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问一个关于细菌基因重组的菜鸟级问题
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问一个关于细菌基因重组的菜鸟级问题# Biology - 生物学
b*n
1
校内小打小闹一个grant,今天收到获奖通知。要不要写个thank you note,问问大家
看法?
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F*r
2
想找拔草的工人,但是真的不知道到哪里去找?craigslist还是local拔草公司?有这
样的公司吗?
也不知道都charge多少钱?是按小时还是按面积?
还有工人可不可靠,前几天看到新闻,一个gardener把以前做过的一家给抢了。
大家有过相关经验的,能说一说吗?非常谢谢你的分享。
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w*o
3
回到孟菲斯,短短却记忆犹新的北京之旅让我又觉得美国很陌生。
回来后已经物是人非,系花小樱搬走了,和几个台湾女生住在一起。小讯
搬进了小樱的房间。
小讯说因为男女不便而搬走的。我猜的出真正的原因。。。
回来之后小讯也不和我轮流做饭了。可能我做的太差了。自己都吃不下,
小樱在的时候还帮帮我。现在我是 all on my own 了。。。
早晨起来时没人把我从床上拖出去打网球。
自行车被人偷走了没人骑车带我去学校。
不想做饭时没人帮我做几个可口的小菜。
没人躺在我床上和我聊天。
我又不太上课。。。
虽然小樱以前住在这里时话不多。我发现毕竟相处了几个月。在美国她不
算最亲的人也算是死党了。。。
她不在真的不习惯。。。
北京之行每天每小时每分钟从上到下,从里到外的兴奋忙乱和现在无所事
事成了鲜明的反差。
有一种感觉像浮云。每天起来不知道干吗的浮云。。。
过度的兴奋往往带来之后的无尽的空虚。
像刀片一样静静滑过心里。。。
开始喝酒,买了成箱的啤酒每天把自己灌的醉醉的。
忘了自己的存在也好。
有哲人说,存在就是虚无。。。
买了一辆车,开始学开车,教会里一位好心的陕西老乡教我开。很快拿到
了驾照。
和古丽通电话,倾诉了一下思念,古丽考完了脱福,问古丽托福的成绩,
古丽说太差了,不想告诉你。
我说你一定要告诉我,不管多少分。
古丽斩钉截铁的说不告诉你,不想出国了。
我说你不来就算了。很生气,帕的挂了电话。
这是我们第一次真正吵架。。。
我是苛刻了一些。新疆来的她考分当年就比一般考生低很多。大学
成绩平平她勉强跟上。我当时有点怒其不争,恨铁不成钢。和小虎一样。
再一次见到小樱是两个月后和小讯一起去台湾女生公寓玩,小樱和两个台
湾女生一起住。进去时小樱正在跑步机上锻炼。
突然觉得小樱像换了个人。头发长了,到了脖子下,人变的丰满了,据说她
不吃素了。
头上围着红色网球头带,穿着紧身黑色运动衣裤一边在跑步机上气喘吁吁
一边打招呼。前凸后翘都随着跑步机的节奏抖动着。
突然觉得她很性感!!!
下面有点躁动。
心里不明所以的后悔。。。
小樱对小讯甜甜微笑,不像她自己。
看到我些许惊讶,然后马上摆着脸,冷冷的说你好。
我也觉得尴尬。问她最近好吗,她有点过于激动的说过得很好。
小樱问我是不是生病了,说我瘦了很多。
我说没有,就是吃饭没有规律。
上厕所时看到镜中的我很落魄,头发长的挂到肩膀上了,像山顶洞人。胡
子邋遢非常唏嘘。眼睛无神有点忧郁。。。
我问她最近忙什么,她说忙姚教授给的课题。还很得意的跟我提起姚教授
经常邀请去他家,
说起姚教授家里的古董名画,如数家珍。
我有点意兴阑珊。觉得我们从死党变成了似曾相识。
她问我北京之行怎样,我真心的说见到古丽很开心。
她厥了一下嘴,不和我说话了。。。
同公寓文科研究生的台湾妹妹小黄给我们做了凉面,我很饿,呼噜呼噜
的吃了起来。狼吞虎咽的吃了两碗。还不够。吓的小黄睁大了眼睛惊奇的
看着。
小黄说我头发太长了,主动要帮我剪。一边剪发一边和小黄聊起来。
小黄挺靓但苗条,声音特别嗲。她男朋友在台湾,还有另外的女朋友。小黄
说毕业了要回去把男朋友抢回来。
我开玩笑说别抢了,我做你男朋友吧。她说她喜欢头特别大的男生,我的头
不够大。我双手比划着调侃,是这么大,还是这么大,她双手在我头上比划
着,是这么大。我心里想,猪头啊。。。
我诡笑着说,我弟弟头很大,要不把弟弟介绍给你。
她没听懂,天真的问really?。
我说开玩笑。
小黄说一看到大陆人特害怕。怕解放军进攻台湾。我安慰她别怕。在家里挂
一张毛泽东像解放军来了就安全了。。。
另外一个台湾室友叫小美,大一商科生,也是苗条清瘦的,问我怎么样可
以不用上课门门考。我说我是天才啊,天才哪里用的着上课。她崇拜的看
着我,让我很得意。
她问我有没有女朋友,我说有的。问漂不漂亮,我给她看了皮夹里古丽两寸
头照,她带着台湾人特有的夸张声音说,
哇嗷,像混血儿野,和小樱姐姐一样漂亮欧!!!
我问她知不知道新疆在哪里,她摇摇头说不清楚。。。
在她们家玩arcade游戏的时候,突然一改平时让着小讯,把小讯 KO 的满地
找牙。
小美稚气的在背后欢呼,好棒野!好厉害哟!you are genius!!!
每次在校园里碰到小美她都崇拜的看着我。看的我不好意思。小美挺漂亮,
还是有点清瘦。弱弱的在风中摇摆着。。。
后来只有在客访台湾人聚会的地方才会见到小樱,小黄,和小美,见到小
樱的时候也是随便聊两句,谈谈课题方向之类的。
我们之间隔了一道无形的墙。。。。
反倒是见到小讯的时候,小樱才很热情,听小讯讲起一些关于小樱的流言
蜚语,说小樱住在姚教授家了什么的。我根本不敢相信。不上课的我总是最
后一个听到流言蜚语的。
人家做她爸爸都嫌老了!!!
流言越传越多,学校的同学都说她和姚教授住在一起了。有时候晚上打电
话给小樱,每次小黄都说小樱不在,问小黄去哪里了。她也说不知道。
毕竟是老同学,我还是关心她的。为她不值。
那臭姚老头凭什么呀?!!!!
想直接问她。
这天我在系里见到小樱,直接上去跟她说你跟我来一下。她说忙着,要去
见导师姚教授,
我说要回家了。你下课来我公寓一下,有重要事情跟你讲。
她说好。
我回家睡了一觉,等小樱过来。。。
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h*u
4
如果要把一段外来的基因(比如一个plasmid或者染色体里面的一段已知基因)复制出
来,插入到另一个plasmid或者染色体的特定位置去,是怎么操作的?定位的原理是什
么?
我找了些资料,似乎传统的方法是根据特殊的restriction enzymes和DNA ligases来定
位。又发现最近的一些文献里用lambda red system来进行基因改造。两种方法的原理
我都没看明白,请版上的朋友不吝赐教。。。谢谢!
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m*n
5
感谢谁?我觉得没任何必要,除非有人给你事先看过这个proposal给过建议
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H*7
6
还有这种工人?
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o*t
7
青葱的大学岁月 多年后是不是很怀念?
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I*a
8
可以让基因A两端带有特定位子的相同序列,
然后通过同源重组插入到这个位子。
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g*9
9
拔草 should be 按 Ke.
I pay my kids 1 penny for every weed they pull out.

