请推荐一个做knockout小鼠genotyping的PCR kit# Biology - 生物学
M*e
1 楼
小弟的第一个phone interview，是一个文理学院的工程系的
不知道会问什么问题呢？非常感谢各位前辈的指点！！！
不知道会问什么问题呢？非常感谢各位前辈的指点！！！
r*u
2 楼
我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
的。
fedex的官方网页上到中国只要3天。
怎么办？我父母可是准备很积极啊。
我的眼睛里都有红血丝了。
Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
的。
fedex的官方网页上到中国只要3天。
怎么办？我父母可是准备很积极啊。
我的眼睛里都有红血丝了。
J*e
3 楼
ld刚上班4个月，现在怀孕了大概20周，还没跟公司说起。一般多是什么时候提呢？
c*u
4 楼
就是那种剪了尾巴或耳朵，蛋白酶K随便消化几个小时就可以直接PCR的kit。
用来做genotyping
我以前没做过这方面。
谢谢各位了。
用来做genotyping
我以前没做过这方面。
谢谢各位了。
m*8
5 楼
scan, send them as email
【在 r**********u 的大作中提到】
: 我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
: Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
: 的。
: fedex的官方网页上到中国只要3天。
: 怎么办？我父母可是准备很积极啊。
: 我的眼睛里都有红血丝了。
【在 r**********u 的大作中提到】
: 我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
: Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
: 的。
: fedex的官方网页上到中国只要3天。
: 怎么办？我父母可是准备很积极啊。
: 我的眼睛里都有红血丝了。
b*c
6 楼
一般被老板看出来之前吧。5个月了，又是夏天，除非楼主老婆本来就是胖胖的，否则
肯定有同事早就看出来了。我是3个月后说的。当然个人情况不同，我当时工作很稳定
，和老板关系也很好，楼主老婆刚到那儿工作，不说太早很可以理解，但建议可以考虑
找个机会近期内说了。
【在 J******e 的大作中提到】
: ld刚上班4个月，现在怀孕了大概20周，还没跟公司说起。一般多是什么时候提呢？
肯定有同事早就看出来了。我是3个月后说的。当然个人情况不同，我当时工作很稳定
，和老板关系也很好，楼主老婆刚到那儿工作，不说太早很可以理解，但建议可以考虑
找个机会近期内说了。
【在 J******e 的大作中提到】
: ld刚上班4个月，现在怀孕了大概20周，还没跟公司说起。一般多是什么时候提呢？
s*d
7 楼
你说的是消化尾巴的试剂吗
s*x
8 楼
你所有的东西都可以email发过去让他们自己打印啊
【在 r**********u 的大作中提到】
: 我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
: Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
: 的。
: fedex的官方网页上到中国只要3天。
: 怎么办？我父母可是准备很积极啊。
: 我的眼睛里都有红血丝了。
【在 r**********u 的大作中提到】
: 我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
: Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
: 的。
: fedex的官方网页上到中国只要3天。
: 怎么办？我父母可是准备很积极啊。
: 我的眼睛里都有红血丝了。
c*n
9 楼
20周差不多该说了，再不说就出来了。。。
c*u
10 楼
No, I mean the PCR kit for genotyping. this kit can be used for the dirty
and unpurified DNA sample.
【在 s**********d 的大作中提到】
: 你说的是消化尾巴的试剂吗
and unpurified DNA sample.
【在 s**********d 的大作中提到】
: 你说的是消化尾巴的试剂吗
k*y
11 楼
why don't you email documents?
【在 r**********u 的大作中提到】
: 我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
: Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
: 的。
: fedex的官方网页上到中国只要3天。
: 怎么办？我父母可是准备很积极啊。
: 我的眼睛里都有红血丝了。
【在 r**********u 的大作中提到】
: 我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
: Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
: 的。
: fedex的官方网页上到中国只要3天。
: 怎么办？我父母可是准备很积极啊。
: 我的眼睛里都有红血丝了。
O*e
12 楼
If you don't care about the price, you may want to try Sigma's kit. I don't
remember the name,but it is very quick and efficient.
【在 c*********u 的大作中提到】
: No, I mean the PCR kit for genotyping. this kit can be used for the dirty
: and unpurified DNA sample.
remember the name,but it is very quick and efficient.
【在 c*********u 的大作中提到】
: No, I mean the PCR kit for genotyping. this kit can be used for the dirty
: and unpurified DNA sample.
q*i
13 楼
赶紧扫描了发过去,打印出来
w*l
14 楼
自己配吧，十分简单又便宜！
s*9
15 楼
自己准备不充分赖FEDEX干嘛啊。
s*e
16 楼
we use a digestion kit from Zygem for embryonic tissue, it does save a lot of time
r*o
17 楼
正解
【在 q*********i 的大作中提到】
: 赶紧扫描了发过去,打印出来
【在 q*********i 的大作中提到】
: 赶紧扫描了发过去,打印出来
h*n
18 楼
I guess you mean extract-n-amp.
Sometimes it does not make good DNA for PCR, its PCR master mix is good. So
I go back to DNeasy.
t
【在 O******e 的大作中提到】
: If you don't care about the price, you may want to try Sigma's kit. I don't
: remember the name,but it is very quick and efficient.
