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大的plasmid是不是不好转染？

大的plasmid是不是不好转染？# Biology - 生物学

w*92011-06-27 07:06

1 楼

起因是我的core exam paper没有在规定的12点前交上。本来都是我的错，但是侥幸了
一下万一老板没注意我提交时间呢？结果收到一封严厉的邮件：
XXX（直接称呼名字）
你没有按时交论文，我对此表示很失望。更让我失望的是你没有按时交论文也没有跟我
请示。请注意这不是一个博士生应有的行为。你已经把我对你全部的信任推向了危险的
境地。
请你无论如何尽快交上论文，不管论文正在进行到什么程度，以免对你的core exam造
成更坏的影响。
sincerely
-----------------------------
business card
...
我马上就把论文交上去了，都没敢再多看两眼。现在已经哭成泪人了。
我老板是个很好的老板，我一直都很努力想达到他的expectation，但是总觉得差一点
什么。各位带过PHD学生的老师们，你们说我还有希望重建老板对我的信任吗？我老板
现在是有多讨厌我呢？
小妹跪谢了！

s*r2011-06-27 07:06

2 楼

俺们正宗四川人，日常大量使用花椒，在国内就知道汉源产好花椒。最近屡屡看到报告
假花椒的帖子。每次看到假花椒的帖子都马上把家里的花椒拿来看了又看，又碾，又用
水泡，但每次我用的汉源花椒都向我证明它是货真价实的好花椒。
我还用那种碾black pepper的小瓶子装花椒，每次麻婆豆腐炒好了，碾一点花椒面撒上
面，那叫一个香！

o*42011-06-27 07:06

3 楼

我的质粒有18kb，
转染293T，western没有检测到表达，
是不是转染有问题？

c*a2011-06-27 07:06

4 楼

学校政策上这些deadline的要求有时很严格，
错过了deadline其实让你老板难做了，
倒不是特意针对你。。。

【在 w********9 的大作中提到】

: 起因是我的core exam paper没有在规定的12点前交上。本来都是我的错，但是侥幸了
: 一下万一老板没注意我提交时间呢？结果收到一封严厉的邮件：
: XXX（直接称呼名字）
: 你没有按时交论文，我对此表示很失望。更让我失望的是你没有按时交论文也没有跟我
: 请示。请注意这不是一个博士生应有的行为。你已经把我对你全部的信任推向了危险的
: 境地。
: 请你无论如何尽快交上论文，不管论文正在进行到什么程度，以免对你的core exam造
: 成更坏的影响。
: sincerely
: -----------------------------

F*t2011-06-27 07:06

5 楼

谢谢推荐
可惜我这里没看到过有汉源花椒，唉。。。

s*22011-06-27 07:06

6 楼

“western没有检测到表达”的原因太多了。
共转染一个GFP就知道转染是不是有问题了

【在 o**4 的大作中提到】

: 我的质粒有18kb，
: 转染293T，western没有检测到表达，
: 是不是转染有问题？

w*92011-06-27 07:06

7 楼

我没意识到这一点。到点了交不上论文的时候我都快急死了。
我还有希望rebuild trust吗？

【在 c******a 的大作中提到】

: 学校政策上这些deadline的要求有时很严格，
: 错过了deadline其实让你老板难做了，
: 倒不是特意针对你。。。

t*z2011-06-27 07:06

8 楼

我好像看见过。。。。最近被大家吓的都清水煮了。。。呵呵

o*42011-06-27 07:06

9 楼

GFP也得18kb的质粒吧？
我就是怀疑大质粒转染不容易啊

【在 s**2 的大作中提到】

: “western没有检测到表达”的原因太多了。
: 共转染一个GFP就知道转染是不是有问题了

t*d2011-06-27 07:06

10 楼

我觉得问题的关键不是这个deadline有多严格，一般来说只要老师同意，学校里的绝大
部分deadline不会严格到绝不可错过一点。
你平常是不是（1）不注意和老板沟通，自己假设某件事情没关系。这样没有给老师和
学校足够的尊重和权威；（2）做事比较拖拉，经常在其他的deadline上也不守时？
我觉得这是他对你早有意见，一次爆发，因为在qualification exam这样重要的事情上
，还是发生老问题，就会让人觉得要么能力不够，要么态度不端正不重视。
我建议你诚恳地向老师承认过失，然后用实际行动和改变去证明你的提高。一般来说，
只要你还是可造之材，积极去改正，老师不会抓住不放的。

