心肌细胞BrDU染色FACs求助# Biology - 生物学
c*i
1 楼
新手问个傻问题，就是想看本txt小说的话，怎么把文件从电脑传到iphone上看？
dropbox里的txt只能用dropbox viewer打开，想选其它程序的话系统说没有支持txt的
程序，虽然我已经安装了ireader。
dropbox里的txt只能用dropbox viewer打开，想选其它程序的话系统说没有支持txt的
程序，虽然我已经安装了ireader。
w*n
2 楼
本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
然后做FACS。
发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
多谢，
然后做FACS。
发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
多谢，
g*t
3 楼
很多book reader是和itunes连的.你可以拷贝到相应的apps目录下吧.
如果你没有其他的apps,那转成PDF, ibook应该可以自动打开.
新手问个傻问题，就是想看本txt小说的话，怎么把文件从电脑传到iphone上看？
dropbox里的txt只能用dropbox viewer打开，想选其它程序的话系统说没有支持txt的
程序，虽然我已经安装了ireader。
【在 c*******i 的大作中提到】
: 新手问个傻问题，就是想看本txt小说的话，怎么把文件从电脑传到iphone上看？
: dropbox里的txt只能用dropbox viewer打开，想选其它程序的话系统说没有支持txt的
: 程序，虽然我已经安装了ireader。
如果你没有其他的apps,那转成PDF, ibook应该可以自动打开.
新手问个傻问题，就是想看本txt小说的话，怎么把文件从电脑传到iphone上看？
dropbox里的txt只能用dropbox viewer打开，想选其它程序的话系统说没有支持txt的
程序，虽然我已经安装了ireader。
【在 c*******i 的大作中提到】
: 新手问个傻问题，就是想看本txt小说的话，怎么把文件从电脑传到iphone上看？
: dropbox里的txt只能用dropbox viewer打开，想选其它程序的话系统说没有支持txt的
: 程序，虽然我已经安装了ireader。
M*e
4 楼
你确定心肌细胞能通过样品准备时候的塞虑？
【在 w*********n 的大作中提到】
: 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
: 然后做FACS。
: 发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
: 细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
: 多谢，
【在 w*********n 的大作中提到】
: 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
: 然后做FACS。
: 发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
: 细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
: 多谢，
B*o
5 楼
你染色的时候细胞permeablize了么？
【在 w*********n 的大作中提到】
: 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
: 然后做FACS。
: 发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
: 细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
: 多谢，
【在 w*********n 的大作中提到】
: 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
: 然后做FACS。
: 发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
: 细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
: 多谢，
F*e
6 楼
请问BrdU标记是在小鼠出生前注射怀孕母鼠，还是直接注射新生小鼠？BrdU标记的量和
时间是多少？荧光下看得是切片？
时间是多少？荧光下看得是切片？
w*n
7 楼
实验过程如下
1. 怀孕母鼠皮下埋BrdU Pump. 或者 新生鼠腹腔注射BrdU
2。胰酶消化新生鼠心脏，得单细胞悬液
3。FACs染色，一切按BD 的kit说明书进行
请大虾指教
1. 怀孕母鼠皮下埋BrdU Pump. 或者 新生鼠腹腔注射BrdU
2。胰酶消化新生鼠心脏，得单细胞悬液
3。FACs染色，一切按BD 的kit说明书进行
请大虾指教
c*l
8 楼
为啥如此做呢？ 看细胞增殖？为啥不直接用DNA燃料，然后根据DNA量sort
w*n
9 楼
作活体动物的细胞增殖不都是用BD的BrdUkit吗?
