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怎么克隆出未知基因,真心请教各位牛人们
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怎么克隆出未知基因,真心请教各位牛人们# Biology - 生物学
y*o
1
我申请的OPT开始时间(I-20上显示的)是 2/15/2010-2/14/2011
按理说90d of unemployment 到 5/10/2010就到期了。我需要在这之前有工作的。
但是因为第一次寄出去的材料的I-20忘记签名了(汗一下),所以补寄了一次。中间大
概有一个星期的
gap。到现在还没有收到卡。 查USCIS说我的card是 05/11/2010 issue/production的。
我想问我现在应该怎样做? 需要通知USCIS加急? 还是应该和学校的i-center说情况
呢?
最近也有一个比较重要的面试,如果拿到offer却没有EAD卡,又该如何办理加急手续呢
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c*3
2
【 以下文字转载自 WorldNews 讨论区 】
发信人: controlitok (粗鄙无文的工科生), 信区: WorldNews
标 题: Re: 印度12岁女中学生当小学校长 教授50名学生
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Apr 20 11:37:36 2010, 美东)
我在一农村里给我一学校钱,我现在还怀疑是不是被骗了..
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j*w
3
实验遇到困难了,试了很多方法没解决,现在真心求教。是这样的,一个交配功能基因
在其他所有的真菌上都存在而且已经被克隆出来了。但是在我研究的这个属类还没人能
做出来,主要是这个基因差异太大,我用最邻近种设计了简并引物也没PCR出来任何有
相关的东西。
有没有人做过,在不知道这个基因序列的情况下得到这个基因序列呢?
我现在的想法是:在这个基因的上下游找更保守的别的基因序列设计出简并引物,然后
PCR以及NDA walking 等方式。不知道可不可行?还有没有其他更好的方法?
多谢了!
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y*o
4
版上没有大虾知道吗
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y*n
5
至少比文盲强点啊。
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m*5
6
这情况做个southern first

【在 j***w 的大作中提到】
: 实验遇到困难了,试了很多方法没解决,现在真心求教。是这样的,一个交配功能基因
: 在其他所有的真菌上都存在而且已经被克隆出来了。但是在我研究的这个属类还没人能
: 做出来,主要是这个基因差异太大,我用最邻近种设计了简并引物也没PCR出来任何有
: 相关的东西。
: 有没有人做过,在不知道这个基因序列的情况下得到这个基因序列呢?
: 我现在的想法是:在这个基因的上下游找更保守的别的基因序列设计出简并引物,然后
: PCR以及NDA walking 等方式。不知道可不可行?还有没有其他更好的方法?
: 多谢了!

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N*d
7
同问,没人知道吗?
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h*n
8
用BAC 做PCR
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y*o
9
我晕,下午状态还是 Document production or Oath Ceremony
现在竟然变成了 Post-Decision Activity
还能倒退的呢???
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m*5
10
楼主的问题是不知道要订哪个bac吧

【在 h*****n 的大作中提到】
: 用BAC 做PCR
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w*n
11
can you clone by function/complementation?
if the gene mutation in a known species can lead to a phenotype, you can
prepare a cDNA library from your species, and then introduce your cDNA
library into the mutant to identify the cDNAs that can rescue the phenotype.
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b*n
12
如果时间更重要,直接花一笔钱去全基因组测序(估计6000美刀左右,也就是博后两个
月工资)
拿到contig之后都不用gap closure
直接用已知的真菌交配功能基因去blast
这个策略基本上能搞定
不要以为是高射炮打蚊子
基因组测序一篇文章,克隆基因一篇文章

【在 j***w 的大作中提到】
: 实验遇到困难了,试了很多方法没解决,现在真心求教。是这样的,一个交配功能基因
: 在其他所有的真菌上都存在而且已经被克隆出来了。但是在我研究的这个属类还没人能
: 做出来,主要是这个基因差异太大,我用最邻近种设计了简并引物也没PCR出来任何有
: 相关的东西。
: 有没有人做过,在不知道这个基因序列的情况下得到这个基因序列呢?
: 我现在的想法是:在这个基因的上下游找更保守的别的基因序列设计出简并引物,然后
: PCR以及NDA walking 等方式。不知道可不可行?还有没有其他更好的方法?
: 多谢了!

