siRNA 和 shRNA knockdown 初级问题# Biology - 生物学
P*Y
1 楼
为什恶魔我们律师说，不管双方是否都有工作，只要是一起 file的，primary
applicant 就需要填i134表格
applicant 就需要填i134表格
s*d
2 楼
想就带个Ipad去国内出差。但是国内酒店一般只有有线上网。好像没有看见Ipad可以用
类似Mac Air用的那种Adapter,只有看见有人用Mini travel router自己做个wifi的，
请问有没有人知道还有其他比较简单的方法的吗？先谢过！
类似Mac Air用的那种Adapter,只有看见有人用Mini travel router自己做个wifi的，
请问有没有人知道还有其他比较简单的方法的吗？先谢过！
m*m
3 楼
刚刚接触细胞生物学，没做过knockdown，这里问两个关于mammalian细胞knockdown的
初级问题，请大家不要笑话。
1） 准备在raw cell line 中 knockdown一个kinase，初步看看对下游cytokine的表达
有没有影响，看文献有人用Dharmacon的siRNA pool转化，有人用lentivirus shRNA，
请问哪种方法更简单？
2） 如果直接转化siRNA，等3－4天以后，细胞都分裂了好几代了，是不是每隔细胞内
的siRNA的量减少很多，这样是不是knockdown的效果就不好了？
3） 为什么siRNA可以直接转化knockdown基因表达，但是好像很少人直接转化shRNA去
knockdown的？为什么shRNA都要科隆在plasmid载体或者virus载体内呢？直接转化难道
不能被dicer酶加工变成siRNA吗？（因为从文献上查到了一个shRNA的序列，如果能直
接合成然后象siRNA那样转化，岂不是能剩了买siRNA的钱，又剩去了科隆shRNA到载体
的时间）。
比较初级的问题，请别笑话！
谢谢！
初级问题，请大家不要笑话。
1） 准备在raw cell line 中 knockdown一个kinase，初步看看对下游cytokine的表达
有没有影响，看文献有人用Dharmacon的siRNA pool转化，有人用lentivirus shRNA，
请问哪种方法更简单？
2） 如果直接转化siRNA，等3－4天以后，细胞都分裂了好几代了，是不是每隔细胞内
的siRNA的量减少很多，这样是不是knockdown的效果就不好了？
3） 为什么siRNA可以直接转化knockdown基因表达，但是好像很少人直接转化shRNA去
knockdown的？为什么shRNA都要科隆在plasmid载体或者virus载体内呢？直接转化难道
不能被dicer酶加工变成siRNA吗？（因为从文献上查到了一个shRNA的序列，如果能直
接合成然后象siRNA那样转化，岂不是能剩了买siRNA的钱，又剩去了科隆shRNA到载体
的时间）。
比较初级的问题，请别笑话！
谢谢！
n*s
4 楼
Yeah? where in 485 instruction can you find the rule? But he is your lawyer,
so obey him............
so obey him............
s*o
5 楼
"但是国内酒店一般只有有线上网"
你多少年没有回过国了？
你多少年没有回过国了？
o*4
6 楼
siRNA是瞬时转染，只能维持几天，对于一般细胞来说，比shRNA lentivirus简单好用。
shRNA lentivirus主要是为了稳定转染，建立knockdown的细胞系，需要构建质粒、做
病毒，然后infection，麻烦些。
shRNA lentivirus主要是为了稳定转染，建立knockdown的细胞系，需要构建质粒、做
病毒，然后infection，麻烦些。
a*x
7 楼
叫他去死
【在 P****Y 的大作中提到】
: 为什恶魔我们律师说，不管双方是否都有工作，只要是一起 file的，primary
: applicant 就需要填i134表格
【在 P****Y 的大作中提到】
: 为什恶魔我们律师说，不管双方是否都有工作，只要是一起 file的，primary
: applicant 就需要填i134表格
s*d
8 楼
每年回去2-3次吧，最近一次去年11月。好像住过的酒店里没有一家有WIFI的，很奇怪
。我一般住的都是五星的。
【在 s****o 的大作中提到】
: "但是国内酒店一般只有有线上网"
: 你多少年没有回过国了？
。我一般住的都是五星的。
【在 s****o 的大作中提到】
: "但是国内酒店一般只有有线上网"
: 你多少年没有回过国了？
n*2
9 楼
I have the exact same question as LZ asked. Why can't we just use shRNA to
do transient transfection to knock down a gene? Once the shRNA constructs
get into cells, small hairpin RNA will be transcripted, which will be
further chopped by Dicer into siRNA. Thereafter, shRNA shares the same
mechanism for knocking down certain gene as siRNA does. What's the reason
to make stable transgenic cell line?
do transient transfection to knock down a gene? Once the shRNA constructs
get into cells, small hairpin RNA will be transcripted, which will be
further chopped by Dicer into siRNA. Thereafter, shRNA shares the same
mechanism for knocking down certain gene as siRNA does. What's the reason
to make stable transgenic cell line?
