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confocal laser bleach的depth如何计算

confocal laser bleach的depth如何计算# Biology - 生物学

G*J2011-03-25 07:03

1 楼

母亲入关I-97给的是超过180天，也就是说7月30号入境，I-94的最后截止是明年1月29
号。那么如果给母亲改成明年1月27号回国的机票，是否可以？虽然没有超过I-94上的
日期，但是具体算出来是超过180天的。不知道大家是怎么算这个日期的？还是说必须
要一天一天的算那个180天？谢谢。

A*r2011-03-25 07:03

2 楼

一直在潜水，这次忍不住冒个泡。
谢谢刚刚大师。
还得说一句，这个版是整个买买提上最和谐的版了。

r*l2011-03-25 07:03

3 楼

各位有$114 Kindle的注意查收了。

b*s2011-03-25 07:03

4 楼

2D bleach size 可以直观看见，但是怎么知道z轴方向被bleach多少厚度?
confocal is Leica SP2
谢谢.

t*g2011-03-25 07:03

5 楼

他们是作为6个月给的，没有问题

L*12011-03-25 07:03

6 楼

刚刚那是没的说的。

a*82011-03-25 07:03

7 楼

Thanks for the heads-up. Just checked, got it too :)

s*y2011-03-25 07:03

8 楼

一般来说，就是那个理论上的光深度(optical section thickness)，在你所用的显微镜
软件里应该有根据镜头参数换算出来的估计值

【在 b******s 的大作中提到】

: 2D bleach size 可以直观看见，但是怎么知道z轴方向被bleach多少厚度?
: confocal is Leica SP2
: 谢谢.

t*s2011-03-25 07:03

9 楼

看置顶的常见问题，从来没180天这个说法。

g*o2011-03-25 07:03

10 楼

索滴俺一阵脸红心跳，哈哈

【在 A********r 的大作中提到】

: 一直在潜水，这次忍不住冒个泡。
: 谢谢刚刚大师。
: 还得说一句，这个版是整个买买提上最和谐的版了。

b*s2011-03-25 07:03

11 楼

多谢sunny。
confocal有俩pinholes。bleach在axis上的厚度应该只与入射光的pinhole有关。而且
一般软件里给的估计值是基于point spread function，入射光波长488nm的时候，axis
上估算值大概是500nm。但是在一个给定的ROI内，scanned的points很多，这样最后在
axis上被漂白的区域远远不止500nm。不知道这样理解对不对？
微镜

G*J2011-03-25 07:03

12 楼

谢谢各位。

i*t2011-03-25 07:03

13 楼

嘿嘿！

【在 g*********o 的大作中提到】

: 索滴俺一阵脸红心跳，哈哈

h*v2011-03-25 07:03

14 楼

To my understanding, pinhole is just before PMT detector, and can't
exclude anything from the laser. The laser beam will penetrate the whole
sample...Hope someone can clarify that.

【在 b******s 的大作中提到】

: 2D bleach size 可以直观看见，但是怎么知道z轴方向被bleach多少厚度?
: confocal is Leica SP2
: 谢谢.

A*r2011-03-25 07:03

15 楼

刚刚大师的马甲？

【在 g*********o 的大作中提到】

: 索滴俺一阵脸红心跳，哈哈

b*s2011-03-25 07:03

16 楼

扫描confocal有两个pinhole
入射光的pinhole可以使得入射光成为一个point light source，这样即使penetrate进
入tissue，根据airy disc图，focal plane之外的illumination越远越可以忽略不计。
optical section跟俩个pinhole都有关系，但是我觉得bleaching effect和
detector前的pinhole没有关系。

【在 h*******v 的大作中提到】

: To my understanding, pinhole is just before PMT detector, and can't
: exclude anything from the laser. The laser beam will penetrate the whole
: sample...Hope someone can clarify that.

w*r2011-03-25 07:03

17 楼

粉丝吧，应该叫刚丝，赫赫

【在 A********r 的大作中提到】

: 刚刚大师的马甲？

s*j2011-03-25 07:03

18 楼

就一个pinhole. 激光直接fiber couple进入scanhead.
这个不能看airy disk的图, 得看公司提供的scan-head的光路图.