【在 F**********r 的大作中提到】
: 想找拔草的工人,但是真的不知道到哪里去找?craigslist还是local拔草公司?有这
: 样的公司吗?
: 也不知道都charge多少钱?是按小时还是按面积?
: 还有工人可不可靠,前几天看到新闻,一个gardener把以前做过的一家给抢了。
: 大家有过相关经验的,能说一说吗?非常谢谢你的分享。

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w*o
10
过去四年换了五次工作城市。
早上醒来忘了自己在哪里。
很少有机会想起来。
看到色坂一片教受上学生的文章记起来了。
记忆久远重现细节挺辛苦。
也好,写下来就不会忘了。

【在 o******t 的大作中提到】
: 青葱的大学岁月 多年后是不是很怀念?
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h*u
11
谢谢!能否详细说说这个过程是怎么实现的?比如说要把一个plasmid里的一段A基因序
列插入到细菌染色体里的序列B-C的中间,是不是得先把A、B、C克隆出来,在A两边连
上B和C(怎么连接?),然后把B-A-C片段引入细菌,然后细菌能自己把B-A-C片段整合
到自己的染色体中,并且是取代原来的B-C序列?这些问题可能很傻,所以我会有大包
子酬谢 :)

【在 I***a 的大作中提到】
: 可以让基因A两端带有特定位子的相同序列,
: 然后通过同源重组插入到这个位子。

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p*a
12
太黑了
我付1毛钱一颗

有这

【在 g*****9 的大作中提到】
: 拔草 should be 按 Ke.
: I pay my kids 1 penny for every weed they pull out.