I*8
10 楼
lower than PW ?
【在 P****Y 的大作中提到】
: 为什恶魔我们律师说，不管双方是否都有工作，只要是一起 file的，primary
: applicant 就需要填i134表格
【在 P****Y 的大作中提到】
: 为什恶魔我们律师说，不管双方是否都有工作，只要是一起 file的，primary
: applicant 就需要填i134表格
C*h
11 楼
1. ShRNA needs time (24-48 hours) to get maximum expression, while siRNA
can function immediately after transfection.
2. For a lot of cell lines, transfection efficiency of shRNA-plasmids
(large size) is low, while that of siRNAs is high because of the small size.
to
【在 n******2 的大作中提到】
: I have the exact same question as LZ asked. Why can't we just use shRNA to
: do transient transfection to knock down a gene? Once the shRNA constructs
: get into cells, small hairpin RNA will be transcripted, which will be
: further chopped by Dicer into siRNA. Thereafter, shRNA shares the same
: mechanism for knocking down certain gene as siRNA does. What's the reason
: to make stable transgenic cell line?
can function immediately after transfection.
2. For a lot of cell lines, transfection efficiency of shRNA-plasmids
(large size) is low, while that of siRNAs is high because of the small size.
to
【在 n******2 的大作中提到】
: I have the exact same question as LZ asked. Why can't we just use shRNA to
: do transient transfection to knock down a gene? Once the shRNA constructs
: get into cells, small hairpin RNA will be transcripted, which will be
: further chopped by Dicer into siRNA. Thereafter, shRNA shares the same
: mechanism for knocking down certain gene as siRNA does. What's the reason
: to make stable transgenic cell line?
P*Y
12 楼
什么意思？
【在 I****8 的大作中提到】
: lower than PW ?
【在 I****8 的大作中提到】
: lower than PW ?
m*7
13 楼
For question #3: the purpose of cloning shRNA into lentiviral vector is to
produce virus particles, and in principle, every single target cell can be
infected. If you use shRNA plasmid directly, you can hardly get 100%
transfection efficiency.
produce virus particles, and in principle, every single target cell can be
infected. If you use shRNA plasmid directly, you can hardly get 100%
transfection efficiency.
I*8
14 楼
prevailing wage
134不是经济担保吗？ 一般收入不够才需要，否则参考3楼。
【在 P****Y 的大作中提到】
: 什么意思？
134不是经济担保吗？ 一般收入不够才需要，否则参考3楼。
【在 P****Y 的大作中提到】
: 什么意思？
Z*g
15 楼
1. 没有直接合成shRNA转染的吧.shRNA比siRNA长,又还需要dicer处理,又不能解决长时
间效力的问题,吃饱了撑着合成shRNA啊.
2. 所以shRNA都是转化成DNA的形式,然后克隆到载体上.用载体直接转染后,若不筛选稳
定克隆则仍然无法解决长时间效力的问题.当然病毒好一些.
间效力的问题,吃饱了撑着合成shRNA啊.
2. 所以shRNA都是转化成DNA的形式,然后克隆到载体上.用载体直接转染后,若不筛选稳
定克隆则仍然无法解决长时间效力的问题.当然病毒好一些.
a*k
16 楼
transfection of shRNA will induce interferon response
【在 m******m 的大作中提到】
: 刚刚接触细胞生物学，没做过knockdown，这里问两个关于mammalian细胞knockdown的
: 初级问题，请大家不要笑话。
: 1） 准备在raw cell line 中 knockdown一个kinase，初步看看对下游cytokine的表达
: 有没有影响，看文献有人用Dharmacon的siRNA pool转化，有人用lentivirus shRNA，
: 请问哪种方法更简单？
: 2） 如果直接转化siRNA，等3－4天以后，细胞都分裂了好几代了，是不是每隔细胞内
: 的siRNA的量减少很多，这样是不是knockdown的效果就不好了？
: 3） 为什么siRNA可以直接转化knockdown基因表达，但是好像很少人直接转化shRNA去
: knockdown的？为什么shRNA都要科隆在plasmid载体或者virus载体内呢？直接转化难道
: 不能被dicer酶加工变成siRNA吗？（因为从文献上查到了一个shRNA的序列，如果能直
【在 m******m 的大作中提到】
: 刚刚接触细胞生物学，没做过knockdown，这里问两个关于mammalian细胞knockdown的
: 初级问题，请大家不要笑话。
: 1） 准备在raw cell line 中 knockdown一个kinase，初步看看对下游cytokine的表达
: 有没有影响，看文献有人用Dharmacon的siRNA pool转化，有人用lentivirus shRNA，
: 请问哪种方法更简单？
: 2） 如果直接转化siRNA，等3－4天以后，细胞都分裂了好几代了，是不是每隔细胞内
: 的siRNA的量减少很多，这样是不是knockdown的效果就不好了？
: 3） 为什么siRNA可以直接转化knockdown基因表达，但是好像很少人直接转化shRNA去
: knockdown的？为什么shRNA都要科隆在plasmid载体或者virus载体内呢？直接转化难道
: 不能被dicer酶加工变成siRNA吗？（因为从文献上查到了一个shRNA的序列，如果能直
p*i
17 楼
shRNA直接转到细胞里也会被转录有？应需要promoter吧。
d*s
18 楼
我只用过siRNA，目前做了一个shRNA载体，但还没有使用。直接转染shRNA质粒应该是
可行的。目前有很多载体，表达shRNA而且带有真核筛选抗性。虽然效率比病毒低，但
是只要你筛选一下，应该就能解决这个问题！
可行的。目前有很多载体，表达shRNA而且带有真核筛选抗性。虽然效率比病毒低，但
是只要你筛选一下，应该就能解决这个问题！
m*m
19 楼
谢谢！
size.
