有用BL21(DE3 pLysS)表达蛋白的吗?# Biology - 生物学
s*k
1 楼
《美国留学那些事》Awkward Moments in US Episode 7 第七集之"走火"
更多：http://story2movie.com/video/awkward-moments-in-us/
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k*n
2 楼
也许遇见你是我今生最大的错误，来不及好好珍惜，再回首时，你已作他妻。
如果上天真的还可以给我一次机会，我真的不会再次让你走到我身后，我才懂得珍
惜。
也许我太过贪心，也许是我太过执着，才会让那份爱埋葬在萌芽的时候。
也许回到当初我也无法改变什么，可是我只想好好去爱你一次。
有时候觉得自己期待，变成这样的结果，也许，现实中，总比我想要的有些差距，
生命不能承受之重，我却一次次让你失望了。
不过，看着你那么幸福生活，感觉自己也没那么难过，说不定和我在一起你比现在
更差吧。
生活还要继续，梦想不会停止，我不知道下一站会遇见谁，会有怎么样的人出现，
我只希望下个你，真的是我的。
人生若只如初见，那多该好
如果上天真的还可以给我一次机会，我真的不会再次让你走到我身后，我才懂得珍
惜。
也许我太过贪心，也许是我太过执着，才会让那份爱埋葬在萌芽的时候。
也许回到当初我也无法改变什么，可是我只想好好去爱你一次。
有时候觉得自己期待，变成这样的结果，也许，现实中，总比我想要的有些差距，
生命不能承受之重，我却一次次让你失望了。
不过，看着你那么幸福生活，感觉自己也没那么难过，说不定和我在一起你比现在
更差吧。
生活还要继续，梦想不会停止，我不知道下一站会遇见谁，会有怎么样的人出现，
我只希望下个你，真的是我的。
人生若只如初见，那多该好
p*t
3 楼
灌水排水必须经过iTune控制
想洗泡泡浴什么的，可以在iTune BathStore订购
水温不可自行设定，这是为了更好的用户体验，免得用户太弱智或者被黑客
病毒控制导致烫伤
想洗泡泡浴什么的，可以在iTune BathStore订购
水温不可自行设定，这是为了更好的用户体验，免得用户太弱智或者被黑客
病毒控制导致烫伤
g*y
4 楼
我的蛋白bl21(DE3)的细胞里0.5mM IPTG induction 表达很好。后来转到BL21(DE3
pLysS)里 加IPTG却不表达我试过
0.1-2mM的IPTG. 2hr, 4hr 和 o/n. 2mM IPTG O/N 好像有一点点表达。。 都是同样
的蛋白同样的hosting vector. 现
在怀疑是不是BL21(DE3 pLysS)里表达的lysozyme 把我的蛋白降解了? 不太可能啊！
大家有没有遇到类似的情况呢？
pLysS)里 加IPTG却不表达我试过
0.1-2mM的IPTG. 2hr, 4hr 和 o/n. 2mM IPTG O/N 好像有一点点表达。。 都是同样
的蛋白同样的hosting vector. 现
在怀疑是不是BL21(DE3 pLysS)里表达的lysozyme 把我的蛋白降解了? 不太可能啊！
大家有没有遇到类似的情况呢？
z*r
5 楼
会不会出iPiglet？
【在 p****t 的大作中提到】
: 灌水排水必须经过iTune控制
: 想洗泡泡浴什么的，可以在iTune BathStore订购
: 水温不可自行设定，这是为了更好的用户体验，免得用户太弱智或者被黑客
: 病毒控制导致烫伤
【在 p****t 的大作中提到】
: 灌水排水必须经过iTune控制
: 想洗泡泡浴什么的，可以在iTune BathStore订购
: 水温不可自行设定，这是为了更好的用户体验，免得用户太弱智或者被黑客
: 病毒控制导致烫伤
b*c
6 楼
我老板说他以前也遇到过这种情况,就是完全不表达了,原因不详,所以我们就没有继续
用plys的了.
