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能否用RT-PCR验证CRISPR/CAS9敲除效率

能否用RT-PCR验证CRISPR/CAS9敲除效率# Biology - 生物学

B*e2017-03-16 07:03

1 楼

【以下文字转载自 TrustInJesus 讨论区】
发信人: jym2307 (罪魁), 信区: TrustInJesus
标题: 你能找出一个比耶稣的死，更伟大的例子么
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 7 17:46:40 2011, 美东)
？

s*12017-03-16 07:03

2 楼

看到一些文章用RT-PCR来验证CRISPR/CAS9敲除基因效率，而有的文章则展示测序结果
来证明。
请问对于这两种方法哪种更好？
CRISPRi是RT-PCR，CRISPR KO则用测序？

z*n2017-03-16 07:03

3 楼

岳飞之死

【在 B********e 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 TrustInJesus 讨论区】
: 发信人: jym2307 (罪魁), 信区: TrustInJesus
: 标题: 你能找出一个比耶稣的死，更伟大的例子么
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 7 17:46:40 2011, 美东)
: ？

a*n2017-03-16 07:03

4 楼

对的

【在 s*******1 的大作中提到】

: 看到一些文章用RT-PCR来验证CRISPR/CAS9敲除基因效率，而有的文章则展示测序结果
: 来证明。
: 请问对于这两种方法哪种更好？
: CRISPRi是RT-PCR，CRISPR KO则用测序？

z*n2017-03-16 07:03

5 楼

哪吒之死

【在 z*********n 的大作中提到】

: 岳飞之死

s*12017-03-16 07:03

6 楼

用RT-PCR来检测CRISPR KO是否可以？

b*e2017-03-16 07:03

7 楼

孙悟空之死

【在 z*********n 的大作中提到】

: 哪吒之死

l*12017-03-16 07:03

8 楼

Real time PCR 理论上可以
ddPCR最好

z*n2017-03-16 07:03

9 楼

那段不感人还挺搞笑

【在 b*****e 的大作中提到】

: 孙悟空之死

j*n2017-03-16 07:03

10 楼

没试过
有两个小疑问
ko除非用hr把整个cds干掉不然即使ko了 transcriotion不受影响吧 nhej一般也就几
个bp的变化
如果只ko掉一个allele 会显著影响基因的表达吗？印象中一些highly regulate gene
一个copy或者两个copy 转录水平没啥区别

【在 s*******1 的大作中提到】

: 用RT-PCR来检测CRISPR KO是否可以？

v*s2017-03-16 07:03

11 楼

？？这个啥时候死的？
六耳猕猴之死吧。

【在 b*****e 的大作中提到】

: 孙悟空之死

l*12017-03-16 07:03

12 楼

这个其实和测cancer cell 中的 mutation frequency 是一个原理

z*n2017-03-16 07:03

13 楼

被勾魂，然后大闹阎罗殿

【在 v*****s 的大作中提到】

: ？？这个啥时候死的？
: 六耳猕猴之死吧。

a*n2017-03-16 07:03

14 楼

1. 会造成frame shift或者stop codon
2. 是的，杂合子不能算ko，要经过一次减数分裂才行，或者直接ko两个allele

gene

【在 j****n 的大作中提到】

: 没试过
: 有两个小疑问
: ko除非用hr把整个cds干掉不然即使ko了 transcriotion不受影响吧 nhej一般也就几
: 个bp的变化
: 如果只ko掉一个allele 会显著影响基因的表达吗？印象中一些highly regulate gene
: 一个copy或者两个copy 转录水平没啥区别

R*a2017-03-16 07:03

15 楼

哪吒球个伟大，官二代耍横杀了比他老爹更大的官二代，
然后接着耍横去打人老爸，干涉司法，最后畏罪自杀

【在 z*********n 的大作中提到】

: 哪吒之死

m*e2017-03-16 07:03

16 楼

有没有ko不掉的基因？我最近有一个基因总是做不出ko的line

【在 a*********n 的大作中提到】

: 1. 会造成frame shift或者stop codon
: 2. 是的，杂合子不能算ko，要经过一次减数分裂才行，或者直接ko两个allele
:
: gene

z*n2017-03-16 07:03

17 楼

我就是好奇李靖这个名字在商朝正常不，那个年代的人们的名字貌似没这么现代这么简单

【在 R***a 的大作中提到】

: 哪吒球个伟大，官二代耍横杀了比他老爹更大的官二代，
: 然后接着耍横去打人老爸，干涉司法，最后畏罪自杀

j*n2017-03-16 07:03

18 楼

frameshift或者stop codon影响translation 但对transcription没有影响蛋白活性肯
定没了但mrna水平未必会有大的差别
除非设计的qpcr primer刚好在deletion区域但nhej随机性太大根本无法预测

