请教给动物注射plasmid DNA的问题# Biology - 生物学
b*l
1 楼
v*a
2 楼
我在研究某个蛋白在其overexpress情况下对某个器官的作用。想给老鼠注射含有这个
蛋白insert的plasmid DNA，第一次做，不知道有些什么需要注意的？是不是可以用PBS
作为等价于in vitro中溶解DNA的buffer/media？我在in vitro中overexpress的时候，
用的transfection reagent是QIAGEN的effectene，不知道给老鼠注射的话也仍旧可以
用这个吗？或者大家有推荐的吗？
非常感谢！
蛋白insert的plasmid DNA，第一次做，不知道有些什么需要注意的？是不是可以用PBS
作为等价于in vitro中溶解DNA的buffer/media？我在in vitro中overexpress的时候，
用的transfection reagent是QIAGEN的effectene，不知道给老鼠注射的话也仍旧可以
用这个吗？或者大家有推荐的吗？
非常感谢！
x*g
3 楼
很美好
【在 b*****l 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be
【在 b*****l 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be
w*a
4 楼
这种实验一般都是用virus做的吧，直接iv injection可能转化效率很低，当然如果器官
是liver的话，可能好一点。
PBS
【在 v***a 的大作中提到】
: 我在研究某个蛋白在其overexpress情况下对某个器官的作用。想给老鼠注射含有这个
: 蛋白insert的plasmid DNA，第一次做，不知道有些什么需要注意的？是不是可以用PBS
: 作为等价于in vitro中溶解DNA的buffer/media？我在in vitro中overexpress的时候，
: 用的transfection reagent是QIAGEN的effectene，不知道给老鼠注射的话也仍旧可以
: 用这个吗？或者大家有推荐的吗？
: 非常感谢！
是liver的话，可能好一点。
PBS
【在 v***a 的大作中提到】
: 我在研究某个蛋白在其overexpress情况下对某个器官的作用。想给老鼠注射含有这个
: 蛋白insert的plasmid DNA，第一次做，不知道有些什么需要注意的？是不是可以用PBS
: 作为等价于in vitro中溶解DNA的buffer/media？我在in vitro中overexpress的时候，
: 用的transfection reagent是QIAGEN的effectene，不知道给老鼠注射的话也仍旧可以
: 用这个吗？或者大家有推荐的吗？
: 非常感谢！
x*g
5 楼
这首歌有好几个歌词，每一个都很耐人寻味，有味道。
【在 b*****l 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be
【在 b*****l 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be
v*a
6 楼
不是liver。。。老板确实提了一句用virus。。我再想想。多谢了！
器官
【在 w***a 的大作中提到】
: 这种实验一般都是用virus做的吧，直接iv injection可能转化效率很低，当然如果器官
: 是liver的话，可能好一点。
:
: PBS
器官
【在 w***a 的大作中提到】
: 这种实验一般都是用virus做的吧，直接iv injection可能转化效率很低，当然如果器官
: 是liver的话，可能好一点。
:
: PBS
o*1
7 楼
原来你老公号恶俗老狼，那么字是什么？不过你居然还有满不错的voice。看样子大妈
年轻的时候还挺有妹力的。
【在 b*****l 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be
年轻的时候还挺有妹力的。
【在 b*****l 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/watch?v=ULFW1mMi830&feature=youtu.be
m*7
8 楼
不需要用lipid based transfection reagent。
b*l
9 楼
大妈虽然年事已高，妹力装装也还有啊 LOL
哈哈！不是我老公，我可攀不起高枝 ：）））
是参加一个小论坛《好声音》活动录的。我不会用软件只能靠绑人家才能唱。这歌我嚼
着我自己唱挺好的，男声部分也唱的特别好，而且视频与声音合成都是他做的，很感谢。
【在 o******1 的大作中提到】
: 原来你老公号恶俗老狼，那么字是什么？不过你居然还有满不错的voice。看样子大妈
: 年轻的时候还挺有妹力的。
哈哈！不是我老公，我可攀不起高枝 ：）））
是参加一个小论坛《好声音》活动录的。我不会用软件只能靠绑人家才能唱。这歌我嚼
着我自己唱挺好的，男声部分也唱的特别好，而且视频与声音合成都是他做的，很感谢。
【在 o******1 的大作中提到】
: 原来你老公号恶俗老狼，那么字是什么？不过你居然还有满不错的voice。看样子大妈
: 年轻的时候还挺有妹力的。
v*a
10 楼
你的意思是直接注射DNA就可以了？
【在 m*********7 的大作中提到】
: 不需要用lipid based transfection reagent。
【在 m*********7 的大作中提到】
: 不需要用lipid based transfection reagent。
b*l
11 楼
我爱你时，你正一贫如洗寒窗苦读。。
离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。
【在 x****g 的大作中提到】
: 这首歌有好几个歌词，每一个都很耐人寻味，有味道。
