问一下boyden chamber invasion assay - 未名空间MITBBS历史存档

问一下boyden chamber invasion assay# Biology - 生物学

B*52011-03-06 08:03

1 楼

时间：05/15
地点：北京
人物：父母
签证状态：2000
是否发包子：YES
基本情况:
http://www.mitbbs.com/article_t0/Reunion/31472421.html
上次悲剧，这次卷土重来，求祝福
就问了我爸是否有出过国，要了他的名片和我的材料就过了

s*e2011-03-06 08:03

2 楼

我遇到的问题就是最后一步counting cells计算结果：
直接显微镜counting，我觉得透过膜的细胞的分布不是很均匀的，所以我总觉得选几个
区域数细胞不是很靠谱，虽然很多人都是这也做的，而且我到最后数细胞的时候，染料
残留和细胞经常难以分辨。
我最近开始试着用Calcein AM + cell dissociation solution,比如Trevigen的cell
dissociation solution，很多的commercial kit似乎都是这个办法。但是我总觉得，
会不会细胞不会完全的脱离下来，会不会有细胞死掉，或者膜上面的细胞会穿透膜掉下
来。
谢谢了

e*o2011-03-06 08:03

3 楼

asdf

s*y2011-03-06 08:03

4 楼

我也经常有这个麻烦，后来我就采用DAPI 染核来数，就准确多了。
另外，细胞分布的确不是很均匀，但是只要你重复足够多次，最后的数据还是
可以用的
这个，关于细胞脱离不重复的事情，还是老话，要重复足够多次，
至于膜上面的细胞？这个不太可能穿过膜掉下来的，太难了
如果你不放心的话，做一个control, 把细胞放在没有gradient 的情况下adhere 1个小
时，然后用cell dissociation kit

【在 s**********e 的大作中提到】

: 我遇到的问题就是最后一步counting cells计算结果：
: 直接显微镜counting，我觉得透过膜的细胞的分布不是很均匀的，所以我总觉得选几个
: 区域数细胞不是很靠谱，虽然很多人都是这也做的，而且我到最后数细胞的时候，染料
: 残留和细胞经常难以分辨。
: 我最近开始试着用Calcein AM + cell dissociation solution,比如Trevigen的cell
: dissociation solution，很多的commercial kit似乎都是这个办法。但是我总觉得，
: 会不会细胞不会完全的脱离下来，会不会有细胞死掉，或者膜上面的细胞会穿透膜掉下
: 来。
: 谢谢了

e*o2011-03-06 08:03

5 楼

bless~~~~

s*e2011-03-06 08:03

6 楼

谢谢了，你用ＤＡＰＩ是说染色后银光显微镜拍照片，然后在用照片来分析吗？
谢谢

【在 s******y 的大作中提到】

:
: 我也经常有这个麻烦，后来我就采用DAPI 染核来数，就准确多了。
: 另外，细胞分布的确不是很均匀，但是只要你重复足够多次，最后的数据还是
: 可以用的
: 这个，关于细胞脱离不重复的事情，还是老话，要重复足够多次，
: 至于膜上面的细胞？这个不太可能穿过膜掉下来的，太难了
: 如果你不放心的话，做一个control, 把细胞放在没有gradient 的情况下adhere 1个小
: 时，然后用cell dissociation kit

t*i2011-03-06 08:03

7 楼

big big bless!!!

s*y2011-03-06 08:03

8 楼

是啊，因为DAPI 是染细胞核DNA的，背景很低，而且细胞核圆圆的，
一眼就看出来了。
可以先照照片也可以直接数。

【在 s**********e 的大作中提到】

: 谢谢了，你用ＤＡＰＩ是说染色后银光显微镜拍照片，然后在用照片来分析吗？
: 谢谢

y*y2011-03-06 08:03

9 楼

bless~~~

s*e2011-03-06 08:03

10 楼

非常感谢，
祝你找工作好运

【在 s******y 的大作中提到】

: 是啊，因为DAPI 是染细胞核DNA的，背景很低，而且细胞核圆圆的，
: 一眼就看出来了。
: 可以先照照片也可以直接数。

s*g2011-03-06 08:03

11 楼

Bless

s*e2011-03-06 08:03

12 楼

谢谢了，用了你的方法。合作实验室有一台比较高级的显微镜，可以扫描整个dapi
stained membrane，然后用软件计算膜上面的细胞数，效果非常的好。
觉得现在的仪器真的是先进啊，呵呵，显微镜扫描出上百招照片，每张照片大概10%
overlap，然后软件把这些照片拼成一张大照片，拿到一张完整的membrane的荧光照片。