s*w2011-06-27 07:06

11 楼

我家也一直用lz推荐的这种，的确很好~~~

【在 s*********r 的大作中提到】

: 俺们正宗四川人，日常大量使用花椒，在国内就知道汉源产好花椒。最近屡屡看到报告
: 假花椒的帖子。每次看到假花椒的帖子都马上把家里的花椒拿来看了又看，又碾，又用
: 水泡，但每次我用的汉源花椒都向我证明它是货真价实的好花椒。
: 我还用那种碾black pepper的小瓶子装花椒，每次麻婆豆腐炒好了，碾一点花椒面撒上
: 面，那叫一个香！

S*s2011-06-27 07:06

12 楼

我转过 170kb 的 BAC DNA 都没问题，用 Fugene6 转的,Lipofectamine 2000 也还行
但是效率低一点。你可能还是 DNA 的问题。

w*92011-06-27 07:06

13 楼

谢谢你的建议！我会向老师承认错误，记住这个教训的。
希望能重建信任。

【在 t**********d 的大作中提到】

: 我觉得问题的关键不是这个deadline有多严格，一般来说只要老师同意，学校里的绝大
: 部分deadline不会严格到绝不可错过一点。
: 你平常是不是（1）不注意和老板沟通，自己假设某件事情没关系。这样没有给老师和
: 学校足够的尊重和权威；（2）做事比较拖拉，经常在其他的deadline上也不守时？
: 我觉得这是他对你早有意见，一次爆发，因为在qualification exam这样重要的事情上
: ，还是发生老问题，就会让人觉得要么能力不够，要么态度不端正不重视。
: 我建议你诚恳地向老师承认过失，然后用实际行动和改变去证明你的提高。一般来说，
: 只要你还是可造之材，积极去改正，老师不会抓住不放的。

q*d2011-06-27 07:06

14 楼

我喜欢青花椒
赫赫

S*e2011-06-27 07:06

15 楼

很佩服，我转的plasmid和LZ大小差不多，也一直存在困难。
还没用过Fugene6,下次试试，就按公司提供的protocol吗？
你转的什么细胞？表达高么？

【在 S*****s 的大作中提到】

: 我转过 170kb 的 BAC DNA 都没问题，用 Fugene6 转的,Lipofectamine 2000 也还行
: 但是效率低一点。你可能还是 DNA 的问题。

w*92011-06-27 07:06

16 楼

再次感谢你的一席话，打那么多字，一定很耽误你的时间了。
昨晚两点多才擦干眼泪回家，早上六点多就醒来睡不着了。看到你的话，每个字都觉得
是安慰。谢谢！

【在 t**********d 的大作中提到】

r*e2011-06-27 07:06

17 楼

握手！
在国内我用的是友加，在这边用的狮子楼。
我也是一直用MC家小瓶子装花椒，现下他家的又升级换代了，有3种粗细选择。

【在 s*********r 的大作中提到】

o*42011-06-27 07:06

18 楼

170kb？

【在 S*****s 的大作中提到】

: 我转过 170kb 的 BAC DNA 都没问题，用 Fugene6 转的,Lipofectamine 2000 也还行
: 但是效率低一点。你可能还是 DNA 的问题。

v*y2011-06-27 07:06

19 楼

别想太多了
时间能让一切都过去

【在 w********9 的大作中提到】

: 再次感谢你的一席话，打那么多字，一定很耽误你的时间了。
: 昨晚两点多才擦干眼泪回家，早上六点多就醒来睡不着了。看到你的话，每个字都觉得
: 是安慰。谢谢！

s*t2011-06-27 07:06

20 楼

我转200 kbp的bac，用lipofectamine ltx plus, work得很好。

【在 o**4 的大作中提到】

: 170kb？

L*s2011-06-27 07:06

21 楼

我最讨厌的事情之一就是学生最后一分钟把东西给我。之前都不知道他在写什么，写的
如何，最后一个大supprise...