【在 c****l 的大作中提到】
: 为啥如此做呢？ 看细胞增殖？为啥不直接用DNA燃料，然后根据DNA量sort
【在 c****l 的大作中提到】
: 为啥如此做呢？ 看细胞增殖？为啥不直接用DNA燃料，然后根据DNA量sort
F*e
10 楼
没做过相关的实验，不过可以考虑使用EdU代替BrdU，效果会好一些，而且实验步骤更
简单。
简单。
B*o
11 楼
你现在既然已经看到有BrdU阳性的细胞。那么只可能是你染色过程中的问题
你又说一切都按BD的kit说明来的，
那唯一的解释就是抗体不好。找BD要不同batch的来试一试
我是你的话，先把各个步骤查一遍，是不是完全和protocol一致。通常都是小疏忽造成的
【在 w*********n 的大作中提到】
: 实验过程如下
: 1. 怀孕母鼠皮下埋BrdU Pump. 或者 新生鼠腹腔注射BrdU
: 2。胰酶消化新生鼠心脏，得单细胞悬液
: 3。FACs染色，一切按BD 的kit说明书进行
: 请大虾指教
你又说一切都按BD的kit说明来的，
那唯一的解释就是抗体不好。找BD要不同batch的来试一试
我是你的话，先把各个步骤查一遍，是不是完全和protocol一致。通常都是小疏忽造成的
【在 w*********n 的大作中提到】
: 实验过程如下
: 1. 怀孕母鼠皮下埋BrdU Pump. 或者 新生鼠腹腔注射BrdU
: 2。胰酶消化新生鼠心脏，得单细胞悬液
: 3。FACs染色，一切按BD 的kit说明书进行
: 请大虾指教
b*l
12 楼
没看懂。。。是说同一套 kit，镜下没问题，FACS 有问题？两者的 denature 方法一
样么？还是用的不同的 antibody/方法？另外，镜下和 FACS 可以交叉验证的：FACS
染色后可以 mount 到片子上镜下看，而为镜下染色用的 kit 也可以尝试做 FACS 来对
照。还有，这个 brdu-kit 在你手下曾经 work 过么？如果第一次用，是不是先找个类
似的 cell line 做个 in vitro 的 positive control 先？
【在 w*********n 的大作中提到】
: 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
: 然后做FACS。
: 发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
: 细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
: 多谢，
样么？还是用的不同的 antibody/方法？另外，镜下和 FACS 可以交叉验证的：FACS
染色后可以 mount 到片子上镜下看，而为镜下染色用的 kit 也可以尝试做 FACS 来对
照。还有，这个 brdu-kit 在你手下曾经 work 过么？如果第一次用，是不是先找个类
似的 cell line 做个 in vitro 的 positive control 先？
【在 w*********n 的大作中提到】
: 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
: 然后做FACS。
: 发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
: 细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
: 多谢，
w*n
13 楼
多谢大虾
我们把心肌细胞消化出来以后放在体外培养,然后在培养液里面加入BrDU，发现有BrDu
阳性细胞
如果给小鼠注射BrdU，FACS发现只有心脏里面的杂细胞是Brdu阳性， 心肌细胞几乎没
有。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 没看懂。。。是说同一套 kit，镜下没问题，FACS 有问题？两者的 denature 方法一
: 样么？还是用的不同的 antibody/方法？另外，镜下和 FACS 可以交叉验证的：FACS
: 染色后可以 mount 到片子上镜下看，而为镜下染色用的 kit 也可以尝试做 FACS 来对
: 照。还有，这个 brdu-kit 在你手下曾经 work 过么？如果第一次用，是不是先找个类
: 似的 cell line 做个 in vitro 的 positive control 先？
我们把心肌细胞消化出来以后放在体外培养,然后在培养液里面加入BrDU，发现有BrDu
阳性细胞
如果给小鼠注射BrdU，FACS发现只有心脏里面的杂细胞是Brdu阳性， 心肌细胞几乎没
有。
【在 b*****l 的大作中提到】
: 没看懂。。。是说同一套 kit，镜下没问题，FACS 有问题？两者的 denature 方法一
: 样么？还是用的不同的 antibody/方法？另外，镜下和 FACS 可以交叉验证的：FACS
: 染色后可以 mount 到片子上镜下看，而为镜下染色用的 kit 也可以尝试做 FACS 来对
: 照。还有，这个 brdu-kit 在你手下曾经 work 过么？如果第一次用，是不是先找个类
: 似的 cell line 做个 in vitro 的 positive control 先？
m*p
14 楼
That makes sense a lot! In P0-P7 hearts, very few cells proliferate, and
after P7, there is almost no cell
proliferation, unless you damage the heart. However, when you isolate cells
in the culture, the situation will
be different as more cells proliferate.
BrDu
【在 w*********n 的大作中提到】
: 多谢大虾
: 我们把心肌细胞消化出来以后放在体外培养,然后在培养液里面加入BrDU，发现有BrDu
: 阳性细胞
: 如果给小鼠注射BrdU，FACS发现只有心脏里面的杂细胞是Brdu阳性， 心肌细胞几乎没
: 有。
after P7, there is almost no cell
proliferation, unless you damage the heart. However, when you isolate cells
in the culture, the situation will
be different as more cells proliferate.
