real-time PCR问题# Biology - 生物学
a*r
1 楼
如果在一个学校做AP做了两年，想换学校，和fresh PhD或者postdoc申请过程都一样吗
？和fresh的比，申请的时候有什么优势和劣势吗？
？和fresh的比，申请的时候有什么优势和劣势吗？
a*2
2 楼
各位高手好！
我想征个朋友帮我拍几张街拍的照片，以前的同学请我做个行业内的讲座，需要放张照片
宣传，我才发现没有自己特别有逼格的照片，都是出去玩我的摄影盲朋友帮我拍的1米4
的照片（本人可有一米七啊，捂脸）。我也很喜欢摄影，可惜没法自己给自己拍，
我很想自己给自己拍啊！
地点在纽约曼哈顿，大概能有个五六张就行了，我很想要一张纽约过马路的照片（多有
逼格！）
有空帮忙的童鞋站内联系我吧：）
我想征个朋友帮我拍几张街拍的照片，以前的同学请我做个行业内的讲座，需要放张照片
宣传，我才发现没有自己特别有逼格的照片，都是出去玩我的摄影盲朋友帮我拍的1米4
的照片（本人可有一米七啊，捂脸）。我也很喜欢摄影，可惜没法自己给自己拍，
我很想自己给自己拍啊！
地点在纽约曼哈顿，大概能有个五六张就行了，我很想要一张纽约过马路的照片（多有
逼格！）
有空帮忙的童鞋站内联系我吧：）
z*2
3 楼
还能当女猪脚
看那个小眯眯眼
怎么看着都是没睡醒
还任盈盈呢！
和于正啥关系！
看那个小眯眯眼
怎么看着都是没睡醒
还任盈盈呢！
和于正啥关系！
P*m
4 楼
标准品是DNA，melting curve很正常，样品是RNA用random primer 做RT 来的cDNA，
melting curve有个小峰在主峰前面。样品RNA相对单一，没有non-target RNA 干扰。
貌似不是PCR的问题，是不是RT的问题，random primer做RT 造成的背景？qRT—PCR我
是新手，请人指点一下。
melting curve有个小峰在主峰前面。样品RNA相对单一，没有non-target RNA 干扰。
貌似不是PCR的问题，是不是RT的问题，random primer做RT 造成的背景？qRT—PCR我
是新手，请人指点一下。
L*s
5 楼
我觉得... 有钱就有优势，没钱就是劣势。
【在 a*******r 的大作中提到】
: 如果在一个学校做AP做了两年，想换学校，和fresh PhD或者postdoc申请过程都一样吗
: ？和fresh的比，申请的时候有什么优势和劣势吗？
【在 a*******r 的大作中提到】
: 如果在一个学校做AP做了两年，想换学校，和fresh PhD或者postdoc申请过程都一样吗
: ？和fresh的比，申请的时候有什么优势和劣势吗？
s*t
6 楼
素颜的时候很漂亮， 真的不是一般校花可以比的。
演戏的时候妆太浓， 反而显老了。
【在 z******2 的大作中提到】
: 还能当女猪脚
: 看那个小眯眯眼
: 怎么看着都是没睡醒
: 还任盈盈呢！
: 和于正啥关系！
演戏的时候妆太浓， 反而显老了。
【在 z******2 的大作中提到】
: 还能当女猪脚
: 看那个小眯眯眼
: 怎么看着都是没睡醒
: 还任盈盈呢！
: 和于正啥关系！
R*n
7 楼
小峰温度是多少？貌似primer dimer.提高点hybridization temperature试试
d*n
8 楼
我们学校一个新来的AP，牛校PHD毕业后，在boulder呆了两年AP，然后去vanderbilt又
呆了两年，然后来的我们学校，刚来一年就开始申请tenure，1800 citation, 20多h-
index，还不错吧？我跟他聊了一下，般这么多是因为私人原因，只要有合理的原因就
没问题吧
呆了两年，然后来的我们学校，刚来一年就开始申请tenure，1800 citation, 20多h-
index，还不错吧？我跟他聊了一下，般这么多是因为私人原因，只要有合理的原因就
没问题吧
m*a
9 楼
我倒是不觉得她丑，但是就是很讨厌她，她那张脸不知道怎么的就是招人恨，特别是那
个嘴，一看到我就想给几个巴掌。。。
