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Real time PCR 内参照引物设置 ?

Real time PCR 内参照引物设置 ?# Biology - 生物学

s*r2011-01-12 08:01

1 楼

我目前是O1签证，来到新公司后申请了eb1b，140已经批了。485是4月底的RD,还没批。
但是这时候公司大裁员，所以处境特别头疼。公司HR说按法律规定要给USCIS发一封这
样的邮件。
请问这是正常的吗？因为这封信会直接导致我的485申请无效，所以对我非常严重。
有谁有类似的经历或知识吗？这封信是必要的吗？谢谢了。

F*w2011-01-12 08:01

2 楼

请教:
如果用gene specific primer 做反转录，做real time PCR的时候，怎么设置内参照?

p*t2011-01-12 08:01

3 楼

Legally the company is required to notify USCIS, big companies are more
likely than small companies to comply with this requirement.

【在 s******r 的大作中提到】

: 我目前是O1签证，来到新公司后申请了eb1b，140已经批了。485是4月底的RD,还没批。
: 但是这时候公司大裁员，所以处境特别头疼。公司HR说按法律规定要给USCIS发一封这
: 样的邮件。
: 请问这是正常的吗？因为这封信会直接导致我的485申请无效，所以对我非常严重。
: 有谁有类似的经历或知识吗？这封信是必要的吗？谢谢了。

c*12011-01-12 08:01

4 楼

貌似没有办法了，因为你的cDNA里只有你的target。
我没有这样做过，但是你可以试试：在你用gene specific primer 做反转录的时候，
也加入你的内参primer，这样你就引入了内参。

w*32011-01-12 08:01

5 楼

agree, i was told before from my previous company.
good luck! there is nothing u can do at this point.

S*s2011-01-12 08:01

6 楼

我有点好奇你这个实验设计，为什么要用 GSP 做反转录？和 Oligo dT 相比有什么优
势么？

o*a2011-01-12 08:01

7 楼

比如俺们做microRNA的PCR就是用GSP......

【在 S*****s 的大作中提到】

: 我有点好奇你这个实验设计，为什么要用 GSP 做反转录？和 Oligo dT 相比有什么优
: 势么？

Z*52011-01-12 08:01

8 楼

我就这么做的
Transition C19MC microRNAs are processed from introns of large Pol-II, non-
protein-coding transcripts
A Double-Negative Feedback Loop between ZEB1-SIP1 and the microRNA-200
Family Regulates Epithelial-Mesenchymal
参考这两篇文章，可以用第一篇文章中提到的GSP做第二篇文章中的Figure1C
至于要做定量，最好还是用random hexamers做反转录吧。我试过random hexamers和
OligodT，结果都是一致的。

【在 o*****a 的大作中提到】

: 比如俺们做microRNA的PCR就是用GSP......

S*s2011-01-12 08:01

9 楼

优势是什么？我只做过 realtime PCR 不做 microRNA。在我看如果用 oligodT 就可以
拿 GAPDH actin 之类的内参做 control，测出来的 specific level 也更准确一点。

【在 o*****a 的大作中提到】

: 比如俺们做microRNA的PCR就是用GSP......