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请教转mRNA到细胞表达

请教转mRNA到细胞表达# Biology - 生物学

k*k2011-08-05 07:08

1 楼

Let’s just call it 11~12大潮
继4年前的07大潮之后,职业移民EB2又迎来了一个新的春天.
然而与之前不同的是, 这次的大潮虽然进展得有点出乎意料, 却远远比07大潮理性, 按
部就班.那些07, 08, 09年PD的同胞们,经历了历史上最黑暗的几年. 尤其是那些没有赶
上07大潮, 没有EAD, AP的人, 更是不幸中的不幸.不仅被50年来最大经济危机煎熬,过
着提心掉胆的生活. 还要忍受亲人分离, 孤独寂寞的痛楚. 在这个过程中,很多人都因
为失去工作,不得不变卖家财,打道回府,背井离乡. 多少年在美国建立的根基,连根拔除
. 那些能够SURVIVE下来的硕果仅存, 相信也忍了很多常人所不能忍之气, 受了很多常
人所不能受之苦.
EB移民这条漫漫长路,从一个TOEFL, GRE, GMAT开始, 燃烧了我们的青春,耗尽了我们的
激情. 为了追求美好生活,为了子孙后代,我们义无反顾的选择了这条路.对很多人来说,
这是一条不归路, 因为一旦做出决定, 你就有可能冒着竹篮打水一场空的危险. 今天,
我们终于可以昂首挺胸的说,这条路快走完了. 坚韧加运气,我们终于走到了今天. 回头
望望, 物是人非,一路上倒下了多少同志, 而美国,也不再是我们5年,8年,甚至10年前认
识的美国.
07, 08, 09PD的EB2们.祝贺你们! “Been there, done there”. 10, 11的新人们, 希
望就在前方.也许你们再也不必重复我们曾经的等待.你们也将迎来属于自己的春天.

s*n2011-08-05 07:08

2 楼

前男友。都说金牛爱财如命，可是他不是。对金钱方面大大咧咧的，基本上每学期都会
为我多花钱。其实他家也不是有钱人。比较喜欢打麻将，也容易赢钱。可能是金牛座
吸金？
后来大学毕业，去了杭州，当了律师，现在买了房子车子。最后一次打电话说短短一年
，长了十多斤，天天应酬啊。。。
下铺的小女生也是这个座的。爱财啊。。。但是不是让人讨厌那种，只是比较节约。长
得不漂亮，但是学习相当刻苦，后来考了研究生，再后来就不知道了。人很好，对我这
个上铺的家伙很容忍啦。还记得我们一起去买内衣～～～她是个没胸的小金牛啦
因为他俩，所以对这个星座的人印象都不错。
金牛们，你们一定要幸福啊

K*r2011-08-05 07:08

3 楼

谨以此歌献给正在唱将要唱英文歌的春爷们儿同行们

k*g2011-08-05 07:08

4 楼

大家的邮件有没有按照邮寄人，日期，地址，主题，然后分别建立目录，更改文件名？

f*i2011-08-05 07:08

5 楼

不过暂时还无法从fedex的网站查到
用了那个军队的号码
买的时候已经没有16GB了
订了两台32GB，用了30off的coupon
HP给了两个tracking number，估计是分别寄出来
Online Order 08/19/2011, 10:06:27 PDT

l*g2011-08-05 07:08

6 楼

以前用invitrogen的lipofectamine RNAiMAX转EFP的mRNA，效果不错，但是经常也有第
二天看不见GFP的情况（半衰期短的EGFP）。最近用同一管RNAiMAX，转的效果奇差，只
看得见一点的荧光。不知道是不是RNAiMAX变坏了还是咋的。不到一年，没有过期。
mRNA跑胶，浓度都挺好。opti-medium换了，但是除了Glutamine换成glutamax没有大差
别。请问有什么建议，除了RNAimax，其它有甚么好的推荐？

f*u2011-08-05 07:08

7 楼

I*42011-08-05 07:08

8 楼

嗯嗯，金牛座越看越好啊貌似

k*g2011-08-05 07:08

9 楼

tag, search 大势所趋

l*g2011-08-05 07:08

10 楼

为啥我的18922还没更新状态呢？
我们居然定的一抹一样，两个32G的，我也用了那个coupon.

