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问问直接用PCR product+ T7 promoter invitro transcript做探针的同学

问问直接用PCR product+ T7 promoter invitro transcript做探针的同学# Biology - 生物学

x*n2011-04-24 07:04

1 楼

各位faculty,小弟最近在找博后,有一问题想请教各位faculty. 最近在国内拿了一个小
项目,10万块人民币,不知道是否需要把这个基金写到我的简历里去. 现在担心写进去之
后会出现反效果,害怕老板会认为我不务正业,老板们的心思很难把握.所以在这里请教
一下各位有经验的老师们,想听听你们的意见,写还是不写. 另外,我这个专业目前
position很少,所以在想尽办法polish我的简历,谢谢各位老师了.

m*52011-04-24 07:04

2 楼

在agrose胶上，RNA product看起来多大？
我在胶上跑出来都是和我的DNA templete同样大小的东西，几乎重合在一起，似乎不大
make sense?

h*u2011-04-24 07:04

3 楼

我觉得可以写，我也是博后，我老板让我帮他写了好几个proposal,现在funding 不好
找，你有经验，应该是个加分点。如果你能把这钱带到新老板那里，他应该更高兴吧。
我知道像 mit 之类的牛校，有些postdoc都是自己带钱来的，不需要老板出钱。个人拙
见，看看别人的意见吧。

z*62011-04-24 07:04

4 楼

是跑的rna gel吧？

a*o2011-04-24 07:04

5 楼

搭车问在这里工作的，也能申请国内的项目吗？

a*o2011-04-24 07:04

6 楼

to check RNA, you should run a denature gel, either agarose+MOPS or
polyacralimide+urea. If your RNA intends to form no 2nd structure, it may
run at similar position as its DNA template. otherwise something is wrong.
Single strand DNA or RNA gives very low signal compared to the same size ds
DNA if you stain with EtBr.

m*e2011-04-24 07:04

7 楼

Even if you are still a doctoral student, consider yourself as an
independent researcher! You work with your advisor, not for him/her. you do
all work centered around YOUR OWN career!

【在 x*******n 的大作中提到】

: 各位faculty,小弟最近在找博后,有一问题想请教各位faculty. 最近在国内拿了一个小
: 项目,10万块人民币,不知道是否需要把这个基金写到我的简历里去. 现在担心写进去之
: 后会出现反效果,害怕老板会认为我不务正业,老板们的心思很难把握.所以在这里请教
: 一下各位有经验的老师们,想听听你们的意见,写还是不写. 另外,我这个专业目前
: position很少,所以在想尽办法polish我的简历,谢谢各位老师了.

m*n2011-04-24 07:04

8 楼

for fast examination, you could run your RNA samples on 2% TBE agrose gel.
for accurancy, you want to run them on denaturing PAGE gel.

【在 m******5 的大作中提到】

: 在agrose胶上，RNA product看起来多大？
: 我在胶上跑出来都是和我的DNA templete同样大小的东西，几乎重合在一起，似乎不大
: make sense?

x*n2011-04-24 07:04

9 楼

现在大部分老板不会这么想吧,他们只是想压榨博后,所以有些担心.

do

【在 m*******e 的大作中提到】

: Even if you are still a doctoral student, consider yourself as an
: independent researcher! You work with your advisor, not for him/her. you do
: all work centered around YOUR OWN career!

m*n2011-04-24 07:04

10 楼

if you are more comfortable with the old-school RNA gel,
check details at http://www.ambion.com/techlib/append/supp/rna_gel.html
I have used this before, and it worked very well.
good luck.

【在 m******5 的大作中提到】

: 在agrose胶上，RNA product看起来多大？
: 我在胶上跑出来都是和我的DNA templete同样大小的东西，几乎重合在一起，似乎不大
: make sense?

x*n2011-04-24 07:04

11 楼

就那么点小钱,应该看不上,发现现在找博后也都靠关系,不把自己弄强点真的搞不过白
人.

【在 h****u 的大作中提到】

: 我觉得可以写，我也是博后，我老板让我帮他写了好几个proposal,现在funding 不好
: 找，你有经验，应该是个加分点。如果你能把这钱带到新老板那里，他应该更高兴吧。
: 我知道像 mit 之类的牛校，有些postdoc都是自己带钱来的，不需要老板出钱。个人拙
: 见，看看别人的意见吧。

m*n2011-04-24 07:04

12 楼

if you are more comfortable with the old school agrose gel,
check for details at http://www.ambion.com/techlib/append/supp/rna_gel.html
I have used this protocol before, and it worked very well.
good luck.

【在 m******5 的大作中提到】

: 在agrose胶上，RNA product看起来多大？
: 我在胶上跑出来都是和我的DNA templete同样大小的东西，几乎重合在一起，似乎不大
: make sense?

m*e2011-04-24 07:04

13 楼

It is why it is even more important for you to work for your own career, not
for your boss's. please believe me on this one. you have to work for your
own interest. Your boss won't feel obligated or responsible if one day you
ruin your own career. He/she may simply kick you out.
this is true for phd students too. phd students are independent researchers,
not pure students.

【在 x*******n 的大作中提到】

: 现在大部分老板不会这么想吧,他们只是想压榨博后,所以有些担心.
:
: do

m*52011-04-24 07:04

14 楼

I am still wondering why it runs around the similar position as its DNA
template. RNA product is ssRNA while the DNA templete is dsDNA…………

ds

【在 a****o 的大作中提到】

: to check RNA, you should run a denature gel, either agarose+MOPS or
: polyacralimide+urea. If your RNA intends to form no 2nd structure, it may
: run at similar position as its DNA template. otherwise something is wrong.
: Single strand DNA or RNA gives very low signal compared to the same size ds
: DNA if you stain with EtBr.

m*n2011-04-24 07:04

15 楼

Your RNA forms secondary structure. that's why the guy upstairs told you to
run it on a DENATURE gel to kill the secondary structure.....

【在 m******5 的大作中提到】

: I am still wondering why it runs around the similar position as its DNA
: template. RNA product is ssRNA while the DNA templete is dsDNA…………
:
: ds

f*e2011-04-24 07:04

16 楼

实在是要跑一般的胶的话，要在 formamide 里面 heat denature，然后snap cool 到
冰上，马上跑胶。不过里面 DNA 会出 double band。