离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。
【在 x****g 的大作中提到】
: 这首歌有好几个歌词，每一个都很耐人寻味，有味道。
a*d
12 楼
virus or electroporation
M*9
13 楼
我觉得你唱得很好。 制作得也很好。
能唱画心么？ 那个我当时听的时候很震撼。
这个时代海誓山盟很少了。 让人感动的事也少了。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我爱你时，你正一贫如洗寒窗苦读。。
: 离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。
能唱画心么？ 那个我当时听的时候很震撼。
这个时代海誓山盟很少了。 让人感动的事也少了。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我爱你时，你正一贫如洗寒窗苦读。。
: 离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。
D*a
14 楼
怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
【在 a****d 的大作中提到】
: virus or electroporation
【在 a****d 的大作中提到】
: virus or electroporation
M*9
15 楼
千年修行 千年孤独
夜深人静时 可有人听见我在哭
灯火阑珊处 可有人看见我跳舞
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我爱你时，你正一贫如洗寒窗苦读。。
: 离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。
夜深人静时 可有人听见我在哭
灯火阑珊处 可有人看见我跳舞
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我爱你时，你正一贫如洗寒窗苦读。。
: 离开你时，你已金榜题名洞房花烛。。
w*a
16 楼
弄个电椅？
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
b*l
17 楼
我只会录清唱，不会加伴奏，我得找人帮我。我试试看，我也喜欢画心，痒了，呵呵
：）
【在 M*********9 的大作中提到】
: 我觉得你唱得很好。 制作得也很好。
: 能唱画心么？ 那个我当时听的时候很震撼。
: 这个时代海誓山盟很少了。 让人感动的事也少了。
：）
【在 M*********9 的大作中提到】
: 我觉得你唱得很好。 制作得也很好。
: 能唱画心么？ 那个我当时听的时候很震撼。
: 这个时代海誓山盟很少了。 让人感动的事也少了。
a*d
18 楼
depends on where you wanna over express or knock down, not sure if you can
do electroporation in liver though... u can google the protocol
virus maybe the best way to go for your experiments
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
do electroporation in liver though... u can google the protocol
virus maybe the best way to go for your experiments
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
b*l
19 楼
能不能为你再跳一只舞，我是你千百年前放生的白狐。。。
我有时候觉得我就是那只狐 ：）
【在 M*********9 的大作中提到】
: 千年修行 千年孤独
: 夜深人静时 可有人听见我在哭
: 灯火阑珊处 可有人看见我跳舞
我有时候觉得我就是那只狐 ：）
【在 M*********9 的大作中提到】
: 千年修行 千年孤独
: 夜深人静时 可有人听见我在哭
: 灯火阑珊处 可有人看见我跳舞
o*r
20 楼
十年前记得有直接大剂量肌肉注射的，就是效率有点低
x*g
21 楼
你有令你觉得遗憾的前缘么？
【在 b*****l 的大作中提到】
: 能不能为你再跳一只舞，我是你千百年前放生的白狐。。。
: 我有时候觉得我就是那只狐 ：）
【在 b*****l 的大作中提到】
: 能不能为你再跳一只舞，我是你千百年前放生的白狐。。。
: 我有时候觉得我就是那只狐 ：）
o*i
22 楼
duh!
`
器官
【在 v***a 的大作中提到】
: 不是liver。。。老板确实提了一句用virus。。我再想想。多谢了！
:
: 器官
`
器官
【在 v***a 的大作中提到】
: 不是liver。。。老板确实提了一句用virus。。我再想想。多谢了！
:
: 器官
b*l
23 楼
我很想，可是我没有，呵呵。我情感经历特别简单，大学同班同学前男朋友然后就是大
学同校高年级师兄就结婚了。我没经历过留有遗憾的前缘。而且我的个性，我不惦记我
得不到的东西，所以就傻傻的快乐着。
【在 x****g 的大作中提到】
: 你有令你觉得遗憾的前缘么？
学同校高年级师兄就结婚了。我没经历过留有遗憾的前缘。而且我的个性，我不惦记我
得不到的东西，所以就傻傻的快乐着。
【在 x****g 的大作中提到】
: 你有令你觉得遗憾的前缘么？
o*a
24 楼
至少七八年前就开始流行了，protocols能搜出不少吧，比如这个
http://www.natureprotocols.com/2007/12/13/using_in_utero_electroporation.php
电压，持续时间，脉冲次数要自己试，做好大批动物被烧烤的思想准备...