【在 a*********n 的大作中提到】

: 1. 会造成frame shift或者stop codon
: 2. 是的，杂合子不能算ko，要经过一次减数分裂才行，或者直接ko两个allele
:
: gene

i*a2017-03-16 07:03

19 楼

最終幻想 7 Aeris 之死

【在 B********e 的大作中提到】

j*n2017-03-16 07:03

20 楼

essential gene肯定ko不掉啊 hh
或者对生长影响很大的也很难ko

【在 m*****e 的大作中提到】

: 有没有ko不掉的基因？我最近有一个基因总是做不出ko的line

A*l2017-03-16 07:03

21 楼

李靖不是唐人穿越的么……

简单

【在 z*********n 的大作中提到】

: 我就是好奇李靖这个名字在商朝正常不，那个年代的人们的名字貌似没这么现代这么简单

i*02017-03-16 07:03

22 楼

看ko，wb是最后的解决方案把。

z*n2017-03-16 07:03

23 楼

我觉得也是，还总兵呢，那时候有总兵吗
不过穿越有证据吗？

【在 A*****l 的大作中提到】

: 李靖不是唐人穿越的么……
:
: 简单

a*n2017-03-16 07:03

24 楼

有，原因很多，要看具体情况，当然最直接的办法是多做几遍

【在 m*****e 的大作中提到】

: 有没有ko不掉的基因？我最近有一个基因总是做不出ko的line

v*s2017-03-16 07:03

25 楼

封神演义是明朝人写的。

简单

【在 z*********n 的大作中提到】

: 我就是好奇李靖这个名字在商朝正常不，那个年代的人们的名字貌似没这么现代这么简单

a*n2017-03-16 07:03

26 楼

对，不建议qpcr检测ko

【在 j****n 的大作中提到】

: frameshift或者stop codon影响translation 但对transcription没有影响蛋白活性肯
: 定没了但mrna水平未必会有大的差别
: 除非设计的qpcr primer刚好在deletion区域但nhej随机性太大根本无法预测

