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delete 一个蛋白c端5个氨基酸，分子量反而变大了？

delete 一个蛋白c端5个氨基酸，分子量反而变大了？# Biology - 生物学

c*m2011-05-11 07:05

1 楼

【以下文字转载自 Returnee 讨论区】
发信人: stuart (抽取命运一张), 信区: Returnee
标题: 程序员要海龟其实还是很惨的
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Feb 7 18:55:27 2010, 美东)
大多数都出国读了个书,有的还读了不少年,然后在美国大公司混了3,4年,依然是entry-
level程序员,或者刚刚摆脱entry-level,其实已经本科毕业5-10年了...
国内的本科同学,没保上研被迫工作的,好几年前就已经当领班甚至项目负责人了,手下
管好几十口子人呢,薪水也是好几十万.
真要是回国给人家提鞋都不配,不要提和人家比工资了.
你张口要30-50万还觉得不好意思,人家国内同学都不把这个当回事...

i*y2011-05-11 07:05

2 楼

音超莫龙丹"十万毫升泪水"有唱错词。“谁视我为宝贝”被唱成了“谁视为我宝贝”。
我发现高晓松好像特别喜欢这种学生模样的年轻女歌手。唱得不错。

a*12011-05-11 07:05

3 楼

这个是很多评书的特色，尤其是单田芳的。
啪！一拍桌子！然后说的很精彩的时候，突然来一句，就在这时，楼道里响起了脚步声
。。。
且听下回分解！啪！
然后就会给人遐想，以为是什么大人物或者牛逼人物再或者是杀手以及刺客之类的来了
，结果到了下回分解的时候，是店小二端着茶水上来了。。。
还有一种隐藏身份，比如月黑杀人夜，嗖嗖两道寒光闪过！一白衣少年翩然而至，黑衣
人应声倒地，面露痛苦深色，艰难的惊愕道：怎么是你？
结果也不说是谁，卖个关子，半天给你揭晓谜底了，有时候谜底也会让人失望。
再有就是恐怖悬疑法，说的很吓人跟鬼故事似的，比如客栈的墙上出现鬼影，最后原来
是对面房顶有人故意投影吓人，还有用反光镜制造这些恐怖灵异事件的，但是最后明白
是怎么回事了就一点也不吓人了，都是科学道理能解释通的，而且是人为的。
有时候听评书，过瘾的不只是剧情，还有那个声音，单田芳的这种范儿，听着就觉得很
带劲，有时候也会一惊一乍的，但是挺有意思，现在听评书大都是在开车的时候，闲的
没事就放评书听。

z*y2011-05-11 07:05

4 楼

how to do drag and drop?
between two arrays
visualize them (e.g., using TableView)
then want to drag one item from one array and
drop to the other array
Thank you for your suggestion.
(no need for alternatives: check-box, click-to-add-button...)

a*72011-05-11 07:05

5 楼

已经在几个不同的载体里试过，看到的结果都差不多，就是在western上看到的band比
野生型稍高一些，怎么回事？

s*s2011-05-11 07:05

6 楼

猪曼玉，不累哈，到处转

entry-

【在 c****m 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Returnee 讨论区】
: 发信人: stuart (抽取命运一张), 信区: Returnee
: 标题: 程序员要海龟其实还是很惨的
: 发信站: BBS 未名空间站 (Sun Feb 7 18:55:27 2010, 美东)
: 大多数都出国读了个书,有的还读了不少年,然后在美国大公司混了3,4年,依然是entry-
: level程序员,或者刚刚摆脱entry-level,其实已经本科毕业5-10年了...
: 国内的本科同学,没保上研被迫工作的,好几年前就已经当领班甚至项目负责人了,手下
: 管好几十口子人呢,薪水也是好几十万.
: 真要是回国给人家提鞋都不配,不要提和人家比工资了.
: 你张口要30-50万还觉得不好意思,人家国内同学都不把这个当回事...

c*52011-05-11 07:05

7 楼

这些都被美剧学会了

i*o2011-05-11 07:05

8 楼

Use two sections, each for one array, enter edit mode to drag and drop.

【在 z*y 的大作中提到】

: how to do drag and drop?
: between two arrays
: visualize them (e.g., using TableView)
: then want to drag one item from one array and
: drop to the other array
: Thank you for your suggestion.
: (no need for alternatives: check-box, click-to-add-button...)

I*y2011-05-11 07:05

9 楼

稍高一些? 稍高 by how much (percentage wise)?

【在 a*********7 的大作中提到】

: 已经在几个不同的载体里试过，看到的结果都差不多，就是在western上看到的band比
: 野生型稍高一些，怎么回事？

l*y2011-05-11 07:05

10 楼

哦，原来国内本科生混个5678年就有几十万年薪了，原来中国钱这么好赚。。。

s*y2011-05-11 07:05

11 楼

怎么这两天怎么多人问类似的问题？：）
最可能的其实就是蛋白结合SDS的能力给改变了，所以跑起来快慢有变化。

【在 a*********7 的大作中提到】

: 已经在几个不同的载体里试过，看到的结果都差不多，就是在western上看到的band比
: 野生型稍高一些，怎么回事？

b*e2011-05-11 07:05

12 楼

傻逼, 你丫以为国内都是清华北大毕业的, 然后就从了搜狐百度了?

entry-

【在 c****m 的大作中提到】

b*n2011-05-11 07:05

13 楼

会不会都是买来的胶，然后最近公司的胶出了问题？比如说SDS量不够

【在 s******y 的大作中提到】

: 怎么这两天怎么多人问类似的问题？：）
: 最可能的其实就是蛋白结合SDS的能力给改变了，所以跑起来快慢有变化。

I*y2011-05-11 07:05

14 楼

检查整个plasmid的sequencing results了？确信没有 fusion sequence by accident?

【在 a*********7 的大作中提到】

: 已经在几个不同的载体里试过，看到的结果都差不多，就是在western上看到的band比
: 野生型稍高一些，怎么回事？

s*y2011-05-11 07:05

15 楼

应该不是。
胶里的SDS一般都是大大过量的。
要确认一下也很容易，把几个不同mutant 放在同一个胶里跑就知道了

【在 b******n 的大作中提到】

: 会不会都是买来的胶，然后最近公司的胶出了问题？比如说SDS量不够

T*t2011-05-11 07:05

16 楼

是啊，怎么就不做个质谱确认一下分子量先呢？现在质谱应该挺普及的了吧，一般学校
只要有core facility的都应该有。

【在 s******y 的大作中提到】

: 怎么这两天怎么多人问类似的问题？：）
: 最可能的其实就是蛋白结合SDS的能力给改变了，所以跑起来快慢有变化。

s*f2011-05-11 07:05

17 楼

It could oligomerize after deletion so knowing it is bigger by how much is
important.
Mass spect seems a nice way to confirm you have the right protein size.
Some proteins run abnormally on SDS PAGE, that is, showing up at positions
significantly different from expected.
Is it possible to have different post-translational modification after the
deletion?
What is the protein? Why are you deleting these 5 aa?

a*72011-05-11 07:05

18 楼

谢谢大家的帮助，我还有一些信息：
大概就大１，２个KD, 从western blot 上看. 我觉的不可能是stop codon 的问题，因
为我已经试过不同的载体了，每个载体都出现一样的结果. 而且我试过只delete最末
端２个aa, 结果在western blot 上看和野生型没区别。为什么多delete 3个就大了呢
，我个人觉的可能是deletion 导致结构变化，然后出现了不同的posttranslational
modification. 大家觉的有没有道理？