【在 b******s 的大作中提到】

: 扫描confocal有两个pinhole
: 入射光的pinhole可以使得入射光成为一个point light source，这样即使penetrate进
: 入tissue，根据airy disc图，focal plane之外的illumination越远越可以忽略不计。
: optical section跟俩个pinhole都有关系，但是我觉得bleaching effect和
: detector前的pinhole没有关系。

c*p2011-03-25 07:03

19 楼

没错，著名钢丝

【在 w********r 的大作中提到】

: 粉丝吧，应该叫刚丝，赫赫

s*j2011-03-25 07:03

20 楼

扫个3D的stack来算.
bleach的时候发生什么事鬼才知道. 不能靠猜.

【在 b******s 的大作中提到】

: 2D bleach size 可以直观看见，但是怎么知道z轴方向被bleach多少厚度?
: confocal is Leica SP2
: 谢谢.

g*o2011-03-25 07:03

21 楼

错了，曾经的首席刚丝，让位给浮云了，现在浮云闭关了，我又可以坐回去了，哈哈

【在 c***p 的大作中提到】

: 没错，著名钢丝

b*s2011-03-25 07:03

22 楼

能具体讲讲是怎么做的吗？

【在 s*****j 的大作中提到】

: 扫个3D的stack来算.
: bleach的时候发生什么事鬼才知道. 不能靠猜.

A*r2011-03-25 07:03

23 楼

Mark 了

s*j2011-03-25 07:03

24 楼

confocal 不就是那来扫三维的吗? bleach完以后, 扫一个, 你就知道在z方向bleach
了多少了.

【在 b******s 的大作中提到】

: 能具体讲讲是怎么做的吗？

b*s2011-03-25 07:03

25 楼

明白，xzy scan是不是也可以？
除了empirically测量，有没有理论模型可以比较准确估算厚度？

bleach

【在 s*****j 的大作中提到】

: confocal 不就是那来扫三维的吗? bleach完以后, 扫一个, 你就知道在z方向bleach
: 了多少了.

b*l2011-03-25 07:03

26 楼

会不会 z 方向上的 resolution 太低？

【在 s*****j 的大作中提到】

: confocal 不就是那来扫三维的吗? bleach完以后, 扫一个, 你就知道在z方向bleach
: 了多少了.

Z*92011-03-25 07:03

27 楼

pinhole是PMT前面的一个小孔，用来屏蔽样本上out focus的光，与laser对样本的
bleach没有任何关系
laser在不同的位置的强度可以通过公式计算出来，bleach的速度与laser的强度相关，
理论上是可以计算的
但是由于不同的样本对光的穿透性不同，以及样本对光的散射，导致无法精确计算在样
本上不同位置的光强度
如果你的东西bleach特别快，用3d扫描不是一个很可行的方法
当你在扫描某一个layer的过程中，你同时bleach所有layer的样本

【在 b******s 的大作中提到】

: 明白，xzy scan是不是也可以？
: 除了empirically测量，有没有理论模型可以比较准确估算厚度？
:
: bleach

s*j2011-03-25 07:03

28 楼

不存在什么模型的问题. point scan confocal的光路是个cone structure. 焦点处光
强最大, 嚗光时间短. 其他地方光强小, 嚗光时间长. 那些地方会bleach点是算不出来
的.
bleach的原理是什么现在也是糊里糊涂的. invitrogen的所谓anti-bleach agent有没
有用全靠运气了.
leica SP2 如果你有piezo z-stage, 就扫一个xyz/xzy很快的.

【在 b******s 的大作中提到】

: 明白，xzy scan是不是也可以？
: 除了empirically测量，有没有理论模型可以比较准确估算厚度？
:
: bleach