z*n2017-03-16 07:03

27 楼

我知道，就是好奇他这地方有没有考古有没有尽量显得真实

【在 v*****s 的大作中提到】

: 封神演义是明朝人写的。
:
: 简单

l*12017-03-16 07:03

28 楼

qpcr 直接测DNA

v*s2017-03-16 07:03

29 楼

总兵是明清才有的官制。
商朝的地方军事长官官职名称早就失传了吧。

【在 z*********n 的大作中提到】

: 我觉得也是，还总兵呢，那时候有总兵吗
: 不过穿越有证据吗？

m*e2017-03-16 07:03

30 楼

嗯，谢谢了！

【在 j****n 的大作中提到】

: essential gene肯定ko不掉啊 hh
: 或者对生长影响很大的也很难ko

R*a2017-03-16 07:03

31 楼

姜尚，姬發这名字也挺正常吧

简单

【在 z*********n 的大作中提到】

: 我就是好奇李靖这个名字在商朝正常不，那个年代的人们的名字貌似没这么现代这么简单

m*e2017-03-16 07:03

32 楼

嗯，谢谢！

【在 a*********n 的大作中提到】

: 有，原因很多，要看具体情况，当然最直接的办法是多做几遍

R*a2017-03-16 07:03

33 楼

丫写水浒传都没考古，写封神还会去考古么？

【在 z*********n 的大作中提到】

: 我知道，就是好奇他这地方有没有考古有没有尽量显得真实

v*s2017-03-16 07:03

34 楼

显然没有，商朝压根就没有李这个姓。

【在 z*********n 的大作中提到】

: 我知道，就是好奇他这地方有没有考古有没有尽量显得真实

q*d2017-03-16 07:03

35 楼

袁崇焕

【在 z*********n 的大作中提到】

: 岳飞之死

z*n2017-03-16 07:03

36 楼

那会的后来的姓的概念是不是还没形成呢？
好多人的姓都是地名

【在 v*****s 的大作中提到】

: 显然没有，商朝压根就没有李这个姓。

b*e2017-03-16 07:03

37 楼

我说的是龙珠里面的孙悟空

【在 z*********n 的大作中提到】

: 那段不感人还挺搞笑

v*s2017-03-16 07:03

38 楼

水浒传比封神还是好多了，官名人名基本还是符合宋朝的，穿越的是些比较小的细节。

【在 R***a 的大作中提到】

: 丫写水浒传都没考古，写封神还会去考古么？

z*n2017-03-16 07:03

39 楼

对了，姜尚为啥也挺现代，这个好像不是编的吧

【在 v*****s 的大作中提到】

: 水浒传比封神还是好多了，官名人名基本还是符合宋朝的，穿越的是些比较小的细节。

R*a2017-03-16 07:03

40 楼

那会儿还是氏吧姜啊姬啊嬴啊都是女边的

【在 z*********n 的大作中提到】

: 那会的后来的姓的概念是不是还没形成呢？
: 好多人的姓都是地名

z*n2017-03-16 07:03

41 楼

哦，对，国名地名当姓都已经更后来了

【在 R***a 的大作中提到】

: 那会儿还是氏吧姜啊姬啊嬴啊都是女边的

v*s2017-03-16 07:03

42 楼

也不是完全没有。比如姬这个姓就有了，还有赢，姜这些姓都有了。就是现在的一些常
见大姓出来的都比较晚，比较集中的出现在春秋战国时期。比如李这个姓最早的就是老
子。往往是贵族分家以后，用封地作为自己的新姓，然后小国被灭以后，里面的人四散
流落，都用那个小国的名字作为姓。
不过姓和氏我分得也不是太清楚。

【在 z*********n 的大作中提到】

: 那会的后来的姓的概念是不是还没形成呢？
: 好多人的姓都是地名

v*s2017-03-16 07:03

43 楼

你说反了。姓才是标示血缘的，你底下说的这几个都是姓，而且是最古老的上古八大姓。
氏是后来同姓的人越来越多，贵族用来标示自己分支的，比如赵国秦国都是赢姓，但赵
国是分家，所以赵国是赵氏，所以叫赵氏孤儿，而不是赵姓孤儿。

【在 R***a 的大作中提到】

: 那会儿还是氏吧姜啊姬啊嬴啊都是女边的

z*n2017-03-16 07:03

44 楼

话说，字的消失是不是新中国的产物？
貌似台湾香港也没字了，好像人们都不约而同不起字了
我爸还有字呢

姓。

【在 v*****s 的大作中提到】

: 你说反了。姓才是标示血缘的，你底下说的这几个都是姓，而且是最古老的上古八大姓。
: 氏是后来同姓的人越来越多，贵族用来标示自己分支的，比如赵国秦国都是赢姓，但赵
: 国是分家，所以赵国是赵氏，所以叫赵氏孤儿，而不是赵姓孤儿。

R*a2017-03-16 07:03

45 楼

想说姓来着，明显姓也是女字旁嘛

姓。

【在 v*****s 的大作中提到】

h*i2017-03-16 07:03

46 楼

废话
当然是耶稣又活过来了！

【在 B********e 的大作中提到】

v*s2017-03-16 07:03

47 楼

ft，你思维太跳跃了。姓氏还没搞清楚呢，又开搞名字了。
名是从小就有的，字是成人冠礼时候起的。名一般是父母长辈用的，你不能对平辈和长
辈称呼他们的名。
字的消失，一方面是五四以来的极端西化现代化，一方面也是教育的普及化和社会关系
的复杂化。
其实字过去也不是人人都有的，一般农民是不会有字的。

【在 z*********n 的大作中提到】

: 话说，字的消失是不是新中国的产物？
: 貌似台湾香港也没字了，好像人们都不约而同不起字了
: 我爸还有字呢
:
: 姓。

s*e2017-03-16 07:03

48 楼

加字要行冠礼，没冠礼了大家就懒得起字了。

【在 z*********n 的大作中提到】

: 话说，字的消失是不是新中国的产物？
: 貌似台湾香港也没字了，好像人们都不约而同不起字了
: 我爸还有字呢
:
: 姓。

z*n2017-03-16 07:03

49 楼

西班牙人，菲律宾人依然好多name，八九个的好不稀奇
近代中国人就有个字还给革了，不给力啊

【在 v*****s 的大作中提到】

: ft，你思维太跳跃了。姓氏还没搞清楚呢，又开搞名字了。
: 名是从小就有的，字是成人冠礼时候起的。名一般是父母长辈用的，你不能对平辈和长
: 辈称呼他们的名。
: 字的消失，一方面是五四以来的极端西化现代化，一方面也是教育的普及化和社会关系
: 的复杂化。
: 其实字过去也不是人人都有的，一般农民是不会有字的。