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s*s
13
我就说这篇看着有点眼熟,hehe

【在 w*******o 的大作中提到】
: 过去四年换了五次工作城市。
: 早上醒来忘了自己在哪里。
: 很少有机会想起来。
: 看到色坂一片教受上学生的文章记起来了。
: 记忆久远重现细节挺辛苦。
: 也好,写下来就不会忘了。

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I*a
14
你说的差不多是的,
怎么连接?可以加酶切位点,然后一步一连起来,也可以通过PCR连起来,
还要有个筛选标记,帮你筛选出你要的
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g*9
15
I have a very big yard with lots weed ( I don't even count, just honor
system), they can make enough to buy a new playstation in about 5 days. I
think that is more than enough pocket money for them. I also offer 100%
interest if they save their money in my bank too. I would they should have
more enough to buy a brand new porsche way before they can get a driver's
license.

【在 g*****9 的大作中提到】
: 拔草 should be 按 Ke.
: I pay my kids 1 penny for every weed they pull out.

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h*r
16
差不多是这样的,还要看你要做啥细菌。
有的细菌抗拒这种同源重组
google一下suicide plasmid之类的
可以做knock out,knock in
还能利用marker负选择把抗性基因给去掉
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g*2
17
多了,知道capote写的那部小说 cold blood吗? 就是1959年2个墨西哥人把他们以前干
活的一家白人全杀了。

【在 H******7 的大作中提到】
: 还有这种工人?
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A*2
18
i) clone your target gene into a plasmid upstream of an antibiotic
resistance gene (e.x. Kanamycin) ii) amplify the two-gene cassette using
primers with 40nt homologous sequences iii) transform the linear fragments
into a recipient strain (e.x. E. coli) with an inducible Lamda Red System iv
) flip out the cassette with or without leaving a scar sequence, depending
on if there is FRT seq or I-sceI site in the cassette
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H*7
19
你这样的激励政策是不对的,他们巴不得草地上多长野草,哪天他们开窍了说不定会在
草地上播上野草


I
have
driver's

【在 g*****9 的大作中提到】
: I have a very big yard with lots weed ( I don't even count, just honor
: system), they can make enough to buy a new playstation in about 5 days. I
: think that is more than enough pocket money for them. I also offer 100%
: interest if they save their money in my bank too. I would they should have
: more enough to buy a brand new porsche way before they can get a driver's
: license.

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C*e
20
lambda red system的有一个2002年的PNAS
那个实验室有这个E.coli菌株
插入片段两端有46nts的flanking region就可以了
线性DNA片段和目标plasmid一起电转化到那个E.coli菌株就行
就是你要有个方法筛
比如线性DNA片段上有另外一个抗性之类的
不然大海捞针

【在 h*****u 的大作中提到】
: 如果要把一段外来的基因(比如一个plasmid或者染色体里面的一段已知基因)复制出
: 来,插入到另一个plasmid或者染色体的特定位置去,是怎么操作的?定位的原理是什
: 么?
: 我找了些资料,似乎传统的方法是根据特殊的restriction enzymes和DNA ligases来定
: 位。又发现最近的一些文献里用lambda red system来进行基因改造。两种方法的原理
: 我都没看明白,请版上的朋友不吝赐教。。。谢谢!

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H*7
21
中国的政策就是这样,比如交警罚款,抓得越多奖越多,忘记了罚款是手段,减少违章
才是目的,结果是违章没有减少,腐败倒是多了很多。这样的政府是很失败的。
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H*7
22
并且一分钱一根,你还要花人力去count,增加行政成本。哈哈
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g*9
23
I do not count, honor system.

【在 H******7 的大作中提到】
: 并且一分钱一根,你还要花人力去count,增加行政成本。哈哈
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h*y
24
哇塞,教育子女理财有一套啊

【在 g*****9 的大作中提到】
: I have a very big yard with lots weed ( I don't even count, just honor
: system), they can make enough to buy a new playstation in about 5 days. I
: think that is more than enough pocket money for them. I also offer 100%
: interest if they save their money in my bank too. I would they should have
: more enough to buy a brand new porsche way before they can get a driver's
: license.

