Thrombin切蛋白的奇怪事儿# Biology - 生物学
F*e
1 楼
ds160上的教育经历上有一项：COURSE OF STUDY，对于函授的大专怎么回答？
只说MAJOR是什么，再写VOCATIONAL
对么？多谢
只说MAJOR是什么，再写VOCATIONAL
对么？多谢
n*w
2 楼
GST-fusion protein,
bind完后用elution buffer洗出来了，然后pool，然后dialyze back to PBS (pH 7.3)
，dialyze完我测了下pH是7.56，然后加thrombin，切了一会儿就出现precipitation了
，根据我上次的经验，precipitates里面90%是我需要的蛋白。
现在一个问题是，为啥会有析出？我加完thrombin切的过程中测了一下pH，起码1个小
时的时候pH没有什么变化。。
所以想，是不是因为切了以后蛋白结构变了，疏水性增加？
这个116kD的fusion protein里有18个cysteine，结合之前有人发的帖子，我在想，是
不是这个原因？
谢谢。
bind完后用elution buffer洗出来了，然后pool，然后dialyze back to PBS (pH 7.3)
，dialyze完我测了下pH是7.56，然后加thrombin，切了一会儿就出现precipitation了
，根据我上次的经验，precipitates里面90%是我需要的蛋白。
现在一个问题是，为啥会有析出？我加完thrombin切的过程中测了一下pH，起码1个小
时的时候pH没有什么变化。。
所以想，是不是因为切了以后蛋白结构变了，疏水性增加？
这个116kD的fusion protein里有18个cysteine，结合之前有人发的帖子，我在想，是
不是这个原因？
谢谢。
m*p
3 楼
?是自己的还是家人B2签证的？一直给家人的B2填表时教育经历都空着。
【在 F*********e 的大作中提到】
: ds160上的教育经历上有一项：COURSE OF STUDY，对于函授的大专怎么回答？
: 只说MAJOR是什么，再写VOCATIONAL
: 对么？多谢
【在 F*********e 的大作中提到】
: ds160上的教育经历上有一项：COURSE OF STUDY，对于函授的大专怎么回答？
: 只说MAJOR是什么，再写VOCATIONAL
: 对么？多谢
s*n
4 楼
18个cysteine，估计有不少的disulfide bonds，你是表达在E. coli的cytoplasm？如
果是的话，misfold的可能性很大。GST增加了fusion的可溶性，切掉以后就沉淀了。
果是的话，misfold的可能性很大。GST增加了fusion的可溶性，切掉以后就沉淀了。
F*e
5 楼
给家人。
【在 m******p 的大作中提到】
: ?是自己的还是家人B2签证的？一直给家人的B2填表时教育经历都空着。
【在 m******p 的大作中提到】
: ?是自己的还是家人B2签证的？一直给家人的B2填表时教育经历都空着。
p*p
6 楼
这东西有时难搞定，能不切就别切。
3)
【在 n***w 的大作中提到】
: GST-fusion protein,
: bind完后用elution buffer洗出来了，然后pool，然后dialyze back to PBS (pH 7.3)
: ，dialyze完我测了下pH是7.56，然后加thrombin，切了一会儿就出现precipitation了
: ，根据我上次的经验，precipitates里面90%是我需要的蛋白。
: 现在一个问题是，为啥会有析出？我加完thrombin切的过程中测了一下pH，起码1个小
: 时的时候pH没有什么变化。。
: 所以想，是不是因为切了以后蛋白结构变了，疏水性增加？
: 这个116kD的fusion protein里有18个cysteine，结合之前有人发的帖子，我在想，是
: 不是这个原因？
: 谢谢。
3)
【在 n***w 的大作中提到】
: GST-fusion protein,
: bind完后用elution buffer洗出来了，然后pool，然后dialyze back to PBS (pH 7.3)
: ，dialyze完我测了下pH是7.56，然后加thrombin，切了一会儿就出现precipitation了
: ，根据我上次的经验，precipitates里面90%是我需要的蛋白。
: 现在一个问题是，为啥会有析出？我加完thrombin切的过程中测了一下pH，起码1个小
: 时的时候pH没有什么变化。。
: 所以想，是不是因为切了以后蛋白结构变了，疏水性增加？
: 这个116kD的fusion protein里有18个cysteine，结合之前有人发的帖子，我在想，是
: 不是这个原因？
: 谢谢。
r*e
7 楼
又不是没上过学的文盲，也不是农民，空着会不会有误会？
【在 m******p 的大作中提到】
: ?是自己的还是家人B2签证的？一直给家人的B2填表时教育经历都空着。
【在 m******p 的大作中提到】
: ?是自己的还是家人B2签证的？一直给家人的B2填表时教育经历都空着。
v*m
8 楼
Sadly, the truth is that the protein you are working on is likely to
precipitate out by itself. The GST tag increases the solubility of the
fusion protein.
