收的
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H*g2010-06-19 07:06

13 楼

I guess you meant the antibody could detect E.coli expressed protein, but
cannot detect protein from plant Over-expressin lines. Is this correct? Have
you verified transcript accumulation by RT-PCR first?

M*s2010-06-19 07:06

14 楼

我看眼花了，以为是退的州税要不要报做收入呢（汗）

f*l2010-06-19 07:06

15 楼

回收汽油吗？
在网上找了这个：Household Hazardous Waste。不知道有没有人去过，收钱吗？
http://www.sccgov.org/sites/iwm/Residential/Pages/Household-Haz

【在 c***w 的大作中提到】

: 听说sears那些个卖油的地方都有回收的
: ★ Sent from iPhone App: iReader Mitbbs 7.56 - iPad Lite

e*e2010-06-19 07:06

16 楼

抗体是按照植物蛋白基因序列用Ecoli表达的蛋白做的。但是得到抗体与植物蛋白表达
就看不到信号了。这个蛋白应该在植物中有大量表达
谢谢

c*w2010-06-19 07:06

17 楼

安全要求规定用这些油的地方，比如修车场什么的都得有安全的地方收集废油，你可以
去问一声，他们也不差你这点吧。我家里都用电的，所以还没碰到这个问题过呢

回收汽油吗？在网上找了这个：Household Hazardous Waste。不知道有没有人去过，
收钱吗？http://www.sccgov.org/sit........
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【在 f**********l 的大作中提到】

: 回收汽油吗？
: 在网上找了这个：Household Hazardous Waste。不知道有没有人去过，收钱吗？
: http://www.sccgov.org/sites/iwm/Residential/Pages/Household-Haz

H*g2010-06-19 07:06

18 楼

Why you mentioned there should be pretty well overexpression in plant? You
observed a phenotype, or due to antibiotic tolerance?

f*l2010-06-19 07:06

19 楼

谢谢，我找修车的地方问问看。

【在 c***w 的大作中提到】

: 安全要求规定用这些油的地方，比如修车场什么的都得有安全的地方收集废油，你可以
: 去问一声，他们也不差你这点吧。我家里都用电的，所以还没碰到这个问题过呢
:
: 回收汽油吗？在网上找了这个：Household Hazardous Waste。不知道有没有人去过，
: 收钱吗？http://www.sccgov.org/sit........
: ★ Sent from iPhone App: iReader Mitbbs 7.56 - iPad Lite

s*y2010-06-19 07:06

20 楼

First, you need to put a positive control and a negative control in your gel
(try use your bacterial expression as positive control and an untranformed
bacterial lysate as negative control) to make sure your WB works.
Second, you would need to make sure you denatured the protein from cotton or
tobacco completely, because in many case there are proteins from plant that
are hard to denatured and be detected in WB.

【在 e**e 的大作中提到】

l*g2010-06-19 07:06

21 楼

难道不是机油+Gas? 我当年买割草机时做个研究, 记得2 冲程的发动机就是gas混oil啊
, 看着就麻烦, 当时买了4冲程的.
机油可以去kragen 回收, 没听说过回收汽油的.

了1

【在 f**********l 的大作中提到】

: 上周去HD，看见有打折，就买了割草的trimmer, 用gas的二冲程的引擎。仔细看了说明
: 书，二冲程的引擎烧的汽油要加添加剂。package带了一小瓶，可以用来加1 gallon汽
: 油。看完了，随手就把这些说明书和添加剂放车库里了，跟以前买的割草机的盒子放一
: 起。
: 今天去HD买了个1 gallon的汽油桶，倒了1 gallon汽油进去，随手从盒子里拿了一个小
: 瓶子出来。稍微看了看，以为就是那瓶添加剂，就倒入汽油里去了。使劲摇了摇，接着
: 倒入trimmer的engine。
: 然后去盒子找trimmer的说明书，结果看见添加剂的瓶子还在。糟糕，原来倒错了。仔
: 细看了看之前的瓶子，倒进去的是motor oil！完了，把机油当添加剂倒汽油里去了！
: 赶紧把engine里的汽油倒出来，倒回汽油桶。这下子好了， 1 gallon的汽油，混合了1

