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“简单”的细胞(293T)实验的问题
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“简单”的细胞(293T)实验的问题# Biology - 生物学
g*n
1
【 以下文字转载自 LosAngeles 讨论区 】
发信人: gilljin (鱼鳃), 信区: LosAngeles
标 题: H1B签证的问题
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 30 20:13:56 2009, 美东)
各位前辈大家好。
1.听说h1b现在名额还剩下1600个了,是 真的吗?
2.如果在4月1日之前找到工作然后公司帮忙弄好材料递交上去等着抽签,是这样的吗,
现在还没有工作是不是已经太晚了? opt今年6月份开始的。。。
3.祝大家心情好。
4.谢谢
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i*t
2
我想问一下
新公司是否会联系当前公司?
我的意思是说 从A到B 中间。B给了offer, 可能会做调查啥的 A是否会知道啊
主要是A是小公司 如果大公司也就无所谓了
如果A会知道的话, 那我去哪里 根本不能保密啊
谁懂这方便的 求教啊!
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k*g
3
apple店里有带回国直接可以用的裸机了么?想给国内的家里人带,同时求价格,先谢
啦~
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f*g
4
最近在养293T cells, 转染或者未转染的293T细胞放在FASC buffer (PBS+5% FBS)中
,然后在室温或者ice上放置两到三个小时,用7-AAD染色,发现60%的细胞都是 7-AAD+ (做 FACS的时候离 trypsinization差不多5-6小时吧)。刚刚trypsinized的细胞,然后立即作FACS, 7-AAD+的细胞比例很低,只有1-2%左右吧。
请问这种情况正常么?
我看到有的paper上, 293T细胞在室温或者冰上放置16个小时,然后用相应的抗体染色
,然后FACS 分析。 这种情况难道所有的293T 细胞不会全部死掉么? 如果细胞都死了
,应该都会被染色吧 ?
高手来分析一下吧?谢谢!
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i*t
5
真心求问啊!
多谢指点!
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S*s
6
你是不是检查一下你的 FACS Buffer? 比如PBS 的 pH 值,是 1X 还是 10X PBS,FBS
有没有过期,或者 7-AAD 买了多久了?我也用 293T 做 Flow,样品分解成单细胞后
要花六到七个小时染色,然后每个样品里加 7-AAD 做对照。我的样品里 7-AAD
positive 的细胞都不多。我在 Negative 的细胞里 gate 一部分出来作为 P1,P1 一
般都在 70% 以上,另外有一部分 Negative 的细胞 FSC 和 SSC 值都很大我都不分析
了。你这个 50-60% 听起来有点吓人。或者你换一个染料来做这个实验,比如 DAPI?
如果 DAPI 的值和 7-AAD 的不一样说明两个药品当中有一个坏掉了。

AAD+ (做 FACS的时候离 trypsinization差不多5-6小时吧)。刚刚trypsinized的细
胞,然后立即作FACS, 7-AAD+的细胞比例很低,只有1-2%左右吧。

【在 f*******g 的大作中提到】
: 最近在养293T cells, 转染或者未转染的293T细胞放在FASC buffer (PBS+5% FBS)中
: ,然后在室温或者ice上放置两到三个小时,用7-AAD染色,发现60%的细胞都是 7-AAD+ (做 FACS的时候离 trypsinization差不多5-6小时吧)。刚刚trypsinized的细胞,然后立即作FACS, 7-AAD+的细胞比例很低,只有1-2%左右吧。
: 请问这种情况正常么?
: 我看到有的paper上, 293T细胞在室温或者冰上放置16个小时,然后用相应的抗体染色
: ,然后FACS 分析。 这种情况难道所有的293T 细胞不会全部死掉么? 如果细胞都死了
: ,应该都会被染色吧 ?
: 高手来分析一下吧?谢谢!

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c*z
7
tell them NOT to contact current employer
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f*g
8
谢谢你的回复 !
7-AAD应该是好的,我的293T细胞从培养皿detach后立即用7-AAD染色,viability挺高的,
有95%左右吧。但我用抗体染色时间长,要3-4小时,最后作FACS,7-AAD+ 的细胞就达
到了50-60%。
在室温下温育的时候, 死细胞和活的细胞明显分成两个population, 死细胞FSC明显变小了。
我的PBS是从公司买的, 1X,但从来没有测过pH。
谢谢
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i*t
9
这样就可以了?
现在单位就不可能知道我去哪里了吧?

【在 c***z 的大作中提到】
: tell them NOT to contact current employer
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f*g
10
我的MSN f*******[email protected],你有时间能不能加我的MSN,详细聊聊呢? 谢谢!

的,
显变小了。

【在 f*******g 的大作中提到】
: 谢谢你的回复 !
: 7-AAD应该是好的,我的293T细胞从培养皿detach后立即用7-AAD染色,viability挺高的,
: 有95%左右吧。但我用抗体染色时间长,要3-4小时,最后作FACS,7-AAD+ 的细胞就达
: 到了50-60%。
: 在室温下温育的时候, 死细胞和活的细胞明显分成两个population, 死细胞FSC明显变小了。
: 我的PBS是从公司买的, 1X,但从来没有测过pH。
: 谢谢

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i*t
11
自己再re一下吧
多谢各位 指点一下!
thanks
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i*t
12
re继续求问
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f*n
13
新公司填背景调查表的时候,都会有个选项,你选不联系现在的公司。这个大家都理解
,他们不会联系的。如果要Reference,找个关系好的同事,能保密就行。至于现在公
司知道不知道你去哪个新公司,这个重要吗?你都走了,人家要知道你去哪个公司干嘛
?除非跟现在公司签了什么文件,不能去竞争对手的情况除外。你走的时候,没有义务
告诉现在的公司你要去哪里。以前遇到过的大部分人都说,也有小部分人不说。现在
Social Media 这么发达,就算你不说,没多久大家还是会知道你去了哪里。再说,这
个世界很小,以后说不定在外面碰到现在公司的人,或者你又回现在的公司,还是留点
后路好,多个朋友多条路
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