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哪种方法可以一次克隆几个片段到质粒里?
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哪种方法可以一次克隆几个片段到质粒里?# Biology - 生物学
m*l
1
你们继续掐
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y*i
2
真人真事之九:妙法治验
我们虽然行医十多年,纯医学方面的造诣不深,但是据世界卫生组织认可的“生理心理
社会”医学模式来看,我们也碰巧治好了许多疑难病症。
朱迪思是一个28岁的已婚女孩,患甲状腺疾病三年,服药不效,失眠、抑郁、落发……
我们问她病是怎么得上的?她说,三年前她父亲一出家门口就被不知道从哪里来的一伙
人开枪打死了。此后全家开始了漫长的调查、听证,却毫无结果,由此就患病了。我们
对她讲,据我们理解,这个案子是在错误的时间、错误的地点、遇到了错误的人。按卢
台长说,就是没有道理,只有因果,因此应该放弃这个案子,好好生活。可是她如何放
得下呢?我们说,你写封信给爸爸问他你该如何做,写好了烧掉,等待他给你托梦,他
一定会通过梦告诉你的。她非常惊讶地说,她曾两次不同时间梦到自己的爸爸,对她说
:孩子啊,不要再调查了,我不恨任何人,我在一个很好的地方,你保重身体,不要再
管这个案子了。我们说,这是真的!虽然你是天主教徒,但是并不是真的相信天堂和天
使,现在是该真信的时候了!此后,她真的放下了,连续来就诊4次,每次都比先前更
好,药停了,化验正常了,一年后怀孕生下健康宝宝……
莫妮卡32岁,突作心悸,每天发作3到4次,去看心脏科专家,大夫说:根据各项检查,
她的心脏功能正常。她既然没有心脏病,也不到更年期,为什么会心悸?按卢台长教导
的,很有可能是灵性病,于是我就试探地问她,你有没有过流产?她当时就哭了,说去
年流了一个月的胚胎。我说很有可能是这个孩子的灵性导致的心悸,你要给他念玫瑰经
49遍,他收到玫瑰经会给你托梦的。说到梦,她就又哭了,说:最近老是梦到自己在胸
前抱着一个婴儿……两周后她又来就诊,精神面貌完全不同了,说已经念经了,15天来
只发作了两次心悸。以前我们给一个更年期心悸的患者扎针,治疗了半年才见好,现在
这个病人靠念经这么快就好转很多,不能不说妙。
62岁的老妈妈胡安娜,三个月来尿道口痛,解小便时痛,不解小便也痛,白天痛,晚上
也痛,夜里痛得睡不着觉。看了三个泌尿系专家,每次都服用更强大的抗生素及止痛药
,却没有任何效果!我们对她讲,这种病我们见过类似的,不是普通的泌感,但是没有
治好过。她非常沮丧,因为有三怕:怕大夫用膀胱镜检查,怕查出癌症,怕手术切除…
…我们说,如果您愿意扎针灸治疗,就一定要配合念玫瑰经,要信任圣母瓜达卢贝,向
她许愿念100部玫瑰经。她老人家觉得100部太多了,就只许愿了60部。即使她只许愿念
60部经,也发生了奇迹。第一周后,其痛减大半,可以睡觉了;第二周后,痛失!但第
三周,疼痛再起!她就又很沮丧,说:我听了你们的话,做了所有该做的,这样也不管
用,我可该怎么办呀?!我说,据我的经验,既然您三个月来都没有过好转,通过念经
有好转了,说明这个方法管用,您不能说不管用,您应该为此向圣母忏悔,您不能失去
对圣母的信任!后来她真的忏悔了,不但是因为对圣母不信任而忏悔,还向自己亡故的
母亲忏悔了。据她讲,因为她夜里痛得无法睡觉,就想起来当年母亲病重的时候,夜里
也痛得睡不着,总是“哎呦、哎呦……”地呻吟。她当时想,怎么可能那么疼呢,都吃
了止疼药了,她一定是靠这个来吸引我们这些儿女的注意力,寻求心理安慰……可是现
在轮到自己这样痛,她后悔自己当年的想法和做法,所以跪在妈妈相片前,向妈妈忏悔
!并且听我们的建议,为已故的妈妈念经。这一次,她的痛真的止住了,完全治愈,没
有再反复,尽管我们最后都不知道她得的是什么病。
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b*x
3
I want to assemble a gene from three PCR fragments into one plasmid.
Clonetech 有个kit,试用了但从未成功过。望不吝赐教。
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q*n
4
不看不行。谢
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j*x
5
设计好酶切位点几个片段丢一起直接连接就行了,和普通连接一样没啥可讲究的,关键
是处理好每个PCR产物,酶切要尽可能彻底。
实在不行就一个片段一个片段的连接,其实相比起来也耽误不了几天时间
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n*k
6
for not very big fragments, what the 2L said works well with 3 fragments or even
more, I never tried more than 4 though. For big fragments, could be harder..
.alternatively, fusion PCR, many of this kind of cloning can be done in a
single fusion-PCR reaction...

【在 b**x 的大作中提到】
: I want to assemble a gene from three PCR fragments into one plasmid.
: Clonetech 有个kit,试用了但从未成功过。望不吝赐教。

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s*n
7
sLIC.
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b*x
8
I have seen publications about sLIC. Did it work as well
as advertised? The Clonetech kit was a huge disappointment
even though their Ads made it sound so easy.

【在 s********n 的大作中提到】
: sLIC.
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s*n
9
If you could gel purify the fragments, the efficiency is really high. We use
this technique a lot here.
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b*x
10
Thanks a lot, SmartKevin.
Did you follow the 2007 Nature Biotech paper by Elledge or some other
paper? Did you use RecA- strain or regular strains? If you have a protocol
to spare, 站内通信。

use

【在 s********n 的大作中提到】
: If you could gel purify the fragments, the efficiency is really high. We use
: this technique a lot here.

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s*n
11
I usually use LIC to clone genes (single fragments). However, I know other
people here use the same protocol as you mentioned. Gel-purification is key
for sLIC.

【在 b**x 的大作中提到】
: Thanks a lot, SmartKevin.
: Did you follow the 2007 Nature Biotech paper by Elledge or some other
: paper? Did you use RecA- strain or regular strains? If you have a protocol
: to spare, 站内通信。
:
: use

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