【在 w********9 的大作中提到】

: 谢谢你的建议！我会向老师承认错误，记住这个教训的。
: 希望能重建信任。

o*42011-06-27 07:06

22 楼

lipo 2000转18kb应该没有任何问题吧？

【在 s*********t 的大作中提到】

: 我转200 kbp的bac，用lipofectamine ltx plus, work得很好。

w*92011-06-27 07:06

23 楼

谢李老师。
这次是错在我over due了，虽然之前一直有update我老板各个版本的。
李老师你觉得我还能让我老板重建起对我的信任吗？

【在 L***s 的大作中提到】

: 我最讨厌的事情之一就是学生最后一分钟把东西给我。之前都不知道他在写什么，写的
: 如何，最后一个大supprise...

s*t2011-06-27 07:06

24 楼

没问题吧。你还是质粒得问题。测序对不？质粒怎么提的，纯度如何。用qiagen的大提
试剂盒提。

【在 o**4 的大作中提到】

: lipo 2000转18kb应该没有任何问题吧？

H*92011-06-27 07:06

25 楼

下次自己注意些啊

【在 w********9 的大作中提到】

t*z2011-06-27 07:06

26 楼

我也在转染17kb的大质粒方面遇到了问题。我是做转基因果蝇。

s*y2011-06-27 07:06

27 楼

你的老板对你说这种恨话是恨铁不成钢。
你对老板好好认个错，然后以后要好好改一下你的拖拉毛病，过上一阵子他就会忘记这
个事情了。

【在 w********9 的大作中提到】

: 谢李老师。
: 这次是错在我over due了，虽然之前一直有update我老板各个版本的。
: 李老师你觉得我还能让我老板重建起对我的信任吗？

o*42011-06-27 07:06

28 楼

质粒应该没问题吧，一直用的是这个。
我用的PEI做的转染，下次用lipo2000试试

【在 s*********t 的大作中提到】

: 没问题吧。你还是质粒得问题。测序对不？质粒怎么提的，纯度如何。用qiagen的大提
: 试剂盒提。

L*s2011-06-27 07:06

29 楼

明显你老板是个实诚人。下次听话就是了。没啥大不了了。
对于学生来讲，千万不要可以“君子可欺之以方”。
大多数情况下老师不是看不出来你的伎俩，而是不愿意和你一般见识。

【在 w********9 的大作中提到】

: 谢李老师。
: 这次是错在我over due了，虽然之前一直有update我老板各个版本的。
: 李老师你觉得我还能让我老板重建起对我的信任吗？

S*s2011-06-27 07:06

30 楼

我转的也是 293T。刚开始也没指望能成，不过我的 BAC 上带了一个单独表达的 GFP，
所以就试了一把，没想到效率很高。显微镜下一看绿油油的。不过 DNA 的量要把握好
，我一般就转 10 微克以内，再多就容易看到沉淀了。就这个量不管是做 Western 还
是 real-time 都够了。

w*92011-06-27 07:06

31 楼

Levis老师你说得太准了。我老板是个非常真诚的人。
我确实有cheat的思想，抱着侥幸心理。
如果我能rebuild the trust，i would do anything..

【在 L***s 的大作中提到】

: 明显你老板是个实诚人。下次听话就是了。没啥大不了了。
: 对于学生来讲，千万不要可以“君子可欺之以方”。
: 大多数情况下老师不是看不出来你的伎俩，而是不愿意和你一般见识。

m*52011-06-27 07:06

32 楼

PEI转大质粒很糟糕的
上10k就不灵了我以前用的时候

【在 o**4 的大作中提到】

: 质粒应该没问题吧，一直用的是这个。
: 我用的PEI做的转染，下次用lipo2000试试

a*82011-06-27 07:06

33 楼

往前看，只要以后表现好，一般老板不会介意的。

【在 w********9 的大作中提到】

: Levis老师你说得太准了。我老板是个非常真诚的人。
: 我确实有cheat的思想，抱着侥幸心理。
: 如果我能rebuild the trust，i would do anything..