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
http://www.natureprotocols.com/2007/12/13/using_in_utero_electroporation.php
电压，持续时间，脉冲次数要自己试，做好大批动物被烧烤的思想准备...
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
X*7
25 楼
反复听了好几遍，赶上我前阵子听The Monster的劲头了，唱的很好听。这首歌也很好
听。
听。
R*w
26 楼
直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
in vivo 用transfection reagent 效果不明显
机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
in vivo 用transfection reagent 效果不明显
b*l
27 楼
哈哈！谢谢小丫。这歌儿的故事很悲伤所以就很打动人，我也非常喜欢。
【在 X******7 的大作中提到】
: 反复听了好几遍，赶上我前阵子听The Monster的劲头了，唱的很好听。这首歌也很好
: 听。
【在 X******7 的大作中提到】
: 反复听了好几遍，赶上我前阵子听The Monster的劲头了，唱的很好听。这首歌也很好
: 听。
v*a
28 楼
谢谢啦！
【在 R*****w 的大作中提到】
: 直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
: 机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
: in vivo 用transfection reagent 效果不明显
【在 R*****w 的大作中提到】
: 直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
: 机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
: in vivo 用transfection reagent 效果不明显
n*s
29 楼
Not bad...
s*s
30 楼
直接金粒吸附用基因枪打吧
【在 R*****w 的大作中提到】
: 直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
: 机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
: in vivo 用transfection reagent 效果不明显
【在 R*****w 的大作中提到】
: 直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
: 机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
: in vivo 用transfection reagent 效果不明显
b*l
31 楼
吝啬吝啬吝啬吝啬吝啬。。。。
【在 n*******s 的大作中提到】
: Not bad...
【在 n*******s 的大作中提到】
: Not bad...
c*0
32 楼
这都行？又不是烟草叶子，能穿过皮嘛
【在 s******s 的大作中提到】
: 直接金粒吸附用基因枪打吧
n*s
33 楼
说唱歌, 脑中闪过一幅画面,
Echo Below
深院，梧桐，細雨，黃昏，冷月
所有一切都被清秋鎖住
今夜清瑟寒風
難自禁
听着听着, 捂住嘴, 眼角的泪下来了...
Echo Below
深院，梧桐，細雨，黃昏，冷月
所有一切都被清秋鎖住
今夜清瑟寒風
難自禁
听着听着, 捂住嘴, 眼角的泪下来了...
t*y
34 楼
这种实验压根就不该做，因为无论你怎么做，实验结果都无法解释。因为转染效率低是
一个问题，转染的专一性又是一个问题，因为临近组织，循环系统的影响等等，一大堆
的器官将牵涉进去。最后的无论出现什么结果，都会是一团浆糊。
如果可能还是直接在果蝇或其他容易的模式动物里，做组织特异性转基因。
一个问题，转染的专一性又是一个问题，因为临近组织，循环系统的影响等等，一大堆
的器官将牵涉进去。最后的无论出现什么结果，都会是一团浆糊。
如果可能还是直接在果蝇或其他容易的模式动物里，做组织特异性转基因。
n*s
35 楼
Call that lucky...
有些遗憾象是心里埋了把刀, 痛得你什么都说不出来.
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我很想，可是我没有，呵呵。我情感经历特别简单，大学同班同学前男朋友然后就是大
: 学同校高年级师兄就结婚了。我没经历过留有遗憾的前缘。而且我的个性，我不惦记我
: 得不到的东西，所以就傻傻的快乐着。
有些遗憾象是心里埋了把刀, 痛得你什么都说不出来.
