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从抗原柱洗脱的抗体沉淀？

从抗原柱洗脱的抗体沉淀？# Biology - 生物学

t*p2011-01-11 08:01

1 楼

不知道本版有没有人有抗体纯化的经验。
血清过抗原柱，用PH2.5的Glycine洗脱，最浓的几管fraction沉淀出来了（管子有加1M
Tris buffer），形成浑浊液，无法重新溶解（调PH，加盐都无效）。
溶解问题不解决没办法dialysis，抗体放4度时间长了估计也有问题。哪位知道trick赶
快指点一下，包子相谢！

n*e2011-01-11 08:01

2 楼

沉淀的不一定全是你要的抗体。测一下剩下溶液里抗体滴度先。要是还是很高的话，就
直接透析溶液，沉淀以后再说。不过我推荐用脱盐柱来换buffer，又快又好。

1M

【在 t****p 的大作中提到】

: 不知道本版有没有人有抗体纯化的经验。
: 血清过抗原柱，用PH2.5的Glycine洗脱，最浓的几管fraction沉淀出来了（管子有加1M
: Tris buffer），形成浑浊液，无法重新溶解（调PH，加盐都无效）。
: 溶解问题不解决没办法dialysis，抗体放4度时间长了估计也有问题。哪位知道trick赶
: 快指点一下，包子相谢！

l*r2011-01-11 08:01

3 楼

楼上说得对，关键看你的抗体是不是在可溶部分。如果沉淀的是你的抗体，不妨试试2M
Arginin pH4.3，我试过洗脱效果比pH2.5要差点，但还行。另外还有个idea，如果BSA
在Glycine里不沉淀的话，加点BSA试试。如果这个办法可以能给我发个消息吗？祝好运。

t*p2011-01-11 08:01

4 楼

上清有目的抗体，但是浓度相当低。如果沉淀不溶解的话，我怎么知道它是否含有我的
抗体成分呢？
我现在把它离心了，上清透析，沉淀在等答案。
如果沉淀不溶，我纯化的抗体相当少啊！

2M
BSA
运。

【在 l*****r 的大作中提到】

: 楼上说得对，关键看你的抗体是不是在可溶部分。如果沉淀的是你的抗体，不妨试试2M
: Arginin pH4.3，我试过洗脱效果比pH2.5要差点，但还行。另外还有个idea，如果BSA
: 在Glycine里不沉淀的话，加点BSA试试。如果这个办法可以能给我发个消息吗？祝好运。

f*s2011-01-11 08:01

5 楼

遇到过和LZ一样的问题
4个抗体，2个没问题，2个有沉淀，完全一样的操作。
沉淀后的上清部分抗体量很低，可以估计大部分在沉淀。
透析之后情况没有好转。无奈，全部过滤掉了......
希望LZ找到更好方法。

1M

【在 t****p 的大作中提到】

n*e2011-01-11 08:01

6 楼

沉淀PBS洗后不知道能不能用DMSF溶解？有时候有机溶剂可能会有好的溶解效果，然后
稀释在其他溶液里。要注意的是，含DMSF的溶液不能透析，要用脱盐柱才行。
还有用来中和洗脱液的1M tris 不用很多。我见过的protocol一般建议1ml洗脱液加
100ulTris。这个实在太多了。我试过30ulTris仍然可以中和1ml洗脱液的。我想Tris太
多可能也是引起沉淀的一个原因。
建议而已，没有严格验证过。

【在 t****p 的大作中提到】

: 上清有目的抗体，但是浓度相当低。如果沉淀不溶解的话，我怎么知道它是否含有我的
: 抗体成分呢？
: 我现在把它离心了，上清透析，沉淀在等答案。
: 如果沉淀不溶，我纯化的抗体相当少啊！
:
: 2M
: BSA
: 运。

n*e2011-01-11 08:01

7 楼

的抗体成分呢？
可以试试沉淀直接电泳。有时候沉淀会溶解在上样buffer里。

【在 t****p 的大作中提到】