b*e2017-03-16 07:03

50 楼

你叫起来还不是就叫一个娟

【在 z*********n 的大作中提到】

: 西班牙人，菲律宾人依然好多name，八九个的好不稀奇
: 近代中国人就有个字还给革了，不给力啊

v*s2017-03-16 07:03

51 楼

你可以带头啊，从自己做起，先给自己和自己的娃都起上字，作为middle name。
不过你要是有个女娃，起不起字呢？

【在 z*********n 的大作中提到】

: 西班牙人，菲律宾人依然好多name，八九个的好不稀奇
: 近代中国人就有个字还给革了，不给力啊

z*n2017-03-16 07:03

52 楼

荷西，这个比较三毛

【在 b*****e 的大作中提到】

: 你叫起来还不是就叫一个娟

R*a2017-03-16 07:03

53 楼

西班牙人这个名字搞得，闹得我看着名字不知道应该叫朱力还是狐狸

【在 z*********n 的大作中提到】

: 荷西，这个比较三毛

b*e2017-03-16 07:03

54 楼

助理，胡里奥

【在 R***a 的大作中提到】

: 西班牙人这个名字搞得，闹得我看着名字不知道应该叫朱力还是狐狸

z*n2017-03-16 07:03

55 楼

第一代一般是狐狸
后几代或者有那种尽量想装英美系的就朱力

【在 R***a 的大作中提到】

: 西班牙人这个名字搞得，闹得我看着名字不知道应该叫朱力还是狐狸

z*n2017-03-16 07:03

56 楼

狐狸也有的

【在 b*****e 的大作中提到】

: 助理，胡里奥

b*e2017-03-16 07:03

57 楼

还有叫耶稣的，我们又回到耶稣了

【在 z*********n 的大作中提到】

: 狐狸也有的

R*a2017-03-16 07:03

58 楼

大嘴美女狐狸牙

【在 z*********n 的大作中提到】

: 狐狸也有的

z*n2017-03-16 07:03

59 楼

那个读嘿咻
我读过一次耶稣，把前台的人笑得前仰后合，我还给人送外卖的
I have a delivery for 急着死
然后前台就开始爆笑

【在 b*****e 的大作中提到】

: 还有叫耶稣的，我们又回到耶稣了

b*e2017-03-16 07:03

60 楼

赫苏斯吧，可能地道细雨发黑修

【在 z*********n 的大作中提到】

: 那个读嘿咻
: 我读过一次耶稣，把前台的人笑得前仰后合，我还给人送外卖的
: I have a delivery for 急着死
: 然后前台就开始爆笑

z*n2017-03-16 07:03

61 楼

恩，但是LA老莫多，所以很多人读西语名字很正宗

【在 b*****e 的大作中提到】

: 赫苏斯吧，可能地道细雨发黑修

s*m2017-03-16 07:03

62 楼

转trustinjesus上sb垃圾到joke的都基本上很有病。

【在 B********e 的大作中提到】

R*a2017-03-16 07:03

63 楼

还回帖的统统都是帕金森症晚期

【在 s*****m 的大作中提到】

: 转trustinjesus上sb垃圾到joke的都基本上很有病。

z*n2017-03-16 07:03

64 楼

不准歧视我们帕金森病患

【在 R***a 的大作中提到】

: 还回帖的统统都是帕金森症晚期

v*s2017-03-16 07:03

65 楼

老三你看你还是对劳模兄弟阶级感情深，一谈到西域名字就手舞足蹈，把我中华的传统
姓氏名字都抛在脑后了。
你给自己的起字大业咋样了？

【在 z*********n 的大作中提到】

: 恩，但是LA老莫多，所以很多人读西语名字很正宗

z*n2017-03-16 07:03

66 楼

字老三啊

【在 v*****s 的大作中提到】

: 老三你看你还是对劳模兄弟阶级感情深，一谈到西域名字就手舞足蹈，把我中华的传统
: 姓氏名字都抛在脑后了。
: 你给自己的起字大业咋样了？

v*s2017-03-16 07:03

67 楼

这个太不典雅了，我给你起一个吧，叫叔竺，怎么样？

【在 z*********n 的大作中提到】

: 字老三啊

i*a2017-03-16 07:03

68 楼

除了字
還有號

l*k2017-03-16 07:03

69 楼

李红痣

【在 B********e 的大作中提到】

l*x2017-03-16 07:03

70 楼

斯巴达克思，有六千人一起被钉上十字架，他排第一，气场够大了吧？

【在 B********e 的大作中提到】

k*n2017-03-16 07:03

71 楼

何解？
32B？

【在 v*****s 的大作中提到】

: 这个太不典雅了，我给你起一个吧，叫叔竺，怎么样？

g*02017-03-16 07:03

72 楼

还真的有
黄子华说的
此人就是--屈原!!!
他一个人的死,让14亿人有了一个节假日
这一点比耶稣的死受益人多吧,是和耶稣的诞生一个级别的哦~

【在 B********e 的大作中提到】

x*k2017-03-16 07:03

73 楼

端午跟屈原的死没关系，吃粽子才有关系

【在 g***0 的大作中提到】

: 还真的有
: 黄子华说的
: 此人就是--屈原!!!
: 他一个人的死,让14亿人有了一个节假日
: 这一点比耶稣的死受益人多吧,是和耶稣的诞生一个级别的哦~

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