【在 s******y 的大作中提到】

: 是啊，因为DAPI 是染细胞核DNA的，背景很低，而且细胞核圆圆的，
: 一眼就看出来了。
: 可以先照照片也可以直接数。

Y*a2011-03-06 08:03

13 楼

Bless

a*s2011-03-06 08:03

14 楼

bless

n*z2011-03-06 08:03

15 楼

big big bless!

f*y2011-03-06 08:03

16 楼

bless

s*a2011-03-06 08:03

17 楼

祝福

a*52011-03-06 08:03

18 楼

祝福！

n*n2011-03-06 08:03

19 楼

bless

b*32011-03-06 08:03

20 楼

bless

s*n2011-03-06 08:03

21 楼

万千祝福

D*p2011-03-06 08:03

22 楼

bless

a*12011-03-06 08:03

23 楼

bless

B*Q2011-03-06 08:03

24 楼

bless~~

b*t2011-03-06 08:03

25 楼

bless

j*22011-03-06 08:03

26 楼

祝福二签顺利通过！

【在 B******5 的大作中提到】

: 时间：05/15
: 地点：北京
: 人物：父母
: 签证状态：2000
: 是否发包子：YES
: 基本情况:
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Reunion/31472421.html
: 上次悲剧，这次卷土重来，求祝福
: 就问了我爸是否有出过国，要了他的名片和我的材料就过了

j*22011-03-06 08:03

27 楼

祝福二签顺利通过！

a*a2011-03-06 08:03

28 楼

big Bless

R*e2011-03-06 08:03

29 楼

Bless!

d*a2011-03-06 08:03

30 楼

祝水过

K*52011-03-06 08:03

31 楼

Bless

a*12011-03-06 08:03

32 楼

bless

s*t2011-03-06 08:03

33 楼

bless ~~~

【在 B******5 的大作中提到】

: 时间：05/15
: 地点：北京
: 人物：父母
: 签证状态：2000
: 是否发包子：YES
: 基本情况:
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Reunion/31472421.html
: 上次悲剧，这次卷土重来，求祝福
: 就问了我爸是否有出过国，要了他的名片和我的材料就过了

w*e2011-03-06 08:03

34 楼

Bless

c*22011-03-06 08:03

35 楼

祝福顺利通过！

Z*h2011-03-06 08:03

36 楼

古德拉克！

【在 B******5 的大作中提到】

: 时间：05/15
: 地点：北京
: 人物：父母
: 签证状态：2000
: 是否发包子：YES
: 基本情况:
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Reunion/31472421.html
: 上次悲剧，这次卷土重来，求祝福
: 就问了我爸是否有出过国，要了他的名片和我的材料就过了

I*D2011-03-06 08:03

37 楼

bless

l*p2011-03-06 08:03

38 楼

祝二签水过！

y*u2011-03-06 08:03

39 楼

bless!

x*62011-03-06 08:03

40 楼

bless bless

x*62011-03-06 08:03

41 楼

bless

c*t2011-03-06 08:03

42 楼

bless

d*r2011-03-06 08:03

43 楼

Bless

f*a2011-03-06 08:03

44 楼

bless!

v*g2011-03-06 08:03

45 楼

bless

i*C2011-03-06 08:03

46 楼

bless

z*u2011-03-06 08:03

47 楼

bless

e*w2011-03-06 08:03

48 楼

big Bless

i*c2011-03-06 08:03

49 楼

Big Bless ~~

【在 B******5 的大作中提到】

: 时间：05/15
: 地点：北京
: 人物：父母
: 签证状态：2000
: 是否发包子：YES
: 基本情况:
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Reunion/31472421.html
: 上次悲剧，这次卷土重来，求祝福
: 就问了我爸是否有出过国，要了他的名片和我的材料就过了

m*72011-03-06 08:03

50 楼

bless

【在 B******5 的大作中提到】

: 时间：05/15
: 地点：北京
: 人物：父母
: 签证状态：2000
: 是否发包子：YES
: 基本情况:
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Reunion/31472421.html
: 上次悲剧，这次卷土重来，求祝福
: 就问了我爸是否有出过国，要了他的名片和我的材料就过了

Y*l2011-03-06 08:03

51 楼

big Bless!

【在 B******5 的大作中提到】

: 时间：05/15
: 地点：北京
: 人物：父母
: 签证状态：2000
: 是否发包子：YES
: 基本情况:
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Reunion/31472421.html
: 上次悲剧，这次卷土重来，求祝福
: 就问了我爸是否有出过国，要了他的名片和我的材料就过了

h*b2011-03-06 08:03

52 楼

祝福顺利通过！

【在 B******5 的大作中提到】

: 时间：05/15
: 地点：北京
: 人物：父母
: 签证状态：2000
: 是否发包子：YES
: 基本情况:
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Reunion/31472421.html
: 上次悲剧，这次卷土重来，求祝福
: 就问了我爸是否有出过国，要了他的名片和我的材料就过了