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我很想，可是我没有，呵呵。我情感经历特别简单，大学同班同学前男朋友然后就是大
: 学同校高年级师兄就结婚了。我没经历过留有遗憾的前缘。而且我的个性，我不惦记我
: 得不到的东西，所以就傻傻的快乐着。
s*s
36 楼
基因枪打蛋白疫苗、DNA疫苗啥的十几年历史都有了，
能够造成免疫应答的，细胞里面表达应该是小case了
【在 c*****0 的大作中提到】
:
: 这都行？又不是烟草叶子，能穿过皮嘛
能够造成免疫应答的，细胞里面表达应该是小case了
【在 c*****0 的大作中提到】
:
: 这都行？又不是烟草叶子，能穿过皮嘛
b*l
37 楼
无言独上西楼
月如钩
寂寞梧桐深院锁清秋
剪不断
理还乱
是离愁
别有一番滋味在心头
施主，你有剪不断的遗憾前缘，阿弥陀佛，善哉善哉。。
【在 n*******s 的大作中提到】
: 说唱歌, 脑中闪过一幅画面,
: Echo Below
: 深院，梧桐，細雨，黃昏，冷月
: 所有一切都被清秋鎖住
: 今夜清瑟寒風
: 難自禁
: 听着听着, 捂住嘴, 眼角的泪下来了...
月如钩
寂寞梧桐深院锁清秋
剪不断
理还乱
是离愁
别有一番滋味在心头
施主，你有剪不断的遗憾前缘，阿弥陀佛，善哉善哉。。
【在 n*******s 的大作中提到】
: 说唱歌, 脑中闪过一幅画面,
: Echo Below
: 深院，梧桐，細雨，黃昏，冷月
: 所有一切都被清秋鎖住
: 今夜清瑟寒風
: 難自禁
: 听着听着, 捂住嘴, 眼角的泪下来了...
n*s
38 楼
一丝悲袭来, 却是无比的受用.
【在 b*****l 的大作中提到】
: 无言独上西楼
: 月如钩
: 寂寞梧桐深院锁清秋
: 剪不断
: 理还乱
: 是离愁
: 别有一番滋味在心头
: 施主，你有剪不断的遗憾前缘，阿弥陀佛，善哉善哉。。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 无言独上西楼
: 月如钩
: 寂寞梧桐深院锁清秋
: 剪不断
: 理还乱
: 是离愁
: 别有一番滋味在心头
: 施主，你有剪不断的遗憾前缘，阿弥陀佛，善哉善哉。。
b*l
39 楼
I never call it lucky, I call it attitude...attitude does the matter.
情感的遗憾我没有，但非情感的遗憾我也有，像插在心底的刀，所以我根本就不去碰它
，当它不存在。
【在 n*******s 的大作中提到】
: Call that lucky...
: 有些遗憾象是心里埋了把刀, 痛得你什么都说不出来.
情感的遗憾我没有，但非情感的遗憾我也有，像插在心底的刀，所以我根本就不去碰它
，当它不存在。
【在 n*******s 的大作中提到】
: Call that lucky...
: 有些遗憾象是心里埋了把刀, 痛得你什么都说不出来.
n*s
40 楼
不是中秋, Crab可是挺肥, 一个人寂寞地干掉了6个,奥秘托付.
【在 b*****l 的大作中提到】
: 无言独上西楼
: 月如钩
: 寂寞梧桐深院锁清秋
: 剪不断
: 理还乱
: 是离愁
: 别有一番滋味在心头
: 施主，你有剪不断的遗憾前缘，阿弥陀佛，善哉善哉。。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 无言独上西楼
: 月如钩
: 寂寞梧桐深院锁清秋
: 剪不断
: 理还乱
: 是离愁
: 别有一番滋味在心头
: 施主，你有剪不断的遗憾前缘，阿弥陀佛，善哉善哉。。
M*9
41 楼
好， 等着听你的版本。 画心非常好听：））
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我只会录清唱，不会加伴奏，我得找人帮我。我试试看，我也喜欢画心，痒了，呵呵
: ：）
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我只会录清唱，不会加伴奏，我得找人帮我。我试试看，我也喜欢画心，痒了，呵呵
: ：）
M*9
42 楼
要千年等待， 千年寂寞。。。 太久了。 ：）
【在 b*****l 的大作中提到】
: 能不能为你再跳一只舞，我是你千百年前放生的白狐。。。
: 我有时候觉得我就是那只狐 ：）
【在 b*****l 的大作中提到】
: 能不能为你再跳一只舞，我是你千百年前放生的白狐。。。
: 我有时候觉得我就是那只狐 ：）
M*9
43 楼
看来你比较理智 ：）
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我很想，可是我没有，呵呵。我情感经历特别简单，大学同班同学前男朋友然后就是大
