e*o
2 楼
第一次做FACS。 用了PI 和Annexin-V 去染死亡和凋亡细胞。结果出来后,他们告诉我
PIsorting 最上边的是死细胞,下边是活细胞,然后中间就是凋亡细胞。但问题是中间
的细胞很大一部分都是 FITC Annexin-V negative。该怎么解释阿? 细胞没有固定和
permeablize。下星期要给老板汇报。不知道怎么解释。特向大家请教。提前谢谢你的
回复。
PIsorting 最上边的是死细胞,下边是活细胞,然后中间就是凋亡细胞。但问题是中间
的细胞很大一部分都是 FITC Annexin-V negative。该怎么解释阿? 细胞没有固定和
permeablize。下星期要给老板汇报。不知道怎么解释。特向大家请教。提前谢谢你的
回复。
t*e
3 楼
S*s
4 楼
有细胞重新做一次么?如果有的话加一个 permeablized cell 做 positive control。
膜破掉了之后 PI 和 Annexin 都可以自由进出细胞,所以这个 condition 应该是
Annexin 和 PI 都 positive。如果这个条件都做不出信号说明你的试剂坏掉了,要是
这个条件有信号但是你的样品没信号那就是诱导凋亡的条件问题。这个实验做完之后不
管结果如何你都有东西和老板讨论了,good luck!
【在 e**o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: 第一次做FACS。 用了PI 和Annexin-V 去染死亡和凋亡细胞。结果出来后,他们告诉我
: PIsorting 最上边的是死细胞,下边是活细胞,然后中间就是凋亡细胞。但问题是中间
: 的细胞很大一部分都是 FITC Annexin-V negative。该怎么解释阿? 细胞没有固定和
: permeablize。下星期要给老板汇报。不知道怎么解释。特向大家请教。提前谢谢你的
: 回复。
膜破掉了之后 PI 和 Annexin 都可以自由进出细胞,所以这个 condition 应该是
Annexin 和 PI 都 positive。如果这个条件都做不出信号说明你的试剂坏掉了,要是
这个条件有信号但是你的样品没信号那就是诱导凋亡的条件问题。这个实验做完之后不
管结果如何你都有东西和老板讨论了,good luck!
【在 e**o 的大作中提到】
![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: 第一次做FACS。 用了PI 和Annexin-V 去染死亡和凋亡细胞。结果出来后,他们告诉我
: PIsorting 最上边的是死细胞,下边是活细胞,然后中间就是凋亡细胞。但问题是中间
: 的细胞很大一部分都是 FITC Annexin-V negative。该怎么解释阿? 细胞没有固定和
: permeablize。下星期要给老板汇报。不知道怎么解释。特向大家请教。提前谢谢你的
: 回复。
s*g
5 楼
On your histogram:
PI+only (%#) --necrosis (dots on the Left side top)(died)
PI+/Annexin-V+ (%#)--later apoptosis (dots on the Right side top)(died)
PI-/Annexin-V+(%#) --early apoptosis (dots on the Right side bottom)(Not died)
PI-/Annexin-V- (%#)--alive & No apoptosis cells (health cells)(dots on the Left side bottom)
I use The sum of "PI+/Annexin-V+ (later apoptosis)" and "PI-/Annexin-V+(
early apoptosis)" to count Total Apoptosis (%)
You do not need do permeablize. If you permeablize, all cells will be red(PI stain), so you can not seperate the lving cells and died cells.
I used Invetrogen or BD kits. You just follow protocol. But I usually use
less quantity as the protocol said. For example, Ann 5uL/sample on protocol,
I used 2.5uL (invetrogen) or 1.35uL (BD)/sample.
PI also is less. 4uL/sample.
They are working very well.
【在 e**o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: 第一次做FACS。 用了PI 和Annexin-V 去染死亡和凋亡细胞。结果出来后,他们告诉我
: PIsorting 最上边的是死细胞,下边是活细胞,然后中间就是凋亡细胞。但问题是中间
: 的细胞很大一部分都是 FITC Annexin-V negative。该怎么解释阿? 细胞没有固定和
: permeablize。下星期要给老板汇报。不知道怎么解释。特向大家请教。提前谢谢你的
: 回复。
PI+only (%#) --necrosis (dots on the Left side top)(died)
PI+/Annexin-V+ (%#)--later apoptosis (dots on the Right side top)(died)
PI-/Annexin-V+(%#) --early apoptosis (dots on the Right side bottom)(Not died)
PI-/Annexin-V- (%#)--alive & No apoptosis cells (health cells)(dots on the Left side bottom)
I use The sum of "PI+/Annexin-V+ (later apoptosis)" and "PI-/Annexin-V+(
early apoptosis)" to count Total Apoptosis (%)
You do not need do permeablize. If you permeablize, all cells will be red(PI stain), so you can not seperate the lving cells and died cells.
I used Invetrogen or BD kits. You just follow protocol. But I usually use
less quantity as the protocol said. For example, Ann 5uL/sample on protocol,
I used 2.5uL (invetrogen) or 1.35uL (BD)/sample.
PI also is less. 4uL/sample.
They are working very well.
【在 e**o 的大作中提到】
![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: 第一次做FACS。 用了PI 和Annexin-V 去染死亡和凋亡细胞。结果出来后,他们告诉我
: PIsorting 最上边的是死细胞,下边是活细胞,然后中间就是凋亡细胞。但问题是中间
: 的细胞很大一部分都是 FITC Annexin-V negative。该怎么解释阿? 细胞没有固定和
: permeablize。下星期要给老板汇报。不知道怎么解释。特向大家请教。提前谢谢你的
: 回复。
e*o
6 楼
Thanks you of all.
相关阅读
祝贺 中国农业大学 建版从饶毅评院士看科研灌水文的发表请问:DTT 还原/断裂二硫键(disulfide bond)时反应条件,谢谢 (转载)Life Sciences Salary Survey 2011质粒小提试剂盒里 用什么东西使沉淀紧密的?院士们的权利A Pharma Industry in Crisis急求一篇paper, thanks!!据说饶毅施一公被刷下主要原因还是国籍问题问一个关于细菌基因重组的菜鸟级问题live imaging 求助求教:关于毕业后文章挂名的问题南方科大招聘生物方向博士后(年薪18万RMB)问题出在早些年的院士评选上据我观察,RY和SYG不出5年必回美国找博后几封推荐信合适?什么是最好的cytoplasmic extraction protein marker?请问如果自己有一个很好的gel配方,这个可以申请专利么?求一个可以查文献用的proxyAnyone applied to Komen postdoctoral fellowship?