用plys的了.
p*t
7 楼
不太可能
蛊媾可以出个对应的Tuboid，免费，但是你洗澡的每个习惯都会被蛊媾记录，
然后给你发对应广告
【在 z**r 的大作中提到】
: 会不会出iPiglet？
蛊媾可以出个对应的Tuboid，免费，但是你洗澡的每个习惯都会被蛊媾记录，
然后给你发对应广告
【在 z**r 的大作中提到】
: 会不会出iPiglet？
T*t
8 楼
我就是用的BL21(DE3)pLysS strain，用0.4mM的IPTG诱导，表达4hr，蛋白产量很好。
T7 lysozyme是T7 RNA polymerase的natural inhibitor，它的表达是为了抑制在BL21(
DE3)里比较常见的leaky expression，但是这个表达量不至于抑制被IPTG诱导后的
expression。而且lysozyme不是蛋白酶，不可能降解你的蛋白。
你的蛋白如果用BL21(DE3)表达很好，说明你的蛋白对E.coli没有细胞毒性，你可以不
需要用BL21(DE3)pLysS来表达。
还有就是你看一下你用的是BL21系列还是BL21 Gold系列，这两个系列都有(DE3)和(DE3
)pLysS，但是我用BL21 Gold系列就碰到过表达不出来的问题。我说的BL21和BL21 Gold
都是Stratagene（现在的Agilent Genomics）的产品，不知道别的公司是不是也是这么
标识的。
T7 lysozyme是T7 RNA polymerase的natural inhibitor，它的表达是为了抑制在BL21(
DE3)里比较常见的leaky expression，但是这个表达量不至于抑制被IPTG诱导后的
expression。而且lysozyme不是蛋白酶，不可能降解你的蛋白。
你的蛋白如果用BL21(DE3)表达很好，说明你的蛋白对E.coli没有细胞毒性，你可以不
需要用BL21(DE3)pLysS来表达。
还有就是你看一下你用的是BL21系列还是BL21 Gold系列，这两个系列都有(DE3)和(DE3
)pLysS，但是我用BL21 Gold系列就碰到过表达不出来的问题。我说的BL21和BL21 Gold
都是Stratagene（现在的Agilent Genomics）的产品，不知道别的公司是不是也是这么
标识的。
b*l
9 楼
为什么我听了还真挺害怕？
【在 p****t 的大作中提到】
: 不太可能
: 蛊媾可以出个对应的Tuboid，免费，但是你洗澡的每个习惯都会被蛊媾记录，
: 然后给你发对应广告
【在 p****t 的大作中提到】
: 不太可能
: 蛊媾可以出个对应的Tuboid，免费，但是你洗澡的每个习惯都会被蛊媾记录，
: 然后给你发对应广告
s*n
10 楼
既然在BL21(DE3)表达很好的话，为什么还要试BL21(DE3)pLysS呢？有特殊原因？我的
经验是BL21(DE3)pLysS表达很多蛋白都不好。
经验是BL21(DE3)pLysS表达很多蛋白都不好。
p*t
11 楼
接下来还可能有Bedoid，你在床上干啥蛊媾都知道，之后给你各种广告：
打手枪用的手纸、洋娃娃；打炮用的套套、伟哥；SM用的皮鞭、蜡烛；
小孩用的尿布、奶瓶……
【在 b**l 的大作中提到】
: 为什么我听了还真挺害怕？
打手枪用的手纸、洋娃娃；打炮用的套套、伟哥；SM用的皮鞭、蜡烛；
小孩用的尿布、奶瓶……
【在 b**l 的大作中提到】
: 为什么我听了还真挺害怕？
g*y
12 楼
是的lysozyme 降解多糖的。。 不应该降解我的蛋白。 我表达好的是bl21 gold. 但是
我最后是必须用plysS这个菌株的因
为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的。 我现在想在没
有chlor resist 的LB培养这个菌株一
段时间直到它失去plysS这个vector. 不知道可行吗?
BL21(
DE3
Gold
【在 T**********t 的大作中提到】
: 我就是用的BL21(DE3)pLysS strain，用0.4mM的IPTG诱导，表达4hr，蛋白产量很好。
: T7 lysozyme是T7 RNA polymerase的natural inhibitor，它的表达是为了抑制在BL21(
: DE3)里比较常见的leaky expression，但是这个表达量不至于抑制被IPTG诱导后的
: expression。而且lysozyme不是蛋白酶，不可能降解你的蛋白。
: 你的蛋白如果用BL21(DE3)表达很好，说明你的蛋白对E.coli没有细胞毒性，你可以不
: 需要用BL21(DE3)pLysS来表达。
: 还有就是你看一下你用的是BL21系列还是BL21 Gold系列，这两个系列都有(DE3)和(DE3
: )pLysS，但是我用BL21 Gold系列就碰到过表达不出来的问题。我说的BL21和BL21 Gold
: 都是Stratagene（现在的Agilent Genomics）的产品，不知道别的公司是不是也是这么
: 标识的。
我最后是必须用plysS这个菌株的因
为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的。 我现在想在没
有chlor resist 的LB培养这个菌株一
段时间直到它失去plysS这个vector. 不知道可行吗?