【在 z******2 的大作中提到】
: 还能当女猪脚
: 看那个小眯眯眼
: 怎么看着都是没睡醒
: 还任盈盈呢！
: 和于正啥关系！
个嘴，一看到我就想给几个巴掌。。。
【在 z******2 的大作中提到】
: 还能当女猪脚
: 看那个小眯眯眼
: 怎么看着都是没睡醒
: 还任盈盈呢！
: 和于正啥关系！
P*m
10 楼
应该不是primer dimer, 因为标准品的曲线没有小峰。
【在 R****n 的大作中提到】
: 小峰温度是多少？貌似primer dimer.提高点hybridization temperature试试
【在 R****n 的大作中提到】
: 小峰温度是多少？貌似primer dimer.提高点hybridization temperature试试
z*2
11 楼
我觉得我可能也是和你一个感觉
新笑里面哪个女的看着都比她顺眼
【在 m******a 的大作中提到】
: 我倒是不觉得她丑，但是就是很讨厌她，她那张脸不知道怎么的就是招人恨，特别是那
: 个嘴，一看到我就想给几个巴掌。。。
新笑里面哪个女的看着都比她顺眼
【在 m******a 的大作中提到】
: 我倒是不觉得她丑，但是就是很讨厌她，她那张脸不知道怎么的就是招人恨，特别是那
: 个嘴，一看到我就想给几个巴掌。。。
h*n
12 楼
产物跑胶看看.
跑胶确认才是王道.
跑胶确认才是王道.
C*e
13 楼
对，建议lz跑胶
melting curve是辅助
当你对melting curve有疑问的时候，那个样品还是要跑个胶才好
【在 h********n 的大作中提到】
: 产物跑胶看看.
: 跑胶确认才是王道.
melting curve是辅助
当你对melting curve有疑问的时候，那个样品还是要跑个胶才好
【在 h********n 的大作中提到】
: 产物跑胶看看.
: 跑胶确认才是王道.
n*s
14 楼
有可能DNA AMOUNT高一些, 如果RNA量相对低的话, 有出PRIMER DIMER的可能...
RUN A GEL +1
RUN A GEL +1
P*m
15 楼
问题解决了，确实是RT的问题，降低了random primer的浓度或者用specific primer就
没小峰了。
没小峰了。
c*e
16 楼
是不是RT以后没有RNase treatment?
小峰是 RNA-DNA hybrid?
小峰是 RNA-DNA hybrid?
c*e
17 楼
是不是RT以后没有RNase treatment?
小峰是 RNA-DNA hybrid?
小峰是 RNA-DNA hybrid?
c*r
18 楼
很多real-time pcr做的是one-step RT-PCR。中间不用RNase treat。实际上比分开两
步做更准确。
但是一般做one-step RT-PCR多用target specific的primer做RT，呵呵，PCR primer多
数可以直接做RT，算好annealing temperature就好了。如果用random primer或者poly
-A做RT，很容易出现这种多peaks的问题。解决办法就是lz发现的办法。
【在 c******e 的大作中提到】
: 是不是RT以后没有RNase treatment?
: 小峰是 RNA-DNA hybrid?
步做更准确。
但是一般做one-step RT-PCR多用target specific的primer做RT，呵呵，PCR primer多
数可以直接做RT，算好annealing temperature就好了。如果用random primer或者poly
-A做RT，很容易出现这种多peaks的问题。解决办法就是lz发现的办法。
【在 c******e 的大作中提到】
: 是不是RT以后没有RNase treatment?
: 小峰是 RNA-DNA hybrid?
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