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分子小白请教fusion protein

分子小白请教fusion protein# Biology - 生物学

l*j2010-07-31 07:07

1 楼

呵呵，赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party，很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
金银蛋饺
珍珠虾丸
啤酒陈皮烧鸭
莞爆鱿鱼
虾皮紫菜豆腐
响油芦笋
南乳藕片
藕片用南乳来炒，味道咸香，很赞
荷塘小炒
放了马蹄，玉米笋，藕片，荷兰豆，胡萝卜，黑木耳
韭菜炒香干
干贝鸡汤豆腐羹
干贝洗净，用温水泡发，水留着，干贝加料酒上火蒸熟，搓成细丝
青豆，嫩豆腐，干贝，冬笋（切小片），鱼丸（切小丁），加鸡汤，大火烧开，小火30
分钟，转大火，加clam，撒鸡精、白胡椒、水淀粉，出锅前滴几滴香油
干贝已经有咸味，可不加盐
皮蛋瘦肉粥
熬了2个多小时，完全水米相溶
虾肉三鲜水饺
和面的时候加了鸡蛋，面特别筋斗
馅用了多半的虾肉，少半的猪肉，盐，糖，鸡精，葱末，姜粉，蒜粉，白胡椒，鸡蛋，
生粉，生抽，料酒，蚝油，香油，花椒油，虾米，香菇，木耳，马蹄
椰奶红豆年糕
这个味道很赞，很软很香且不甜
用料:
1：糯米粉150克，糖1/4杯，泡打粉（Baking Powder）1/2茶匙。
2：鸡蛋1只，玉米油3大勺，椰浆coconut cream 160ml。
3：红豆

l*o2010-07-31 07:07

2 楼

多多少少带了些干货。大家都是怎么填的?
如果填是，肯定要被抽查。如果填否，被抽查到会罚款么？没有肉和水果蔬菜。

t*z2010-07-31 07:07

3 楼

豆瓣上有高人对37集以后的改写，估计很多人会喜欢的。
http://movie.douban.com/review/5785903/?start=0&post=ok#last

s*r2010-07-31 07:07

4 楼

第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体，不知
道中间需要加个linker呢，还是直接按ORF接上就好呢？pcDNA3.1的vector。没有现成
的linker给我用，如果要加的话，是不是得设计到primer上去，那这primer也太长了吧
，能P出来吗。。。。
谢谢指导^^

q*i2010-07-31 07:07

5 楼

mm太能干了，所有菜都好复杂，pf呢

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】

: 呵呵，赶紧抓住活动的尾巴。除夕是和很多朋友一起potluck party，很多想做的年菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。
: 金银蛋饺
: 珍珠虾丸
: 啤酒陈皮烧鸭
: 莞爆鱿鱼
: 虾皮紫菜豆腐
: 响油芦笋
: 南乳藕片
: 藕片用南乳来炒，味道咸香，很赞
: 荷塘小炒

l*o2010-07-31 07:07

6 楼

没人知道么？

Z*i2010-07-31 07:07

7 楼

真这么改就没这么多东方MM的粉丝了。大家谁不是因为她无结果的感情悲剧因怜生爱啊
，如果她对令狐虫的爱有了回报，大家就该开始讨论她作为魔教教主杀人于无形的手段
毒辣了。

【在 t*z 的大作中提到】

: 豆瓣上有高人对37集以后的改写，估计很多人会喜欢的。
: http://movie.douban.com/review/5785903/?start=0&post=ok#last

C*e2010-07-31 07:07

8 楼

光说引物
引物长没问题哈
做过很多七十几到八十左右的引物，其中跟模板配对的部分是18左右，P起来完全没问题

【在 s*********r 的大作中提到】

: 第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体，不知
: 道中间需要加个linker呢，还是直接按ORF接上就好呢？pcDNA3.1的vector。没有现成
: 的linker给我用，如果要加的话，是不是得设计到primer上去，那这primer也太长了吧
: ，能P出来吗。。。。
: 谢谢指导^^

l*j2010-07-31 07:07

9 楼

a?mm 还没睡啊？难道也是西部时间？:P
我这个是唐僧版，其实不是很麻烦的:)

【在 q****i 的大作中提到】

: mm太能干了，所有菜都好复杂，pf呢
:
: 菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

p*u2010-07-31 07:07

10 楼

一般好像都填否，及时抽到就说是自己用的，但是量一定不能多。

Z*i2010-07-31 07:07

11 楼

还不如干脆改成令狐冲与任我行等人联手，当场干掉东方MM。事后才知道送她上灵鹫寺
，为救她舍己，而定义也不是她杀的，然后羞愧交加，为东方MM引刀自宫，然后终于在
独孤九剑之外又连成葵花宝典，终成一代绝世高手，但却在孤山梅庄孤了此残生。后来
有一个少年名叫穆人清，凭令狐的一个信物找到他，才知道是他和东方MM山洞那一晚的
结晶，所以就收自己儿子为徒，日后穆人清再次凭绝世武功重振华山派，又收袁承志，
那是后话了。

【在 t*z 的大作中提到】

: 豆瓣上有高人对37集以后的改写，估计很多人会喜欢的。
: http://movie.douban.com/review/5785903/?start=0&post=ok#last

p*i2010-07-31 07:07

12 楼

中间加linker有时候是为了防止后加上的TAG影响原来蛋白的功能
可以参考pcDNA6.2 fusion GFP系列的linker
不过以前貌似很多人都是直接加个GFP……