BL21(
DE3
Gold
【在 T**********t 的大作中提到】
: 我就是用的BL21(DE3)pLysS strain，用0.4mM的IPTG诱导，表达4hr，蛋白产量很好。
: T7 lysozyme是T7 RNA polymerase的natural inhibitor，它的表达是为了抑制在BL21(
: DE3)里比较常见的leaky expression，但是这个表达量不至于抑制被IPTG诱导后的
: expression。而且lysozyme不是蛋白酶，不可能降解你的蛋白。
: 你的蛋白如果用BL21(DE3)表达很好，说明你的蛋白对E.coli没有细胞毒性，你可以不
: 需要用BL21(DE3)pLysS来表达。
: 还有就是你看一下你用的是BL21系列还是BL21 Gold系列，这两个系列都有(DE3)和(DE3
: )pLysS，但是我用BL21 Gold系列就碰到过表达不出来的问题。我说的BL21和BL21 Gold
: 都是Stratagene（现在的Agilent Genomics）的产品，不知道别的公司是不是也是这么
: 标识的。
m*d
13 楼
ipeepee, ipoopoo, iooxx, ...
【在 p****t 的大作中提到】
: 灌水排水必须经过iTune控制
: 想洗泡泡浴什么的，可以在iTune BathStore订购
: 水温不可自行设定，这是为了更好的用户体验，免得用户太弱智或者被黑客
: 病毒控制导致烫伤
【在 p****t 的大作中提到】
: 灌水排水必须经过iTune控制
: 想洗泡泡浴什么的，可以在iTune BathStore订购
: 水温不可自行设定，这是为了更好的用户体验，免得用户太弱智或者被黑客
: 病毒控制导致烫伤
g*y
14 楼
我最后是必须用plysS这个菌株的因
为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的
【在 s********n 的大作中提到】
: 既然在BL21(DE3)表达很好的话，为什么还要试BL21(DE3)pLysS呢？有特殊原因？我的
: 经验是BL21(DE3)pLysS表达很多蛋白都不好。
为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的
【在 s********n 的大作中提到】
: 既然在BL21(DE3)表达很好的话，为什么还要试BL21(DE3)pLysS呢？有特殊原因？我的
: 经验是BL21(DE3)pLysS表达很多蛋白都不好。
k*o
15 楼
这个现象从来没见过,留个名等牛人解释
s*s
16 楼
多试几个克隆？
【在 g*****y 的大作中提到】
: 我的蛋白bl21(DE3)的细胞里0.5mM IPTG induction 表达很好。后来转到BL21(DE3
: pLysS)里 加IPTG却不表达我试过
: 0.1-2mM的IPTG. 2hr, 4hr 和 o/n. 2mM IPTG O/N 好像有一点点表达。。 都是同样
: 的蛋白同样的hosting vector. 现
: 在怀疑是不是BL21(DE3 pLysS)里表达的lysozyme 把我的蛋白降解了? 不太可能啊！
: 大家有没有遇到类似的情况呢？
【在 g*****y 的大作中提到】
: 我的蛋白bl21(DE3)的细胞里0.5mM IPTG induction 表达很好。后来转到BL21(DE3
: pLysS)里 加IPTG却不表达我试过
: 0.1-2mM的IPTG. 2hr, 4hr 和 o/n. 2mM IPTG O/N 好像有一点点表达。。 都是同样
: 的蛋白同样的hosting vector. 现
: 在怀疑是不是BL21(DE3 pLysS)里表达的lysozyme 把我的蛋白降解了? 不太可能啊！
: 大家有没有遇到类似的情况呢？
g*y
17 楼
至今挑过2个。 都没有表达。。 打算在做一次transformation试试。
【在 s******s 的大作中提到】
: 多试几个克隆？
【在 s******s 的大作中提到】
: 多试几个克隆？
n*m
18 楼
You can try low Temperature. But I think Cam is necessary for the induction.
T*t
19 楼
对，还有一个我忘了说，就是检查一下培养箱温度。
我原先用BL21-Gold的DE3 pLysS表达出现问题troubleshooting的时候，后来发现就是
培养箱温度不对，设定37度，实际到了39度。这时候用BL21的DE3 pLysS表达就没有问
题，但是BL21-Gold的菌液几乎完全被lyse掉了。所以后来虽然我把培养箱温度重新设
定好了，还是不敢再用BL21-Gold的菌株了。
induction.
【在 n*********m 的大作中提到】
: You can try low Temperature. But I think Cam is necessary for the induction.
