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大侠们帮我 Troubleshoot 一下qPCR的污染问题吧

大侠们帮我 Troubleshoot 一下qPCR的污染问题吧# Biology - 生物学

l*l2010-11-07 07:11

1 楼

情况：爷爷奶奶姥爷都不在了，家里老人只剩姥姥。
父亲退休，母亲原单位退休，现在在亲戚公司打工。
独子。美国还有个亲叔叔（爸爸的亲弟弟，已入籍）
问题：1.母亲可以说退休可以说不退休，我爸是提前退休的，怎么说比较好？
2.有个叔叔在美国，资料里一定会写，他们来之后也有计划要去探访，那我在写
给签证官的说明和行程里要不要提？
小白一个，请各位不吝赐教，先谢过了！

n*r2010-11-07 07:11

2 楼

做Taqman realtime RT-PCR时间很长了，一直没问题，最近NTC和RT-突然出现扩增，CT
都在35左右。通过大量的NTC，RT-和RNA extraction negative control重复测试，初
步判断为随机污染。做了所有我能想到的，换成新的试剂，引物，探针，用UV或bleach
洗泡桌面，枪，盘子....等等，还是没解决问题。
哪位大侠有经验，帮我一把。谢谢。

w*e2010-11-07 07:11

3 楼

那天我做RT的时候随便翻看别人留下来的protocol,说每几个月大概应该用个blank
plate做个RT-PCR,看看是不是机器里面被dye或者别的什么污染，我觉得你不妨一试。
有的实验室有专门的blank plate,没有的话好像可以用平时的plate或者tube加水。

n*r2010-11-07 07:11

4 楼

我把里面那个thermol block都洗过好几遍了，不过还真没做个空白版。我回头试一下。

【在 w***e 的大作中提到】

: 那天我做RT的时候随便翻看别人留下来的protocol,说每几个月大概应该用个blank
: plate做个RT-PCR,看看是不是机器里面被dye或者别的什么污染，我觉得你不妨一试。
: 有的实验室有专门的blank plate,没有的话好像可以用平时的plate或者tube加水。

k*l2010-11-07 07:11

5 楼

the best way is to switch to another bench or even another lab
DNA could be in the air

C*e2010-11-07 07:11

6 楼

随机污染没什么办法吧
枪头有没有用带filter的？
用带filter的会好一点
另外已经Ct>35了
如果跟有模板的比较Ct相差了10以上
问题也不大吧

p*d2010-11-07 07:11

7 楼

我也觉得这个影响不大。

【在 C*******e 的大作中提到】

: 随机污染没什么办法吧
: 枪头有没有用带filter的？
: 用带filter的会好一点
: 另外已经Ct>35了
: 如果跟有模板的比较Ct相差了10以上
: 问题也不大吧

n*r2010-11-07 07:11

8 楼

我当然都用filter了，这都是common sense东西。我们是测病毒，结果要求是Positive
或 Negative。虽然Ct的大小不是非常重要，但我们有许多阳性样品含的病毒量比较
低，Ct也会在35左右，这样NTC或RT-如果出现污染，那整个结果就只能当无效处理。

【在 C*******e 的大作中提到】

: 随机污染没什么办法吧
: 枪头有没有用带filter的？
: 用带filter的会好一点
: 另外已经Ct>35了
: 如果跟有模板的比较Ct相差了10以上
: 问题也不大吧

C*e2010-11-07 07:11

9 楼

哦，这样子。那你用的是一整板的还是一条一条的？
如果是一条一条的，我一般先加样negative control，盖上
然后再加别的

Positive

【在 n*****r 的大作中提到】

: 我当然都用filter了，这都是common sense东西。我们是测病毒，结果要求是Positive
: 或 Negative。虽然Ct的大小不是非常重要，但我们有许多阳性样品含的病毒量比较
: 低，Ct也会在35左右，这样NTC或RT-如果出现污染，那整个结果就只能当无效处理。