【在 s*********r 的大作中提到】

j*12010-07-31 07:07

13 楼

第一次看到中国人做clam chowder，哈哈~ 厉害！佩服！

t*z2010-07-31 07:07

14 楼

问题不在东方爱的无结果，而是剧情转折得莫名其妙，人物（特指令狐）转变得毫无道
理。

n*w2010-07-31 07:07

15 楼

我正在做一个fusion protein，我就是设计引物，然后p。。。引物大概35个碱基吧。
。。overlap。。。还是比较好p的。。。

m*e2010-07-31 07:07

16 楼

顶

Z*i2010-07-31 07:07

17 楼

在另一个贴子已经说过，山洞一晚之后，令狐虫连人带心该得到的都得到，开始厌倦了
，特别是东方处处都比他强，远不如盈盈像小鸟依人，所以始滥终弃。估计只有东方MM
挂了以后，他才会再怀念对方的好。

【在 t*z 的大作中提到】

: 问题不在东方爱的无结果，而是剧情转折得莫名其妙，人物（特指令狐）转变得毫无道
: 理。

s*r2010-07-31 07:07

18 楼

谢谢^^

l*m2010-07-31 07:07

19 楼

你家gg叫我来顶

t*z2010-07-31 07:07

20 楼

我看也未必。是，悲剧给人更多的震撼，可这也不是要阐述什么高深的人生哲理，不过
就是一消遣、娱乐，何必闹得这么虐心呢。我看多数人也是看了前面的觉得创意不错，
可突然发现后半部整个一人格分裂，完全不合逻辑，变化来得过于生硬、突兀。如果他
能把东方、令狐反目成仇交待得合理些，也不会这么遭骂了。

w*s2010-07-31 07:07

21 楼

像GFP这么大的蛋白很可能会影响定位.一般我还是会加一个Linker。比如GGSG。

U*y2010-07-31 07:07

22 楼

me too :-(

【在 l*******m 的大作中提到】

: 你家gg叫我来顶

K*C2010-07-31 07:07

23 楼

我最近做了一些fusion proteins.我的建议是你不要在引物里面加linker。
最好先做出一个Target protein-non coding region-Fluorescent protein（FP）的
prototype来，然后用Site-directed mutagenesis往里加linker。 FP加在N端还是C端
，是要试的。linker用多长的，什么样的，也是要选的。否则会对蛋白折叠有影响。

【在 s*********r 的大作中提到】

t*r2010-07-31 07:07

24 楼

仅看菜名就是一种享受和折磨了

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】

l*m2010-07-31 07:07

25 楼

鸭子做好不容易，啤酒陈皮烧鸭很赞，陈皮去油腻和腥味很好

菜都没有来
得及做。上周末才补做了一些。
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【在 l*****j 的大作中提到】

l*j2010-07-31 07:07

26 楼

哈哈，谢谢谢谢

【在 l*******m 的大作中提到】

: 你家gg叫我来顶

l*j2010-07-31 07:07

27 楼

谢谢:P

【在 U**********y 的大作中提到】

: me too :-(

l*j2010-07-31 07:07

28 楼

a*z2010-07-31 07:07

29 楼

zan

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】

b*12010-07-31 07:07

30 楼

太赞了！！
真的，很赞！
你那么苗条，为了你家gg做这么多菜，那个人真有福气啊；更难得是某人说的为了爱情
长体重也值了的话。
想起以前有人吃完了一抹嘴说“害我又长胖了”。咋就那么同人不同命捏 //sour

j*12010-07-31 07:07

31 楼

哈哈哈哈~ 让你们能顶这么好的菜都是给你们面子了~

【在 U**********y 的大作中提到】

: me too :-(

m*f2010-07-31 07:07

32 楼

太赞了，心头好，菜也美味，漂亮。
赞双色蛋饺的巧妙构思。

r*e2010-07-31 07:07

33 楼

南乳藕片，那个南乳是啥啊？
啤酒鸭能上个方子不？

v*e2010-07-31 07:07

34 楼

看起来都很好吃，
荷塘小炒和莞爆鱿鱼最吸引我，
这个水准可以开个饭店了。

菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

【在 l*****j 的大作中提到】

l*j2010-07-31 07:07

35 楼

谢谢大厨~
在你面前我可不敢卖弄

【在 m**f 的大作中提到】

: 太赞了，心头好，菜也美味，漂亮。
: 赞双色蛋饺的巧妙构思。

l*j2010-07-31 07:07

36 楼

美眉，南乳就是红豆腐乳，推荐王致和的玫瑰腐乳或者香辣腐乳
啤酒鸭，就是平时烧肉菜的做法，鸭腿剁成小块，烧开冲去浮沫
油烧热，下冰糖，中小火至冰糖溶化，下鸭腿翻炒，然后下葱姜八角陈皮辣椒翻炒，加
啤酒，盐，少许生抽，大火烧开，转入砂锅中小火40分钟左右，大火烧开收汁

【在 r********e 的大作中提到】

: 南乳藕片，那个南乳是啥啊？
: 啤酒鸭能上个方子不？

l*j2010-07-31 07:07

37 楼

谢谢:)

【在 v******e 的大作中提到】

: 看起来都很好吃，
: 荷塘小炒和莞爆鱿鱼最吸引我，
: 这个水准可以开个饭店了。
:
: 菜都没有来得及做。上周末才补做了一些。

l*j2010-07-31 07:07

38 楼

//blush

l*j2010-07-31 07:07

39 楼

亲爱的mm，你太sweet啦~
其实某人也有小担心啊，所以我做的越来越素了......
话说我也不舍得某人哪天overweight不健康:P

【在 b********1 的大作中提到】

: 太赞了！！
: 真的，很赞！
: 你那么苗条，为了你家gg做这么多菜，那个人真有福气啊；更难得是某人说的为了爱情
: 长体重也值了的话。
: 想起以前有人吃完了一抹嘴说“害我又长胖了”。咋就那么同人不同命捏 //sour