d*r2011-06-27 07:06

34 楼

搭车同问，我的质粒13kb，转neuron，磷酸钙，V5 tag染色，效率很低，
共转的GFP倒是很好。在Hek293上试，一切正常。
大侠觉得是什么问题？

【在 o**4 的大作中提到】

: 我的质粒有18kb，
: 转染293T，western没有检测到表达，
: 是不是转染有问题？

w*92011-06-27 07:06

35 楼

I will try my best!

【在 a*********8 的大作中提到】

: 往前看，只要以后表现好，一般老板不会介意的。

f*u2011-06-27 07:06

36 楼

我以前差点被GFP误导过。
当时我转完以后显微镜底下一看，很开心，几乎每个细胞都是绿的，虽然大多比较弱。
结果偶然不小心转到RFP的channel去了，发现居然几乎每个细胞都是红的。
仔细对比了一下红的和绿的的pattern，居然是一样的，
所以我的结论是这些都是自发荧光，只有那几个特别绿的细胞才是转染成功的，
那些在红色channel里是看不到的。所以效率其实是很低的。
我到现在也不明白为什么会有自发荧光，没转染过的细胞是没有的，
也许是转染试剂造成的吧。
我不是说你的转染效率也有问题，我只是想把这个问题提出来，
在估计转染效率的时候对于GFP可能要小心。

【在 S*****s 的大作中提到】

: 我转的也是 293T。刚开始也没指望能成，不过我的 BAC 上带了一个单独表达的 GFP，
: 所以就试了一把，没想到效率很高。显微镜下一看绿油油的。不过 DNA 的量要把握好
: ，我一般就转 10 微克以内，再多就容易看到沉淀了。就这个量不管是做 Western 还
: 是 real-time 都够了。

RR2011-06-27 07:06

37 楼

pat pat

【在 w********9 的大作中提到】

: I will try my best!

S*s2011-06-27 07:06

38 楼

不好意思我的说法有点误导。我的 BAC 上面通过 Cre-LoxP 反应又连上去了一个单独
表达的 GFP 质粒。我要表达的基因用 BAC 上自带的 promoter 表达，GFP 用质粒上带
的 SV40 promoter 表达，两个不干扰，但是只要有 GFP 的细胞一定会有我的 BAC DNA
。如果你感兴趣的话可以看看这篇文章
Wade-Martins R, Smith ER, Tyminski E, Chiocca EA, Saeki Y (2001) An
infectious transfer and expression system for genomic DNA loci in human and
mouse cells. Nat Biotechnol 19:1067-1070.
Dr. Saeki 人很好，想用这个质粒的朋友可以直接和他联系。pEHHG 质粒拿回来之后只
需要用 NEB 买来的 Cre 做体外反应就可以连上 BAC。

【在 f**u 的大作中提到】

: 我以前差点被GFP误导过。
: 当时我转完以后显微镜底下一看，很开心，几乎每个细胞都是绿的，虽然大多比较弱。
: 结果偶然不小心转到RFP的channel去了，发现居然几乎每个细胞都是红的。
: 仔细对比了一下红的和绿的的pattern，居然是一样的，
: 所以我的结论是这些都是自发荧光，只有那几个特别绿的细胞才是转染成功的，
: 那些在红色channel里是看不到的。所以效率其实是很低的。
: 我到现在也不明白为什么会有自发荧光，没转染过的细胞是没有的，
: 也许是转染试剂造成的吧。
: 我不是说你的转染效率也有问题，我只是想把这个问题提出来，
: 在估计转染效率的时候对于GFP可能要小心。

h*g2011-06-27 07:06

39 楼

一般来说，导师都是护着自己的学生的。但是有一个前提，
学生必须对老师诚实。要知道，教授以前也是学生。如果
你对导师不诚实不努力还编造理由，导师不会不知道的。
一般他是在等你自己醒悟。
不要自己孤立自己。只要导师没有让你走人，你就要把自
己看成组里的一个成员。多想想如何贡献。多和导师沟通。
很少有导师不喜欢诚实和勤奋的学生。
在美国，deadline是要面对的。不能逃避。假如你想不做
工作蒙混过关，挺难的。试想一下，你下一年的资助，导
师迟迟不给，最后说，对不起，没有钱了，你自己凑副吧。
如果你想让你的导师原谅你三次不诚实，你就需要有奇异
功能了。呵呵。