BrDu
【在 w*********n 的大作中提到】
: 多谢大虾
: 我们把心肌细胞消化出来以后放在体外培养,然后在培养液里面加入BrDU，发现有BrDu
: 阳性细胞
: 如果给小鼠注射BrdU，FACS发现只有心脏里面的杂细胞是Brdu阳性， 心肌细胞几乎没
: 有。
w*n
15 楼
请看一眼这篇文章，人家在P4小鼠心脏里面做出来20%BrDU 阳性
cells
http://cardiovascres.oxfordjournals.org/content/early/2010/02/0
【在 m*p 的大作中提到】
: That makes sense a lot! In P0-P7 hearts, very few cells proliferate, and
: after P7, there is almost no cell
: proliferation, unless you damage the heart. However, when you isolate cells
: in the culture, the situation will
: be different as more cells proliferate.
:
: BrDu
cells
http://cardiovascres.oxfordjournals.org/content/early/2010/02/0
【在 m*p 的大作中提到】
: That makes sense a lot! In P0-P7 hearts, very few cells proliferate, and
: after P7, there is almost no cell
: proliferation, unless you damage the heart. However, when you isolate cells
: in the culture, the situation will
: be different as more cells proliferate.
:
: BrDu
m*p
16 楼
They did not say how long they pulse label the heart with BrdU. But, since
their data indicates the percentage
of BrdU positive cells is almost equal to Ki67 percentage, that means the
BrdU labeling time will be more than
24 hours. When you label an E14.5 hearts with Brdu for 24 hours, more than
half of the cardiomyoctyes will be
positive if you know how fast the embryonic cells proliferate in vivo,
however they only found about 20% cells
were positive.
Their Ki67 staining is not the right staining, if you know what cell cycle
phases will be Ki67 positive. Some of
the cells they point to are not cardiomyocytes.
BrdU staining is horrible.
I do not know what I can tell you, but since you can get the IHC work, then
try IHC and count the percentage of
BrdU positive cells.
Also, Ki63 and pH3 only give you a snap shop information, while BrdU
labeling is a accumulation of
proliferative cells after you inject the BrdU, so the time you pulse label
the heart determines Brdu percentage.
【在 w*********n 的大作中提到】
: 请看一眼这篇文章，人家在P4小鼠心脏里面做出来20%BrDU 阳性
:
: cells
: http://cardiovascres.oxfordjournals.org/content/early/2010/02/0
their data indicates the percentage
of BrdU positive cells is almost equal to Ki67 percentage, that means the
BrdU labeling time will be more than
24 hours. When you label an E14.5 hearts with Brdu for 24 hours, more than
half of the cardiomyoctyes will be
positive if you know how fast the embryonic cells proliferate in vivo,
however they only found about 20% cells
were positive.
Their Ki67 staining is not the right staining, if you know what cell cycle
phases will be Ki67 positive. Some of
the cells they point to are not cardiomyocytes.
BrdU staining is horrible.
I do not know what I can tell you, but since you can get the IHC work, then
try IHC and count the percentage of
BrdU positive cells.
Also, Ki63 and pH3 only give you a snap shop information, while BrdU
labeling is a accumulation of
proliferative cells after you inject the BrdU, so the time you pulse label
the heart determines Brdu percentage.
【在 w*********n 的大作中提到】
: 请看一眼这篇文章，人家在P4小鼠心脏里面做出来20%BrDU 阳性
:
: cells
: http://cardiovascres.oxfordjournals.org/content/early/2010/02/0
b*l
17 楼
是啊是啊。建议 lz 做一个 in vivo positive control，也就是说，用一种一定能够
使心肌细胞 prolif 的方法处理一下，比如说人为造成心肌损伤，然后做 FACS 看看是
否能看到 brdu 信号。
cells
【在 m*p 的大作中提到】
: That makes sense a lot! In P0-P7 hearts, very few cells proliferate, and
: after P7, there is almost no cell
: proliferation, unless you damage the heart. However, when you isolate cells
: in the culture, the situation will
: be different as more cells proliferate.
:
: BrDu
使心肌细胞 prolif 的方法处理一下，比如说人为造成心肌损伤，然后做 FACS 看看是
否能看到 brdu 信号。
cells
【在 m*p 的大作中提到】
: That makes sense a lot! In P0-P7 hearts, very few cells proliferate, and
: after P7, there is almost no cell
: proliferation, unless you damage the heart. However, when you isolate cells
: in the culture, the situation will
: be different as more cells proliferate.
:
: BrDu
M*n
18 楼
try EdU.
a bit more expensive, but easier to handle.
a bit more expensive, but easier to handle.
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