j*x2011-08-05 07:08

11 楼

效果最好自然是电转

【在 l*****g 的大作中提到】

: 以前用invitrogen的lipofectamine RNAiMAX转EFP的mRNA，效果不错，但是经常也有第
: 二天看不见GFP的情况（半衰期短的EGFP）。最近用同一管RNAiMAX，转的效果奇差，只
: 看得见一点的荧光。不知道是不是RNAiMAX变坏了还是咋的。不到一年，没有过期。
: mRNA跑胶，浓度都挺好。opti-medium换了，但是除了Glutamine换成glutamax没有大差
: 别。请问有什么建议，除了RNAimax，其它有甚么好的推荐？

c*m2011-08-05 07:08

12 楼

re
希望下个月能排到我

l*k2011-08-05 07:08

13 楼

不错不错
金牛男比金女女有市场呀
赶紧照照镜子，看了看bra的size
幸好我已经有长期饭票了，哈哈

【在 s*******n 的大作中提到】

: 前男友。都说金牛爱财如命，可是他不是。对金钱方面大大咧咧的，基本上每学期都会
: 为我多花钱。其实他家也不是有钱人。比较喜欢打麻将，也容易赢钱。可能是金牛座
: 吸金？
: 后来大学毕业，去了杭州，当了律师，现在买了房子车子。最后一次打电话说短短一年
: ，长了十多斤，天天应酬啊。。。
: 下铺的小女生也是这个座的。爱财啊。。。但是不是让人讨厌那种，只是比较节约。长
: 得不漂亮，但是学习相当刻苦，后来考了研究生，再后来就不知道了。人很好，对我这
: 个上铺的家伙很容忍啦。还记得我们一起去买内衣～～～她是个没胸的小金牛啦
: 因为他俩，所以对这个星座的人印象都不错。
: 金牛们，你们一定要幸福啊

z*e2011-08-05 07:08

14 楼

我始终认为iTunes是非常好用的，找一首歌时想到的是歌手名字，专辑名字，类别等，
而不是歌曲的文件名。尤其是在同步iPhone或iPad的时候。

N*m2011-08-05 07:08

15 楼

嗯

【在 f*******i 的大作中提到】

: 不过暂时还无法从fedex的网站查到
: 用了那个军队的号码
: 买的时候已经没有16GB了
: 订了两台32GB，用了30off的coupon
: HP给了两个tracking number，估计是分别寄出来
: Online Order 08/19/2011, 10:06:27 PDT

l*g2011-08-05 07:08

16 楼

谢谢建议。但是我的需要每天转，连续10天以上。细胞是attach的，不能电转

c*82011-08-05 07:08

17 楼

赞！

l*e2011-08-05 07:08

18 楼

大家没有收到信说是25号就能寄出来吗？
我的一个，给朋友的一个都会在周六到，
在HP订的人应该不用太担心吧。

i*n2011-08-05 07:08

19 楼

中文水平能保持这样很不错啊，现在让我写点作文和感慨什么的，还真要好长时间。
对啊，为那些在困境中挣扎了好久，最终C的EB2们祝福。
知道吗？很开心在这个班上吃包子，吃的越饱，说明开心的人越多。

f*i2011-08-05 07:08

20 楼

HP HOME到现在还没有cancel的单子，应该都没问题了
不知道是不是在不同的仓库处理发货，所以速度不一样

【在 l*******g 的大作中提到】

: 为啥我的18922还没更新状态呢？
: 我们居然定的一抹一样，两个32G的，我也用了那个coupon.

B*i2011-08-05 07:08

21 楼

赞，你是哪年的pd，这次的潮水把你卷进去了吧。其实办了绿卡，才真正读懂了小时
候读的一本书，---钢铁是怎样炼成的，钢铁是tnnd 的用一张绿纸片炼成，神马保尔
克差金，神马伤寒病，神马失去了冬妮娅的爱，那简直就是小儿科，真正的钢铁战士在
北美呀。

d*32011-08-05 07:08

22 楼

有可能号码和时间不完全对应的，我LD比我提前几分钟买，但是号比我的大

a*12011-08-05 07:08

23 楼

N*m2011-08-05 07:08

24 楼

fedex说26号到
不过看重量是纸

【在 l*******e 的大作中提到】

: 大家没有收到信说是25号就能寄出来吗？
: 我的一个，给朋友的一个都会在周六到，
: 在HP订的人应该不用太担心吧。

k*k2011-08-05 07:08

25 楼

我是07年9月的PD,两个月前就排到了.为了CURRENT这天,我整整等了4年多.今天,看到
这么多人CURRENT了,包括我办公室里面的一个中国同事,我的心情和他们一样的激动.也
许再过两,三个月,我就要与这个论坛告别了.我想在走之前献上我最后的祝福.