【在 C*****h 的大作中提到】
: 1. ShRNA needs time (24-48 hours) to get maximum expression, while siRNA
: can function immediately after transfection.
: 2. For a lot of cell lines, transfection efficiency of shRNA-plasmids
: (large size) is low, while that of siRNAs is high because of the small size.
:
: to
size.
【在 C*****h 的大作中提到】
: 1. ShRNA needs time (24-48 hours) to get maximum expression, while siRNA
: can function immediately after transfection.
: 2. For a lot of cell lines, transfection efficiency of shRNA-plasmids
: (large size) is low, while that of siRNAs is high because of the small size.
:
: to
m*m
20 楼
谢谢了！
不过为什么不能直接合成shRNA然后转染呢？
【在 m*********7 的大作中提到】
: For question #3: the purpose of cloning shRNA into lentiviral vector is to
: produce virus particles, and in principle, every single target cell can be
: infected. If you use shRNA plasmid directly, you can hardly get 100%
: transfection efficiency.
不过为什么不能直接合成shRNA然后转染呢？
【在 m*********7 的大作中提到】
: For question #3: the purpose of cloning shRNA into lentiviral vector is to
: produce virus particles, and in principle, every single target cell can be
: infected. If you use shRNA plasmid directly, you can hardly get 100%
: transfection efficiency.
m*m
21 楼
谢谢！
不过如果文献上已经查到了好用的shRNA序列，为什么不能直接合成然后转染呢？siRNA
买个pool要好多美刀呢，可是缺很难查到有报道的好用的siRNA序列去合成转染。
【在 Z**********g 的大作中提到】
: 1. 没有直接合成shRNA转染的吧.shRNA比siRNA长,又还需要dicer处理,又不能解决长时
: 间效力的问题,吃饱了撑着合成shRNA啊.
: 2. 所以shRNA都是转化成DNA的形式,然后克隆到载体上.用载体直接转染后,若不筛选稳
: 定克隆则仍然无法解决长时间效力的问题.当然病毒好一些.
不过如果文献上已经查到了好用的shRNA序列，为什么不能直接合成然后转染呢？siRNA
买个pool要好多美刀呢，可是缺很难查到有报道的好用的siRNA序列去合成转染。
【在 Z**********g 的大作中提到】
: 1. 没有直接合成shRNA转染的吧.shRNA比siRNA长,又还需要dicer处理,又不能解决长时
: 间效力的问题,吃饱了撑着合成shRNA啊.
: 2. 所以shRNA都是转化成DNA的形式,然后克隆到载体上.用载体直接转染后,若不筛选稳
: 定克隆则仍然无法解决长时间效力的问题.当然病毒好一些.
m*m
22 楼
谢谢！
这个到还没有想到过，估计是这个原因吧。
能被RIGI或者MDA5识别？激活下游的interferon？是不是这样？
【在 a****k 的大作中提到】
: transfection of shRNA will induce interferon response
这个到还没有想到过，估计是这个原因吧。
能被RIGI或者MDA5识别？激活下游的interferon？是不是这样？
【在 a****k 的大作中提到】
: transfection of shRNA will induce interferon response
Z*g
23 楼
你这个直接合成然后转染是什么意思吧.
是直接合成shRNA(非DNA)?这会比siRNA便宜吗,会比siRNA效率高吗,能延长时效吗?都不
能吧.
是直接合成shRNA的DNA?它能被转录吗,有干扰效率吗,能延长时效吗?都不能吧.
siRNA
【在 m******m 的大作中提到】
: 谢谢！
: 这个到还没有想到过，估计是这个原因吧。
: 能被RIGI或者MDA5识别？激活下游的interferon？是不是这样？
是直接合成shRNA(非DNA)?这会比siRNA便宜吗,会比siRNA效率高吗,能延长时效吗?都不
能吧.
是直接合成shRNA的DNA?它能被转录吗,有干扰效率吗,能延长时效吗?都不能吧.
siRNA
【在 m******m 的大作中提到】
: 谢谢！
: 这个到还没有想到过，估计是这个原因吧。
: 能被RIGI或者MDA5识别？激活下游的interferon？是不是这样？
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