【在 w********9 的大作中提到】

: I will try my best!

f*u2011-06-27 07:06

40 楼

我知道你的意思。
我是说你看到的绿的细胞可能不都是转染成功的，有可能有假阳性，
尤其如果你看到不同细胞的绿颜色亮度差别很大的话更要小心。
当然也许这个只是我自己碰到的特殊情况。

DNA
and

【在 S*****s 的大作中提到】

: 不好意思我的说法有点误导。我的 BAC 上面通过 Cre-LoxP 反应又连上去了一个单独
: 表达的 GFP 质粒。我要表达的基因用 BAC 上自带的 promoter 表达，GFP 用质粒上带
: 的 SV40 promoter 表达，两个不干扰，但是只要有 GFP 的细胞一定会有我的 BAC DNA
: 。如果你感兴趣的话可以看看这篇文章
: Wade-Martins R, Smith ER, Tyminski E, Chiocca EA, Saeki Y (2001) An
: infectious transfer and expression system for genomic DNA loci in human and
: mouse cells. Nat Biotechnol 19:1067-1070.
: Dr. Saeki 人很好，想用这个质粒的朋友可以直接和他联系。pEHHG 质粒拿回来之后只
: 需要用 NEB 买来的 Cre 做体外反应就可以连上 BAC。

m*c2011-06-27 07:06

41 楼

我觉得你就少废话，好好干活，别想侥幸可以糊弄老师，就行了。

【在 w********9 的大作中提到】

: 谢李老师。
: 这次是错在我over due了，虽然之前一直有update我老板各个版本的。
: 李老师你觉得我还能让我老板重建起对我的信任吗？

S*e2011-06-27 07:06

42 楼

请问squirrabbit 和 Serious 你们做转染的质粒浓度是多少？
谢谢！

w*92011-06-27 07:06

43 楼

谢谢你那句：“很少有导师不喜欢诚实和勤奋的学生”。
我们学生都是系里出钱support，院老师和学生更像是师徒，没有funding的纽带，所以
信任就更重要。

【在 h**********g 的大作中提到】

: 一般来说，导师都是护着自己的学生的。但是有一个前提，
: 学生必须对老师诚实。要知道，教授以前也是学生。如果
: 你对导师不诚实不努力还编造理由，导师不会不知道的。
: 一般他是在等你自己醒悟。
: 不要自己孤立自己。只要导师没有让你走人，你就要把自
: 己看成组里的一个成员。多想想如何贡献。多和导师沟通。
: 很少有导师不喜欢诚实和勤奋的学生。
: 在美国，deadline是要面对的。不能逃避。假如你想不做
: 工作蒙混过关，挺难的。试想一下，你下一年的资助，导
: 师迟迟不给，最后说，对不起，没有钱了，你自己凑副吧。

S*s2011-06-27 07:06

44 楼

我的 BAC 是 CsCl Purify 的，不过最后一步用 Pierce 的 dialysis cassette 对 TE
做透析，然后用离心柱缩小体积到 500 微升左右，浓度大概在 500 ng/ul 左右。如
果沉淀之后再融解浓度可以更高，不过容易把 DNA 搞断掉。

【在 S******e 的大作中提到】

: 请问squirrabbit 和 Serious 你们做转染的质粒浓度是多少？
: 谢谢！

a*n2011-06-27 07:06

45 楼

evaluation给低分是什么意思, 你是说你给了你导师低分吗?