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b*n
13
在真菌中操作估计比在E.coli中效率低太多了

phenotype.

【在 w*****n 的大作中提到】
: can you clone by function/complementation?
: if the gene mutation in a known species can lead to a phenotype, you can
: prepare a cDNA library from your species, and then introduce your cDNA
: library into the mutant to identify the cDNAs that can rescue the phenotype.

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t*p
14
nod。
花那么多时间折腾的钱,不如这个实惠。

【在 b******n 的大作中提到】
: 如果时间更重要,直接花一笔钱去全基因组测序(估计6000美刀左右,也就是博后两个
: 月工资)
: 拿到contig之后都不用gap closure
: 直接用已知的真菌交配功能基因去blast
: 这个策略基本上能搞定
: 不要以为是高射炮打蚊子
: 基因组测序一篇文章,克隆基因一篇文章

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m*5
15
很酷,学到了

【在 b******n 的大作中提到】
: 如果时间更重要,直接花一笔钱去全基因组测序(估计6000美刀左右,也就是博后两个
: 月工资)
: 拿到contig之后都不用gap closure
: 直接用已知的真菌交配功能基因去blast
: 这个策略基本上能搞定
: 不要以为是高射炮打蚊子
: 基因组测序一篇文章,克隆基因一篇文章

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s*s
16
nice.
btw, 如果有facility的话就更便宜了,听说我们系是library+seq也就800不到,
不知道是指那台机器,不过就算gaII也够了

【在 b******n 的大作中提到】
: 如果时间更重要,直接花一笔钱去全基因组测序(估计6000美刀左右,也就是博后两个
: 月工资)
: 拿到contig之后都不用gap closure
: 直接用已知的真菌交配功能基因去blast
: 这个策略基本上能搞定
: 不要以为是高射炮打蚊子
: 基因组测序一篇文章,克隆基因一篇文章

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d*m
17
LS几位说的很好啊,这年头,用genomic walking克隆未知基因效率太低了,以前用这
种方法花3年克隆出几个基因,研究下功能,发个牛文章了。
现在就算花一年PCR克隆出来也不值啊,老板也不太乐意接受的。直接测序吧
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s*l
18
这样测个序一片文章,基因克隆出来一片文章,那也太过分了吧。

【在 b******n 的大作中提到】
: 如果时间更重要,直接花一笔钱去全基因组测序(估计6000美刀左右,也就是博后两个
: 月工资)
: 拿到contig之后都不用gap closure
: 直接用已知的真菌交配功能基因去blast
: 这个策略基本上能搞定
: 不要以为是高射炮打蚊子
: 基因组测序一篇文章,克隆基因一篇文章

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j*w
19
真菌全序列测序这么便宜?如果是真的可以考虑叫老板联合其他老板申请funding来做。
其实研究这个菌的人还听多的,不知道为啥至今没有全序列,我原来也想过,以为很贵
就没考虑。
谢谢

【在 b******n 的大作中提到】
: 如果时间更重要,直接花一笔钱去全基因组测序(估计6000美刀左右,也就是博后两个
: 月工资)
: 拿到contig之后都不用gap closure
: 直接用已知的真菌交配功能基因去blast
: 这个策略基本上能搞定
: 不要以为是高射炮打蚊子
: 基因组测序一篇文章,克隆基因一篇文章

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s*s
20
给你设计pcr做引物那就很便宜啦,如果构建基因组序列那要贵点

做。

【在 j***w 的大作中提到】
: 真菌全序列测序这么便宜?如果是真的可以考虑叫老板联合其他老板申请funding来做。
: 其实研究这个菌的人还听多的,不知道为啥至今没有全序列,我原来也想过,以为很贵
: 就没考虑。
: 谢谢

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