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关于Western的蛋白定量。

关于Western的蛋白定量。# Biology - 生物学

h*e2011-02-24 08:02

1 楼

【以下文字转载自 WBCenter 讨论区】
发信人: hiddenlake (静水清漩), 信区: WBCenter
标题: Astrology版申请代发伪币
发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 21 09:50:05 2011, 美东)
版面活动：手续费无
代发版面：星座物语（Astrology）
代发事由(主题标题或链接)：金牛月活动
http://www.mitbbs.com/article_t2/astrology/31464275.html
奖励以下18位ID每人50伪币
1. lillblues
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4. hiddenlake
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12.kaylaxu
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16. hwfuture
17. KittyKat
18. aimy
共计900伪币，请站务从版面金库扣除。如能酌情赞助，本版万分感激。
非常感谢！

n*w2011-02-24 08:02

2 楼

一般都是normalize到house-keep genes，对吧。
你们见过normalize到ponceau S staining的吗？
读了篇paper，里面是那样弄的，
转完膜，Ponceau S染，然后记录下来，说为了保证equal loading，
然后再用抗体得到specific signal, normalize到corresponding Ponceau S signal。
。。
我从来没有见过这么做的，也觉得这么做是不对的。
大家的意见呢？
谢谢。

h*e2011-02-24 08:02

3 楼

感谢大家热情参与金牛月活动，已请站方代发各位的50伪币奖金
thanks again!

m*52011-02-24 08:02

4 楼

怪怪的，他这相当于用总蛋白normallize吧
虽然我觉得大多数情况normalize的结果和tublin 之类housekeeping gene的Normalize
结果也差不多，有时还比housekeeping gene的 normalize结果更准确些……

o*a2011-02-24 08:02

5 楼

最近也在看这些技术文章，似乎如果染料结合没饱和的话，这么做也不一定比house
keeping genes差。前不久看过的一个全蛋白做normalization文章：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2567873/?tool=pubme
另外还有个半定量western的文章提到Ponceau S的局限
It has been found that images acquired with fluorescent staining are better
suited for quantification compared to Ponceau S. This is connected to the
fact that a color staining such as Ponceau S darkens the membrane locally.
Since the color of the membrane cannot become darker than that of the pure
staining color, there must be saturation before that color value is reached.
This leaves only a certain useful range of staining concentrations,
independent of whether the actual binding of Ponceau S to the protein is
saturated. With fluorescent staining, the membrane appears brighter with
increasing protein concentration, and there is no theoretical upper bound
for brightness.
Journal of Immunological Methods
Volume 345, Issues 1-2, 30 June 2009, Pages 40-48
Improved semiquantitative Western blot technique with increased
quantification range