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请教一个带NICK的PCR的问题，折腾了快3个月了

请教一个带NICK的PCR的问题，折腾了快3个月了# Biology - 生物学

c*72014-03-30 07:03

1 楼

这个坑为什么挖不起来呢？
我郁闷了。。。
【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
发信人: csboy2007 (我叫包守腿。。来自火星的宇宙无敌包子控), 信区: WaterWorld
标题: 为什么美国人38妇女节不放假呢？
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 8 10:57:04 2011, 美东)
在国内的时候，虽然不是说全天吧。
但是总有个半天。
而且在学校的时候，大家运气好，就跟着女老师们一起放假了。
到了单位，女同事还有礼物，国企里头，连已婚男生都发礼物，也放假的。
虽不说礼物多好多坏，但是毕竟有过节的感觉，是对职业女性的一种认同和肯定。
为啥美国不放假呢？

e*o2014-03-30 07:03

2 楼

PCR扩增一个DNA片段.由于涉及2次酶切连接（建库测序用的）。这段DNA上带有4个NICK
。想了很多办法去补缺口。都没有成功。不知道各位大侠是否好的建议，用什么方法能
将这个DNA链上的4个NICK补齐，然后PCR.谢谢

b*e2014-03-30 07:03

3 楼

这是国际妇女节，美国从来都不是国际的一部分，国际劳动节，儿童节都不放的

WaterWorld

【在 c*******7 的大作中提到】

: 这个坑为什么挖不起来呢？
: 我郁闷了。。。
: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: csboy2007 (我叫包守腿。。来自火星的宇宙无敌包子控), 信区: WaterWorld
: 标题: 为什么美国人38妇女节不放假呢？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 8 10:57:04 2011, 美东)
: 在国内的时候，虽然不是说全天吧。
: 但是总有个半天。
: 而且在学校的时候，大家运气好，就跟着女老师们一起放假了。
: 到了单位，女同事还有礼物，国企里头，连已婚男生都发礼物，也放假的。

l*y2014-03-30 07:03

4 楼

每一段多大
怎么做出来的片段
试了点啥方法
信息给的越多别人才能帮你

NICK

【在 e***o 的大作中提到】

: PCR扩增一个DNA片段.由于涉及2次酶切连接（建库测序用的）。这段DNA上带有4个NICK
: 。想了很多办法去补缺口。都没有成功。不知道各位大侠是否好的建议，用什么方法能
: 将这个DNA链上的4个NICK补齐，然后PCR.谢谢

c*72014-03-30 07:03

5 楼

那为啥愚人节是放假的呢？

【在 b*****e 的大作中提到】

: 这是国际妇女节，美国从来都不是国际的一部分，国际劳动节，儿童节都不放的
:
: WaterWorld

e*o2014-03-30 07:03

6 楼

切口的产生是因为建库的时候，需要连接一个linker，然后还要连接测序adapter. 为
了避免linker和adapter自连，linker以及连接测序的adapter没有磷酸化。由于切口两
端都是羟基，不能用连接酶连接，切口平移也失效（正义链的切刻和反义链的切刻会在
DNA链中间遇到而使链断裂）。
请各位指教！

s*r2014-03-30 07:03

7 楼

单给妇女放假是歧视妇女。

l*12014-03-30 07:03

8 楼

Cas9?
if yes, try this link:
>http://zlab.mit.edu/assets/reprints/Ran_FA_Nat_Protoc_2013.pdf

【在 e***o 的大作中提到】

: 切口的产生是因为建库的时候，需要连接一个linker，然后还要连接测序adapter. 为
: 了避免linker和adapter自连，linker以及连接测序的adapter没有磷酸化。由于切口两
: 端都是羟基，不能用连接酶连接，切口平移也失效（正义链的切刻和反义链的切刻会在
: DNA链中间遇到而使链断裂）。
: 请各位指教！

b*e2014-03-30 07:03

9 楼

不是国际愚人节

【在 c*******7 的大作中提到】

: 那为啥愚人节是放假的呢？