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g*9
25
I try to teach them to work hard to make money and teach them to save money
too. They all learn to save up for the things (mostly toy) they want. They
are also learning interest can grow money. They understand the deferred
enjoyment.

【在 H******7 的大作中提到】
: 你这样的激励政策是不对的,他们巴不得草地上多长野草,哪天他们开窍了说不定会在
: 草地上播上野草
: 种
:
: I
: have
: driver's

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p*e
26
葛厂长还开银行。。。

【在 g*****9 的大作中提到】
: I have a very big yard with lots weed ( I don't even count, just honor
: system), they can make enough to buy a new playstation in about 5 days. I
: think that is more than enough pocket money for them. I also offer 100%
: interest if they save their money in my bank too. I would they should have
: more enough to buy a brand new porsche way before they can get a driver's
: license.

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h*y
27
你这。。。还没娃吧?
播野草种应该是违反了游戏规则的,当爹妈的会规范的

【在 H******7 的大作中提到】
: 你这样的激励政策是不对的,他们巴不得草地上多长野草,哪天他们开窍了说不定会在
: 草地上播上野草
: 种
:
: I
: have
: driver's

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H*7
28
为什么不反过来呢?比如草地上没有野草则奖励,有野草则减少奖励,直至0. 这才是
美国佬的先进制
度。

money
They

【在 g*****9 的大作中提到】
: I try to teach them to work hard to make money and teach them to save money
: too. They all learn to save up for the things (mostly toy) they want. They
: are also learning interest can grow money. They understand the deferred
: enjoyment.

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g*9
29
I have about 10 acre yard, do you think it is realistic to have zero weed?
How do you suggest me to measure their work and pay them accordingly?

【在 H******7 的大作中提到】
: 为什么不反过来呢?比如草地上没有野草则奖励,有野草则减少奖励,直至0. 这才是
: 美国佬的先进制
: 度。
:
: money
: They

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R*R
30
你们说的是谁家的孩子呀?
我家的孩子不给钱。家庭成员的义务。
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H*7
31
动动脑筋搞个评级又不难

weed?

【在 g*****9 的大作中提到】
: I have about 10 acre yard, do you think it is realistic to have zero weed?
: How do you suggest me to measure their work and pay them accordingly?

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m*e
32
中国的警察是不是这样咱不知道,但是这确实是现在穷疯了的美国警察的现状。
我有好几个朋友最近都吃了ticket,最近一年吃的甚至比以前十年都多。

【在 H******7 的大作中提到】
: 中国的政策就是这样,比如交警罚款,抓得越多奖越多,忘记了罚款是手段,减少违章
: 才是目的,结果是违章没有减少,腐败倒是多了很多。这样的政府是很失败的。

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F*r
33
你真是教育有方啊。我家的娃 还不会走呢,看来能拔草还得等很多年呢。
我家院子没有你家大,但是草不少。我自己拔不了,没有那体力,要是在年轻10年还可
以试试。
现在头痛的很,为了这个草的问题。上哪找人拔呢/

【在 g*****9 的大作中提到】
: I have a very big yard with lots weed ( I don't even count, just honor
: system), they can make enough to buy a new playstation in about 5 days. I
: think that is more than enough pocket money for them. I also offer 100%
: interest if they save their money in my bank too. I would they should have
: more enough to buy a brand new porsche way before they can get a driver's
: license.

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j*e
34
谁给你拔草阿,点把火烧了算了

【在 F**********r 的大作中提到】
: 想找拔草的工人,但是真的不知道到哪里去找?craigslist还是local拔草公司?有这
: 样的公司吗?
: 也不知道都charge多少钱?是按小时还是按面积?
: 还有工人可不可靠,前几天看到新闻,一个gardener把以前做过的一家给抢了。
: 大家有过相关经验的,能说一说吗?非常谢谢你的分享。

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F*r
35
还有,草多了会不会有蛇? 其他动物,虫子? 怕怕。 知道的能说说吗?

【在 F**********r 的大作中提到】
: 想找拔草的工人,但是真的不知道到哪里去找?craigslist还是local拔草公司?有这
: 样的公司吗?
: 也不知道都charge多少钱?是按小时还是按面积?
: 还有工人可不可靠,前几天看到新闻,一个gardener把以前做过的一家给抢了。
: 大家有过相关经验的,能说一说吗?非常谢谢你的分享。

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