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关于节省 primary antibody

关于节省 primary antibody# Biology - 生物学

D*r2010-10-19 07:10

1 楼

我们正在为父母申请加拿大签证，第一步就被卡住了：
看来看去，第一步是 Find out if you are eligible to apply (online). 但是在这
个网页无论如何也找不到这个eligibility check的入口：
http://www.cic.gc.ca/ctc-vac/getting-started.asp
请各位大侠帮帮我！
多谢！多谢！

h*k2010-10-19 07:10

2 楼

大家有什么好方法节省一抗的使用吗？实在是太贵了。

F*u2010-10-19 07:10

3 楼

换个浏览器，不行换个电脑
下面一个巨大的start my application按钮

【在 D******r 的大作中提到】

: 我们正在为父母申请加拿大签证，第一步就被卡住了：
: 看来看去，第一步是 Find out if you are eligible to apply (online). 但是在这
: 个网页无论如何也找不到这个eligibility check的入口：
: http://www.cic.gc.ca/ctc-vac/getting-started.asp
: 请各位大侠帮帮我！
: 多谢！多谢！

h*o2010-10-19 07:10

4 楼

Re-use
Use Casein or Pierce Superblock to dilute antibody, so it can be re-used and
stored at 4oC for longer time without precipitation
Also, use signal enhancer

D*r2010-10-19 07:10

5 楼

多谢！多谢！惭愧呀，那个按钮紧挨着application on paper，都没想就assume是只管
paper application的。。。。

w*e2010-10-19 07:10

6 楼

what kind of signal enhancer are you referring to? thx!

and

【在 h*******o 的大作中提到】

: Re-use
: Use Casein or Pierce Superblock to dilute antibody, so it can be re-used and
: stored at 4oC for longer time without precipitation
: Also, use signal enhancer

p*i2010-10-19 07:10

7 楼

如果一抗在MILK裡，裝到FALCON管子裡 -20
如果一抗在BSA裡，裝到FALCON管子裡，4度（可以加點sodium azide）

【在 h****k 的大作中提到】

: 大家有什么好方法节省一抗的使用吗？实在是太贵了。

x*u2010-10-19 07:10

8 楼

NaN3可以保存好几个月

【在 h****k 的大作中提到】

: 大家有什么好方法节省一抗的使用吗？实在是太贵了。

c*y2010-10-19 07:10

9 楼

一般用推荐量的一半没有问题
孵育时间长点

R*w2010-10-19 07:10

10 楼

1. 重复使用
2. 用小塑料袋，一块普通的WB只需3－4ml，4C O/N

f*r2010-10-19 07:10

11 楼

除了上面说的，加一条。
可以根据目标条带的分子量，把整张膜剪成多个横条。把横条放在大小刚刚合适的容器
里，比如放盖玻片的盒子里。这样抗体用量可以缩小到2毫升以内。
回收的时候，用pipette仔细吸干净。
按1：1000的比例稀释，每次只须2微升抗体。这个1：1000的抗体，至少可以用5次。1
瓶100微升的抗体，一共可以250次WB。

Z*52010-10-19 07:10

12 楼

首先，要找个大小合适的孵育器皿，这个对节省抗体很关键。我比较喜欢用那种细长
的50ml的flask，把上层剪掉做孵育器皿，孵育整张膜也就用6~7ml抗体/milk。每次孵
育后，取出膜，用保鲜膜包住flask，直接冻到-20，下次拿出来融化后继续用。

【在 h****k 的大作中提到】

: 大家有什么好方法节省一抗的使用吗？实在是太贵了。

a*g2010-10-19 07:10

13 楼

before this, please use enough antibody to cover the whole blot to make sur
e there is no other interesting/relevant bands...

1

【在 f*********r 的大作中提到】

: 除了上面说的，加一条。
: 可以根据目标条带的分子量，把整张膜剪成多个横条。把横条放在大小刚刚合适的容器
: 里，比如放盖玻片的盒子里。这样抗体用量可以缩小到2毫升以内。
: 回收的时候，用pipette仔细吸干净。
: 按1：1000的比例稀释，每次只须2微升抗体。这个1：1000的抗体，至少可以用5次。1
: 瓶100微升的抗体，一共可以250次WB。

m*u2010-10-19 07:10

14 楼

你用过加了NaN3的抗体么？有网页不推荐用NaN3保存抗体，说对ECL显色系统有破坏作用

【在 p******i 的大作中提到】

: 如果一抗在MILK裡，裝到FALCON管子裡 -20
: 如果一抗在BSA裡，裝到FALCON管子裡，4度（可以加點sodium azide）

v*a2010-10-19 07:10

15 楼

我们实验室把一抗加了sodium azide后通常用很久
最近我还拿了2001年某人配的一个一抗（保存在4度的）来用了
信号很强

【在 x****u 的大作中提到】

: NaN3可以保存好几个月

h*o2010-10-19 07:10

16 楼

NaN3 does interfere with HRP conjugated 2nd secondary antibody.
But it is in primary antibody, with enough washing between primary and 2nd
antibody, it should be OK.
I don't recommend use antibody older than 3 months in diluted solutions, who
knows what could happen. Especially when your samples are precious, I would
rather use something that's safe and predictable.
By the way, antibodies are not expensive at all if they actually work.
I would rather spend more money on a reliable vendor than waste my time
trying cheap crappy ones.

作用

【在 m*****u 的大作中提到】

: 你用过加了NaN3的抗体么？有网页不推荐用NaN3保存抗体，说对ECL显色系统有破坏作用