S*e2011-06-27 07:06

46 楼

谢谢，咋不用Qiagen的kit

TE

【在 S*****s 的大作中提到】

: 我的 BAC 是 CsCl Purify 的，不过最后一步用 Pierce 的 dialysis cassette 对 TE
: 做透析，然后用离心柱缩小体积到 500 微升左右，浓度大概在 500 ng/ul 左右。如
: 果沉淀之后再融解浓度可以更高，不过容易把 DNA 搞断掉。

c*r2011-06-27 07:06

47 楼

呃，我的话可能刺耳，但是“承认错误记住教训”估计也不太管用，我觉得这个是纯性
格问题，有的人就是把什么事情都拖到最后一分钟再去做（其实我也为这个吃过大亏）
，这个说实话很难改很很难改。而且我感觉你是不是每次“承认错误”之后就把“教训
”给抛脑后了？感觉你这三次让老板大失望原因都有点类似啊。
你得拿出一些实际的行动来。

【在 w********9 的大作中提到】

: 谢谢你的建议！我会向老师承认错误，记住这个教训的。
: 希望能重建信任。

S*s2011-06-27 07:06

48 楼

我用两种 Kit，Clontech 的 BAC100 和 Qiagen 的 Maxiprep，纯化出来的 DNA 纯度
都不如 CsCl 的高。我用 CsCl 纯化的 BAC 放很久都不会有降解，跑电泳也不会看到
smear，但是 kit 纯化的 DNA 就不行，放两三个月跑个胶就能看到降解的 DNA smear
了。

【在 S******e 的大作中提到】

: 谢谢，咋不用Qiagen的kit
:
: TE

c*r2011-06-27 07:06

49 楼

老板对学生本来就不该有额外的信任吧，就得防贼似的，呵呵呵。同理，你也不该觉得
老板对你存在信任然后就可以无视一些该遵守的规则。Be professional.

【在 w********9 的大作中提到】

: 谢李老师。
: 这次是错在我over due了，虽然之前一直有update我老板各个版本的。
: 李老师你觉得我还能让我老板重建起对我的信任吗？

S*s2011-06-27 07:06

50 楼

如果 GFP 和质粒一起做 cotransfection 的话很可能会遇到这样的问题，在难转染的
细胞上差别更明显。如果你把 GFP 和你的要表达的基因克隆到同一个质粒上应该就不
会有这个问题。我用 BAC 可以连另一个单独表达 GFP 的质粒，如果你要表达的基因比
较小，可以考虑用 IRES GFP。我们隔壁实验室用 Clontech 的 pLVX-IRES-ZsGreen1
克隆基因然后转 Neuron，效果也很不错。荧光强度比较高，而且每一个带 GFP 的
neuron 都能有基因表达，在电生理上能看到区别。

【在 f**u 的大作中提到】

: 我知道你的意思。
: 我是说你看到的绿的细胞可能不都是转染成功的，有可能有假阳性，
: 尤其如果你看到不同细胞的绿颜色亮度差别很大的话更要小心。
: 当然也许这个只是我自己碰到的特殊情况。
:
: DNA
: and

c*r2011-06-27 07:06

51 楼

What if your ~best~ is not enough?

【在 w********9 的大作中提到】

: I will try my best!

c*r2011-06-27 07:06

52 楼

我倒是觉得一个合格的老板其实对学生的错误不存在所谓“原谅”与否的问题，说到底
还是一个利益的关系。如果你没有触碰到核心利益，比如说不过是一个小会议文章没来
得及投稿或者学生自己的死线错过了，so what？活照干文章照写，该咋办咋办。但是
如果是因为学生的原因把你本来被CNS接受的文章弄黄了（比如说错过了修改的期限）
或者编造数据然后被人发现结果毁了你的名声，这种事儿估计开除都是轻的。
其实老师心里都有个小黑本本，记着一条条的黑账……

【在 h**********g 的大作中提到】

T*92011-06-27 07:06

53 楼

楼主是拖延症，得治

s*22011-06-27 07:06

54 楼

LZ肯定是个女的！......