: 学同校高年级师兄就结婚了。我没经历过留有遗憾的前缘。而且我的个性，我不惦记我
: 得不到的东西，所以就傻傻的快乐着。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我很想，可是我没有，呵呵。我情感经历特别简单，大学同班同学前男朋友然后就是大
: 学同校高年级师兄就结婚了。我没经历过留有遗憾的前缘。而且我的个性，我不惦记我
: 得不到的东西，所以就傻傻的快乐着。
b*l
44 楼
我比较懒，不喜欢换来换去的嫌麻烦：）
【在 M*********9 的大作中提到】
: 看来你比较理智 ：）
【在 M*********9 的大作中提到】
: 看来你比较理智 ：）
M*9
45 楼
应该是运气也不错。 ：））
爱情， 婚姻这东西有时候就是一念之间。。。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我比较懒，不喜欢换来换去的嫌麻烦：）
爱情， 婚姻这东西有时候就是一念之间。。。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 我比较懒，不喜欢换来换去的嫌麻烦：）
b*l
46 楼
所有的爱都是冒险，那就心甘情愿等待我们一生中所有悬念。。。。
【在 M*********9 的大作中提到】
: 应该是运气也不错。 ：））
: 爱情， 婚姻这东西有时候就是一念之间。。。
【在 M*********9 的大作中提到】
: 应该是运气也不错。 ：））
: 爱情， 婚姻这东西有时候就是一念之间。。。
n*s
47 楼
是过程重要还是结果重要呢,当你在爱的时候,对你自己又何尝不是极大的愉悦.
【在 b*****l 的大作中提到】
: 所有的爱都是冒险，那就心甘情愿等待我们一生中所有悬念。。。。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 所有的爱都是冒险，那就心甘情愿等待我们一生中所有悬念。。。。
t*h
48 楼
唱的真好，麦克不是太好，有点杂音
韵味十足
【在 b*****l 的大作中提到】
: 所有的爱都是冒险，那就心甘情愿等待我们一生中所有悬念。。。。
韵味十足
【在 b*****l 的大作中提到】
: 所有的爱都是冒险，那就心甘情愿等待我们一生中所有悬念。。。。
b*l
49 楼
谢谢。女声是麦克录的，男声好像一贯都是用iphone直接录的。杂音是挺明显的。
【在 t****h 的大作中提到】
: 唱的真好，麦克不是太好，有点杂音
: 韵味十足
【在 t****h 的大作中提到】
: 唱的真好，麦克不是太好，有点杂音
: 韵味十足
b*l
50 楼
结果更重要。经历过程是为了最终的好结果，假如明知道根本就没有结果还要去经历过
程，那就不是愉悦是自虐。
【在 n*******s 的大作中提到】
: 是过程重要还是结果重要呢,当你在爱的时候,对你自己又何尝不是极大的愉悦.
程，那就不是愉悦是自虐。
【在 n*******s 的大作中提到】
: 是过程重要还是结果重要呢,当你在爱的时候,对你自己又何尝不是极大的愉悦.
s*y
51 楼
8 cuo!
【在 b*****l 的大作中提到】
: 结果更重要。经历过程是为了最终的好结果，假如明知道根本就没有结果还要去经历过
: 程，那就不是愉悦是自虐。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 结果更重要。经历过程是为了最终的好结果，假如明知道根本就没有结果还要去经历过
: 程，那就不是愉悦是自虐。
b*l
52 楼
谢听 ：）
【在 s**********y 的大作中提到】
: 8 cuo!
【在 s**********y 的大作中提到】
: 8 cuo!
n*s
53 楼
所有的结果最终也都是浮云啊, 谁会明知道没有结果还去趟浑水呢?
真有人去趟的话, 也许是魅力太大, 必须趟的.
【在 b*****l 的大作中提到】
: 结果更重要。经历过程是为了最终的好结果，假如明知道根本就没有结果还要去经历过
: 程，那就不是愉悦是自虐。
真有人去趟的话, 也许是魅力太大, 必须趟的.
【在 b*****l 的大作中提到】
: 结果更重要。经历过程是为了最终的好结果，假如明知道根本就没有结果还要去经历过
: 程，那就不是愉悦是自虐。
t*h
54 楼
建议你用专业的软件处理一下就perfect了
消除杂音，减少爆音
【在 b*****l 的大作中提到】
: 谢谢。女声是麦克录的，男声好像一贯都是用iphone直接录的。杂音是挺明显的。
消除杂音，减少爆音
【在 b*****l 的大作中提到】
: 谢谢。女声是麦克录的，男声好像一贯都是用iphone直接录的。杂音是挺明显的。
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