【在 B********i 的大作中提到】

: 赞，你是哪年的pd，这次的潮水把你卷进去了吧。其实办了绿卡，才真正读懂了小时
: 候读的一本书，---钢铁是怎样炼成的，钢铁是tnnd 的用一张绿纸片炼成，神马保尔
: 克差金，神马伤寒病，神马失去了冬妮娅的爱，那简直就是小儿科，真正的钢铁战士在
: 北美呀。

H*e2011-08-05 07:08

26 楼

18925也还没寄出来。。。

l*o2011-08-05 07:08

27 楼

写得不错，赞一个

s*y2011-08-05 07:08

28 楼

恭喜。
faint.
天知道HP怎么cancel订单的。我9:49 订单被cancel了。CSR信誓旦旦地说，那个时间点
以后的都没法拿到。。
变态的HP./

【在 f*******i 的大作中提到】

B*g2011-08-05 07:08

29 楼

不发包子不看

【在 k****k 的大作中提到】

: Let’s just call it 11~12大潮
: 继4年前的07大潮之后,职业移民EB2又迎来了一个新的春天.
: 然而与之前不同的是, 这次的大潮虽然进展得有点出乎意料, 却远远比07大潮理性, 按
: 部就班.那些07, 08, 09年PD的同胞们,经历了历史上最黑暗的几年. 尤其是那些没有赶
: 上07大潮, 没有EAD, AP的人, 更是不幸中的不幸.不仅被50年来最大经济危机煎熬,过
: 着提心掉胆的生活. 还要忍受亲人分离, 孤独寂寞的痛楚. 在这个过程中,很多人都因
: 为失去工作,不得不变卖家财,打道回府,背井离乡. 多少年在美国建立的根基,连根拔除
: . 那些能够SURVIVE下来的硕果仅存, 相信也忍了很多常人所不能忍之气, 受了很多常
: 人所不能受之苦.
: EB移民这条漫漫长路,从一个TOEFL, GRE, GMAT开始, 燃烧了我们的青春,耗尽了我们的

h*a2011-08-05 07:08

30 楼

118920xxx完全木有消息啊。。。
哭。。。

B*i2011-08-05 07:08

31 楼

我是07年8月的，也没赶上大潮，和很多人一样经历07年perm 的群audit,08的裁员，09
年的合并，被买，再合并，到现在的起死回生，环顾左右，物是人非。就想说，能活下
来真好。很为08，09 的朋友高兴，毕竟大家都经历屋外的冰天雪地。但实话实说，我
们这拨人是最倒霉的，这么大的人潮，我已经做好了case 会delay 的准备。

m*22011-08-05 07:08

32 楼

118918xxx co没消息

i*d2011-08-05 07:08

33 楼

写得象大报的头版社论一样，要赞！

【在 k****k 的大作中提到】

f*n2011-08-05 07:08

34 楼

118922***已经ship,用了COUPON和CODE
另一个118920***还没动静
都是HP HOME的单.
大家淡定,只要没砍都会有的.

k*k2011-08-05 07:08

35 楼

排期继续前进其实是好事，至少下个月不会倒退。我预测一些10月，11月NSC交485的人
会在2月份拿到绿卡。至于2007年的PD，今年拿绿卡是早晚的事。

09

【在 B********i 的大作中提到】

: 我是07年8月的，也没赶上大潮，和很多人一样经历07年perm 的群audit,08的裁员，09
: 年的合并，被买，再合并，到现在的起死回生，环顾左右，物是人非。就想说，能活下
: 来真好。很为08，09 的朋友高兴，毕竟大家都经历屋外的冰天雪地。但实话实说，我
: 们这拨人是最倒霉的，这么大的人潮，我已经做好了case 会delay 的准备。

N*m2011-08-05 07:08

36 楼

嗯，我都不急
急也没有用

【在 f********n 的大作中提到】

: 118922***已经ship,用了COUPON和CODE
: 另一个118920***还没动静
: 都是HP HOME的单.
: 大家淡定,只要没砍都会有的.

w*t2011-08-05 07:08

37 楼

ding...LOL...