l*r2011-06-27 07:06

55 楼

师徒间最重要的是信任，要不然我天天怀疑你做的东西，怎么相处。
信任是需要诚实换来的，千万别耍小聪明，造成信任危机。
真诚沟通最重要。

w*92011-06-27 07:06

56 楼

我其他都给了高分，只有一项，问你感觉从这门课学了多少，我觉得其实那门课很偏向
MBA,对我的research关联不是很大，就给了个低分，完全没想到这会是对老板不利的事
情。
evaluation是不记名的，但是学校会把问卷发给老师，一般小课兑笔迹就能知道是谁。
老板很直率的说我给他低分，让他很失望。

【在 a********n 的大作中提到】

: evaluation给低分是什么意思, 你是说你给了你导师低分吗?

s*y2011-06-27 07:06

57 楼

是的，我的博后有时候对我耍一些小花招的时候我心里就暗笑，
这些招数我自己很久以前做博士后的时候就耍过了。不过我一般也不点破他，
只要不要太过分，不影响工作。

【在 h**********g 的大作中提到】

t*d2011-06-27 07:06

58 楼

这个，如果你老师为此批评你，我决定不应该，不够professional。学生有自己评价的
权利。他最多感觉委屈，比如说你以是否和你的研究有关来评价学了多少，这个评价方
法可能不公平，可以抱怨一下。

【在 w********9 的大作中提到】

: 我其他都给了高分，只有一项，问你感觉从这门课学了多少，我觉得其实那门课很偏向
: MBA,对我的research关联不是很大，就给了个低分，完全没想到这会是对老板不利的事
: 情。
: evaluation是不记名的，但是学校会把问卷发给老师，一般小课兑笔迹就能知道是谁。
: 老板很直率的说我给他低分，让他很失望。

w*92011-06-27 07:06

59 楼

你错了。
老师没有因为我research不努力或者做得不好说过我，多数是因为sincerety
issure。这次他也说，如果我跟他说“老师我需要一两个小时的extension”他会给我
的，考虑到我的项目一直在进展临到最后加了很多东西，但是他很失望我居然没跟他打
招呼就胆敢错过deadline。我就说sorry,我的错，我也没argue我没跟他说其实是不敢。
他把sincerety看得很重。不过他也说，每个人都有不同的character。
我的funding是系里给得，包括我两个师兄，所以确实不存在什么利益关系。

【在 c*****r 的大作中提到】

: 呃，我的话可能刺耳，但是“承认错误记住教训”估计也不太管用，我觉得这个是纯性
: 格问题，有的人就是把什么事情都拖到最后一分钟再去做（其实我也为这个吃过大亏）
: ，这个说实话很难改很很难改。而且我感觉你是不是每次“承认错误”之后就把“教训
: ”给抛脑后了？感觉你这三次让老板大失望原因都有点类似啊。
: 你得拿出一些实际的行动来。

w*92011-06-27 07:06

60 楼

I'm sorry if that ever happens to you.
My frontier is unbounded.

【在 c*****r 的大作中提到】

: What if your ~best~ is not enough?

o*m2011-06-27 07:06

61 楼

不错了……我有一次晚交了一分钟，被扣了50%，说即使晚一分钟，也要扣一半分，然
后再接着扣论文的分。

r*d2011-06-27 07:06

62 楼

看你这回话，你以后还会吃更大的苦头，好了伤疤忘了疼

【在 w********9 的大作中提到】

: I'm sorry if that ever happens to you.
: My frontier is unbounded.

c*a2011-06-27 07:06

63 楼

做事，先学会做人

【在 w********9 的大作中提到】

r*r2011-06-27 07:06

64 楼

有你这么说话的吗，牛哄哄的
你老板也就是个装B的货，他脾气就是你那个破evaluation搞的。你自己不懂政治，象
牙塔里呆的太久
还为这点破事哭，你男朋友不会跟你一样2吧，在这儿问什么呀，和你男朋友谈谈比这
儿强。

【在 w********9 的大作中提到】

: I'm sorry if that ever happens to you.
: My frontier is unbounded.