我原先用BL21-Gold的DE3 pLysS表达出现问题troubleshooting的时候，后来发现就是
培养箱温度不对，设定37度，实际到了39度。这时候用BL21的DE3 pLysS表达就没有问
题，但是BL21-Gold的菌液几乎完全被lyse掉了。所以后来虽然我把培养箱温度重新设
定好了，还是不敢再用BL21-Gold的菌株了。
induction.
【在 n*********m 的大作中提到】
: You can try low Temperature. But I think Cam is necessary for the induction.
n*w
20 楼
正在做蛋白表达，用的是rosetta-gami 2 DE3 plyss, 这里各种trouble shooting，我
喜欢～
喜欢～
s*n
21 楼
你是指你用的这个带有pLysS的菌株是别人engineer过的，不是commercial的？
如果是这样的话他们应该会有原始不带pLysS的菌株，问问看。
如果实在不行的话，可以试试将这个菌株在不含Cm的培养基转接几次，然后划线在不含
Cm的平板，挑取单clone再分别划线于带有Cm和不含Cm的平板，这样估计你能找到丢失
pLysS质粒的菌株。
【在 g*****y 的大作中提到】
: 我最后是必须用plysS这个菌株的因
: 为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的
如果是这样的话他们应该会有原始不带pLysS的菌株，问问看。
如果实在不行的话，可以试试将这个菌株在不含Cm的培养基转接几次，然后划线在不含
Cm的平板，挑取单clone再分别划线于带有Cm和不含Cm的平板，这样估计你能找到丢失
pLysS质粒的菌株。
【在 g*****y 的大作中提到】
: 我最后是必须用plysS这个菌株的因
: 为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的
g*y
22 楼
不是不是， 是他们在novogen买了plysS的细胞然后又加了一种特性。我也是这么想的
。希望不要花太多时间。 还有你知
道那里有卖那种可以把一个板子上的colony复制到另一个板子上的那种film吗？ 我想
用这个方法可能筛选快点。
【在 s********n 的大作中提到】
: 你是指你用的这个带有pLysS的菌株是别人engineer过的，不是commercial的？
: 如果是这样的话他们应该会有原始不带pLysS的菌株，问问看。
: 如果实在不行的话，可以试试将这个菌株在不含Cm的培养基转接几次，然后划线在不含
: Cm的平板，挑取单clone再分别划线于带有Cm和不含Cm的平板，这样估计你能找到丢失
: pLysS质粒的菌株。
。希望不要花太多时间。 还有你知
道那里有卖那种可以把一个板子上的colony复制到另一个板子上的那种film吗？ 我想
用这个方法可能筛选快点。
【在 s********n 的大作中提到】
: 你是指你用的这个带有pLysS的菌株是别人engineer过的，不是commercial的？
: 如果是这样的话他们应该会有原始不带pLysS的菌株，问问看。
: 如果实在不行的话，可以试试将这个菌株在不含Cm的培养基转接几次，然后划线在不含
: Cm的平板，挑取单clone再分别划线于带有Cm和不含Cm的平板，这样估计你能找到丢失
: pLysS质粒的菌株。
w*t
23 楼
我们做replica plating 的模具是让学校工厂做的，不过市面上也有不少公司卖的，我
随便找了两家你看看：
http://genhunter.com/products/others/
http://www.cardinal.com/us/en/distributedproducts/ASP/D2134-3.a
随便找了两家你看看：
http://genhunter.com/products/others/
http://www.cardinal.com/us/en/distributedproducts/ASP/D2134-3.a
g*y
24 楼
万分感谢！
【在 w**t 的大作中提到】
: 我们做replica plating 的模具是让学校工厂做的，不过市面上也有不少公司卖的，我
: 随便找了两家你看看：
: http://genhunter.com/products/others/
: http://www.cardinal.com/us/en/distributedproducts/ASP/D2134-3.a
【在 w**t 的大作中提到】
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h*0
25 楼
我觉得很多时候不表达是因为菌种污染了
不是BL21或者菌里没有质粒
只要是含表达载体的BL21，肯定可以通过诱导表达的
不是BL21或者菌里没有质粒
只要是含表达载体的BL21，肯定可以通过诱导表达的
T*t
26 楼
有一个问题，万一你的蛋白不表达不是因为pLysS，而是因为这个另一个特别的属性呢
？如果是这样，那你就算把pLysS质粒想办法剔除了也还是一样解决不了问题啊。。。
【在 g*****y 的大作中提到】
: 我最后是必须用plysS这个菌株的因
: 为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的
？如果是这样，那你就算把pLysS质粒想办法剔除了也还是一样解决不了问题啊。。。
【在 g*****y 的大作中提到】
: 我最后是必须用plysS这个菌株的因
: 为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的
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