【在 B********i 的大作中提到】

b*g2011-08-05 07:08

38 楼

H118924没动静，555555，快出来八,否则来不及收到了

c*s2011-08-05 07:08

39 楼

借你吉言，10年6月15日的下个月希望能curernt，如果真是的话，几月份能拿到AP，几
月份能拿到绿卡呢，我想拿到绿卡或者AP后年内回趟国

【在 k****k 的大作中提到】

: 排期继续前进其实是好事，至少下个月不会倒退。我预测一些10月，11月NSC交485的人
: 会在2月份拿到绿卡。至于2007年的PD，今年拿绿卡是早晚的事。
:
: 09

d*r2011-08-05 07:08

40 楼

我的H118908和H118910寄出了，H118923还没动静。每一单都只买了一个。话说H118923
我还不小心写错地址了……郁闷

a*d2011-08-05 07:08

41 楼

zan

h*o2011-08-05 07:08

42 楼

跟LZ情况一样，H118925xxx，2个32G分别给了一个Tracking number，可能32G的处理速
度快一点？

B*g2011-08-05 07:08

43 楼

你是敏感专业？

的人

【在 c*******s 的大作中提到】

: 借你吉言，10年6月15日的下个月希望能curernt，如果真是的话，几月份能拿到AP，几
: 月份能拿到绿卡呢，我想拿到绿卡或者AP后年内回趟国

c*s2011-08-05 07:08

44 楼

不是，以前回国几次了，就是免得跑到北京去签证了，为了方便

【在 B*****g 的大作中提到】

: 你是敏感专业？
:
: 的人

a*n2011-08-05 07:08

45 楼

你是文科男吗，文采真不错
my PD is 2007-9 too, good luck to all!

【在 k****k 的大作中提到】

: 我是07年9月的PD,两个月前就排到了.为了CURRENT这天,我整整等了4年多.今天,看到
: 这么多人CURRENT了,包括我办公室里面的一个中国同事,我的心情和他们一样的激动.也
: 许再过两,三个月,我就要与这个论坛告别了.我想在走之前献上我最后的祝福.

O*U2011-08-05 07:08

46 楼

11年也很激动

y*z2011-08-05 07:08

47 楼

re

【在 k****k 的大作中提到】

k*k2011-08-05 07:08

48 楼

我喜欢把心里面想的写出来。相逢何必曾相识，我是9月25日的PD

【在 a***n 的大作中提到】

: 你是文科男吗，文采真不错
: my PD is 2007-9 too, good luck to all!

m*o2011-08-05 07:08

49 楼

欢迎新人们！

f*i2011-08-05 07:08

50 楼

感谢好文。EB2们如果留在国内也都应该混得不错，GC这条路走得大家心力憔悴。单单
公司一关就让人掉层皮。
请问LZ，据您对07大潮和这次高潮的观察，10和11年的EB2们的拿卡速度就会快些吗？
我理解当年因为大潮，很多07年的兄弟们不能申请EDA和AP，不过当时如果不放水，如
果一步步来，不是也要处理4年吗？

b*12011-08-05 07:08

51 楼

C*X2011-08-05 07:08

52 楼

Good Luck to ALL!

k*k2011-08-05 07:08

53 楼

个人认为，10， 11年PD今后拿绿卡将会比较快，也许不超过2年排期就能到。07大潮是
移民局在短时间内（1个月）的冲动行为(没有理由的），不仅开放了EB2，包括EB3， EB4， EB5等都完全开放，后来移民局也很后悔。07大潮直接的结果是导致短时间内大量的人挤进去，07大潮很多人是NIW就是典型的例子，就好像挤公共汽车，一开始大家都排队，后来车门一开，司机说，你们谁挤进来谁就坐上车。这些人本来可以按正常速度递交申请，这样
DEMAND就不会那么高，导致错过大潮的人和08年初的4年多都没有机会申请EAD。很多
人在经济危机的时候因为失去工作含恨离美。07大潮是错误的时间，错误的地点作出的
错误决定。