D*g2010-06-19 07:06

22 楼

你们表达的蛋白质是从什么来源的，棉花的还是烟草的？

【在 e**e 的大作中提到】

n*22010-06-19 07:06

23 楼

同情同情。。。
偶建議其實不多的。。還是找個桶給裝起來吧。。
回頭用來清洗一些機器部件也不錯啊。。。
汽油的用處還是挺多的啊。。。

H*g2010-06-19 07:06

24 楼

I guess the author should have already included controls in gel as well as
western before posting this thread.
Could you please list some references for plant protein is harder to be
denatured, like under [email protected], or
[email protected]?

gel
untranformed
or
that

【在 s******y 的大作中提到】

: First, you need to put a positive control and a negative control in your gel
: (try use your bacterial expression as positive control and an untranformed
: bacterial lysate as negative control) to make sure your WB works.
: Second, you would need to make sure you denatured the protein from cotton or
: tobacco completely, because in many case there are proteins from plant that
: are hard to denatured and be detected in WB.

s*y2010-06-19 07:06

25 楼

Sorry I cannot give out any clear reference for plant protein being
difficult to denatured.
The thing is plant cells have cell walls, that's very different from
animal cells. Many proteins in plant cells are also N-oligo-glycosylated,
which is quite different from animal cell.
That idea was based on what people told me when I used to work in
a plant biology lab long time ago and I assumed that is a popular
assumption in the plant biology field. Maybe someone in this board
who is currently workin

【在 H*g 的大作中提到】

: I guess the author should have already included controls in gel as well as
: western before posting this thread.
: Could you please list some references for plant protein is harder to be
: denatured, like under [email protected], or
: [email protected]?
:
: gel
: untranformed
: or
: that

s*y2010-06-19 07:06

26 楼

By the way, the original author seems like a newbie, so very likely he would
not have the sense to include the controls in his gel.

【在 H*g 的大作中提到】

s*g2010-06-19 07:06

27 楼

以前做过植物蛋白提取.是要在提取液里(研钵中)反复研磨的.过滤,然后再...
另外,现在,普通ECL难以检测到的蛋白,可以用Millipore的
Immobilon Western Chemiluminescent Substrate
500mL Cat No. WBKLS0500
你可以买小包装.另外这个试剂背景较严重,(但对应相应分子量的Marker,你可以找到你
的相应蛋白带)他们最近出了消背景的试剂.我没有用过消背景的试剂.
通常我是把普同ECL和Millipore的Immobilon Western Chemiluminescent Substrate对
半混用或(普同ECL多些,而Immobilon Western Chemiluminescent Substrate少些)
往往普同ECL结果空白一片,洗洗膜,用普同ECL和Millipore的Immobilon Western
Chemiluminescent Substrate对半混用(或普同ECL多些,而Immobilon Western
Chemiluminescent Substrate少些),30秒看初步结果,然

c*y2010-06-19 07:06

28 楼

能贴出来具体的protocol吗？还有你蛋白的疏水性

c*y2010-06-19 07:06

29 楼

我觉得也有必要考虑下这个

Have

【在 H*g 的大作中提到】

: I guess you meant the antibody could detect E.coli expressed protein, but
: cannot detect protein from plant Over-expressin lines. Is this correct? Have
: you verified transcript accumulation by RT-PCR first?

H*g2010-06-19 07:06

30 楼

yeah, I feel it is better the author answer the question: why he/she feel
there must be high expression, based on ox phenotype, based on high antibioc
tolerance or based on RT-PCR data?

【在 c******y 的大作中提到】

: 我觉得也有必要考虑下这个
:
: Have