Man, doing protein expression is nothing more than gambling or trading stocks.
割肉吧。
3)
【在 n***w 的大作中提到】
: GST-fusion protein,
: bind完后用elution buffer洗出来了，然后pool，然后dialyze back to PBS (pH 7.3)
: ，dialyze完我测了下pH是7.56，然后加thrombin，切了一会儿就出现precipitation了
: ，根据我上次的经验，precipitates里面90%是我需要的蛋白。
: 现在一个问题是，为啥会有析出？我加完thrombin切的过程中测了一下pH，起码1个小
: 时的时候pH没有什么变化。。
: 所以想，是不是因为切了以后蛋白结构变了，疏水性增加？
: 这个116kD的fusion protein里有18个cysteine，结合之前有人发的帖子，我在想，是
: 不是这个原因？
: 谢谢。
precipitate out by itself. The GST tag increases the solubility of the
fusion protein.
Man, doing protein expression is nothing more than gambling or trading stocks.
割肉吧。
3)
【在 n***w 的大作中提到】
: GST-fusion protein,
: bind完后用elution buffer洗出来了，然后pool，然后dialyze back to PBS (pH 7.3)
: ，dialyze完我测了下pH是7.56，然后加thrombin，切了一会儿就出现precipitation了
: ，根据我上次的经验，precipitates里面90%是我需要的蛋白。
: 现在一个问题是，为啥会有析出？我加完thrombin切的过程中测了一下pH，起码1个小
: 时的时候pH没有什么变化。。
: 所以想，是不是因为切了以后蛋白结构变了，疏水性增加？
: 这个116kD的fusion protein里有18个cysteine，结合之前有人发的帖子，我在想，是
: 不是这个原因？
: 谢谢。
m*p
9 楼
这么多年了一直都这么办的，不管是最开始的ds160，还有B2 延期，特别是可以网上申
请之后，父母只是平民百姓，那么大年纪了，那么久远的数据都是多余的，所以都空着
，填表时候省事。省的纠结那么多英文名词生硬的翻译。
反正函授的大专就是vocational school吧，大专毕业证在这边美国认证为Associate
degree
【在 r**e 的大作中提到】
: 又不是没上过学的文盲，也不是农民，空着会不会有误会？
请之后，父母只是平民百姓，那么大年纪了，那么久远的数据都是多余的，所以都空着
，填表时候省事。省的纠结那么多英文名词生硬的翻译。
反正函授的大专就是vocational school吧，大专毕业证在这边美国认证为Associate
degree
【在 r**e 的大作中提到】
: 又不是没上过学的文盲，也不是农民，空着会不会有误会？
s*y
10 楼
我赞同这个说法。
the
【在 v**********m 的大作中提到】
: Sadly, the truth is that the protein you are working on is likely to
: precipitate out by itself. The GST tag increases the solubility of the
: fusion protein.
: Man, doing protein expression is nothing more than gambling or trading stocks.
: 割肉吧。
:
: 3)
the
【在 v**********m 的大作中提到】
: Sadly, the truth is that the protein you are working on is likely to
: precipitate out by itself. The GST tag increases the solubility of the
: fusion protein.
: Man, doing protein expression is nothing more than gambling or trading stocks.
: 割肉吧。
:
: 3)
s*e
11 楼
换个真核的表达体系吧，或许会对folding有帮助，当然前提是值得这么去试
n*w
12 楼
谢谢楼上各位。
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