【在 f****i 的大作中提到】

: 感谢好文。EB2们如果留在国内也都应该混得不错，GC这条路走得大家心力憔悴。单单
: 公司一关就让人掉层皮。
: 请问LZ，据您对07大潮和这次高潮的观察，10和11年的EB2们的拿卡速度就会快些吗？
: 我理解当年因为大潮，很多07年的兄弟们不能申请EDA和AP，不过当时如果不放水，如
: 果一步步来，不是也要处理4年吗？

f*i2011-08-05 07:08

54 楼

谢谢LZ的解释。祝您早日拿到卡。
说实在的，很多人拿到卡后基本没有热情了，为了它付出的很多很多。与其说是实现了
美国梦，不如说是对失去的做了点补偿。
再次感谢！

EB4， EB5等都完全开放，后来移民局也很后悔。07大潮直接的结果是导致短时间内大
量的人挤进去，07大潮很多人是NIW就是典型的例子。这些人本来可以按正常速度递交
申请，这样

【在 k****k 的大作中提到】

: 个人认为，10， 11年PD今后拿绿卡将会比较快，也许不超过2年排期就能到。07大潮是
: 移民局在短时间内（1个月）的冲动行为(没有理由的），不仅开放了EB2，包括EB3， EB4， EB5等都完全开放，后来移民局也很后悔。07大潮直接的结果是导致短时间内大量的人挤进去，07大潮很多人是NIW就是典型的例子，就好像挤公共汽车，一开始大家都排队，后来车门一开，司机说，你们谁挤进来谁就坐上车。这些人本来可以按正常速度递交申请，这样
: DEMAND就不会那么高，导致错过大潮的人和08年初的4年多都没有机会申请EAD。很多
: 人在经济危机的时候因为失去工作含恨离美。07大潮是错误的时间，错误的地点作出的
: 错误决定。

k*k2011-08-05 07:08

55 楼

其实对很多人来说，追求绿卡既是追求自己的梦想，也是和自己斗气。这么多年来，美
国早已是物是人非，绿卡也没有以前那么多光环了。但我们为了这张卡付出了太多，如
果就这么轻言放弃，如何咽的下这口气？我们的青春，我们的理想谁来补偿？绿卡既是很多人的梦想，也是很多人心中的魔障。

【在 f****i 的大作中提到】

: 谢谢LZ的解释。祝您早日拿到卡。
: 说实在的，很多人拿到卡后基本没有热情了，为了它付出的很多很多。与其说是实现了
: 美国梦，不如说是对失去的做了点补偿。
: 再次感谢！
:
: EB4， EB5等都完全开放，后来移民局也很后悔。07大潮直接的结果是导致短时间内大
: 量的人挤进去，07大潮很多人是NIW就是典型的例子。这些人本来可以按正常速度递交
: 申请，这样

f*i2011-08-05 07:08

56 楼

是呀，美国已经是物是人非了。当年选择来这，放弃了很多东西。来了后，又付出了很
多。得失之间，只剩下无奈。好在下一代比我们幸福，等将来给儿孙们讲讲绿卡的故事
吧。

k*k2011-08-05 07:08

57 楼

所以说是一条不归路。其实我们将来还得过一关，那就是选择放弃/保留中国国籍还是
加入美国国籍的问题。那时候可真是过了那个村，就没有这个店了。人生是矛盾的，我
们这些第一代移民就更矛盾了.

【在 f****i 的大作中提到】

: 是呀，美国已经是物是人非了。当年选择来这，放弃了很多东西。来了后，又付出了很
: 多。得失之间，只剩下无奈。好在下一代比我们幸福，等将来给儿孙们讲讲绿卡的故事
: 吧。

a*12011-08-05 07:08

58 楼

re

【在 k****k 的大作中提到】

: 所以说是一条不归路。其实我们将来还得过一关，那就是选择放弃/保留中国国籍还是
: 加入美国国籍的问题。那时候可真是过了那个村，就没有这个店了。人生是矛盾的，我
: 们这些第一代移民就更矛盾了.

a*92011-08-05 07:08

59 楼

顶，真性情也！

y*32011-08-05 07:08

60 楼

定

【在 k****k 的大作中提到】