Sometimes it does not make good DNA for PCR, its PCR master mix is good. So
I go back to DNeasy.
t
【在 O******e 的大作中提到】
: If you don't care about the price, you may want to try Sigma's kit. I don't
: remember the name,but it is very quick and efficient.
h*s
19 楼
一定要邮寄的话有办法：
http://www.fedex.com/us/services/intl/index.html?tsid=s1&tssect
就是贵一点。
【在 r**********u 的大作中提到】
: 我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
: Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
: 的。
: fedex的官方网页上到中国只要3天。
: 怎么办？我父母可是准备很积极啊。
: 我的眼睛里都有红血丝了。
http://www.fedex.com/us/services/intl/index.html?tsid=s1&tssect
就是贵一点。
【在 r**********u 的大作中提到】
: 我是真的要疯了,刚才fedex我准备的资料给父母《包括160-ds确认表》，Priority
: Envelope 要整7天才能到。可是我父母第2天就要去面签了。他们准备提前一天去广州
: 的。
: fedex的官方网页上到中国只要3天。
: 怎么办？我父母可是准备很积极啊。
: 我的眼睛里都有红血丝了。
n*n
20 楼
Viagen directPCR plus Promega GoTaq flexi
c*u
21 楼
Thanks, this is my first time to hear these.
【在 n****n 的大作中提到】
: Viagen directPCR plus Promega GoTaq flexi
【在 n****n 的大作中提到】
: Viagen directPCR plus Promega GoTaq flexi
r*e
22 楼
sigma jumpstart 2x premix.
非常好用，组织消化下，异丙醇沉淀，溶在水里就行。
【在 c*********u 的大作中提到】
: 就是那种剪了尾巴或耳朵，蛋白酶K随便消化几个小时就可以直接PCR的kit。
: 用来做genotyping
: 我以前没做过这方面。
: 谢谢各位了。
非常好用，组织消化下，异丙醇沉淀，溶在水里就行。
【在 c*********u 的大作中提到】
: 就是那种剪了尾巴或耳朵，蛋白酶K随便消化几个小时就可以直接PCR的kit。
: 用来做genotyping
: 我以前没做过这方面。
: 谢谢各位了。
h*g
23 楼
我们都是用NaOH煮，省钱
D*a
24 楼
自己配的，
网上搜了搜，这是跟我们完全一样的protocol
Final concentration of tail digestion buffer (TDB):
50 mM KCl
10 mM Tris-HCl (pH 9.0)
0.1 % Triton X-100
0.4 mg/ml Proteinase K
Add 100 ul of TDB per tail piece (2-5 mm) in a microcentrifuge tube. Be
careful not to cut too much tail.
Incubate the tube at either 60 C for 3 hours, with gentle mixing every 30
minutes, or 55 C overnight.
Incubate the tube at 94 C (or boil) for 10 minutes to denature the
Proteinase K.
Spin in microcentrifuge at top speed for 15 minutes.
网上搜了搜，这是跟我们完全一样的protocol
Final concentration of tail digestion buffer (TDB):
50 mM KCl
10 mM Tris-HCl (pH 9.0)
0.1 % Triton X-100
0.4 mg/ml Proteinase K
Add 100 ul of TDB per tail piece (2-5 mm) in a microcentrifuge tube. Be
careful not to cut too much tail.
Incubate the tube at either 60 C for 3 hours, with gentle mixing every 30
minutes, or 55 C overnight.
Incubate the tube at 94 C (or boil) for 10 minutes to denature the
Proteinase K.
Spin in microcentrifuge at top speed for 15 minutes.
D*a
25 楼
c*u
26 楼
多谢，不过你们用什么taq啊？这个是关键
有的PCR kit不行的。
genotyping的pcr我一直觉得随便消化消化就能做出来，我们就用invitrogen的taq
【在 D*a 的大作中提到】
: 忘了給链接
: http://www.research.uci.edu/tmf/DNAprep.htm
有的PCR kit不行的。
genotyping的pcr我一直觉得随便消化消化就能做出来，我们就用invitrogen的taq
【在 D*a 的大作中提到】
: 忘了給链接
: http://www.research.uci.edu/tmf/DNAprep.htm
w*e
27 楼
HEAT SHOT的方法，
尾巴加热半个小时就可以做PCR了
5块钱的试剂用1年
【在 c*********u 的大作中提到】
: 就是那种剪了尾巴或耳朵，蛋白酶K随便消化几个小时就可以直接PCR的kit。
: 用来做genotyping
: 我以前没做过这方面。
: 谢谢各位了。
尾巴加热半个小时就可以做PCR了
5块钱的试剂用1年
【在 c*********u 的大作中提到】
: 就是那种剪了尾巴或耳朵，蛋白酶K随便消化几个小时就可以直接PCR的kit。
: 用来做genotyping
: 我以前没做过这方面。
: 谢谢各位了。
D*a
28 楼
请问具体protocol是什么呀
【在 w*e 的大作中提到】
: HEAT SHOT的方法，
: 尾巴加热半个小时就可以做PCR了
: 5块钱的试剂用1年
【在 w*e 的大作中提到】
: HEAT SHOT的方法，
: 尾巴加热半个小时就可以做PCR了
: 5块钱的试剂用1年
D*a
29 楼
Platinum®Taq DNA Polymerase
【在 c*********u 的大作中提到】
: 多谢，不过你们用什么taq啊？这个是关键
: 有的PCR kit不行的。
:
: genotyping的pcr我一直觉得随便消化消化就能做出来，我们就用invitrogen的taq
【在 c*********u 的大作中提到】
: 多谢，不过你们用什么taq啊？这个是关键
: 有的PCR kit不行的。
:
: genotyping的pcr我一直觉得随便消化消化就能做出来，我们就用invitrogen的taq
M*e
30 楼
We use Sigma's RedTaq for mouse genotyping (tail). It does not need to add
DNA sample buffer (loading dye) to your PCR products, so you can directly
load your PCR samples to agarose gel and run.
DNA sample buffer (loading dye) to your PCR products, so you can directly
load your PCR samples to agarose gel and run.
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