c*u
2 楼
我是直接在webofsicence上search 然后打印第一页 . 有什么好的idea?
谢谢.
谢谢.
M*c
3 楼
【 以下文字转载自 LeisureTime 讨论区 】
发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
标 题: 《Black Mass》
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
看了《Black Mass》，描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演，Johnny Depp饰演狡猾
又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger，利用小时玩伴，现在的FBI探员来扩展自己的势
力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落，风格写实。推荐。
发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
标 题: 《Black Mass》
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
看了《Black Mass》，描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演，Johnny Depp饰演狡猾
又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger，利用小时玩伴，现在的FBI探员来扩展自己的势
力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落，风格写实。推荐。
v*a
4 楼
用PCR检测都是有的，但如果设计primer针对全长的蛋白就大多sample都无法克隆出。
大家遇到过类似的事吗？该如何解决呢？谢谢！
大家遇到过类似的事吗？该如何解决呢？谢谢！
P*0
5 楼
What's your budget?
【在 B***r 的大作中提到】
: 求 推荐。
: 是不是 brooksbrothers算是比较贵的？
: 谢谢。
【在 B***r 的大作中提到】
: 求 推荐。
: 是不是 brooksbrothers算是比较贵的？
: 谢谢。
l*5
6 楼
看看俺老大的超长贴子, 里面有如何处理CITATION
D*r
7 楼
都上映了啊
我认识一个人在里面客串一个小角色，我去看看有没有他
我认识一个人在里面客串一个小角色，我去看看有没有他
b*o
8 楼
能不能把如何克隆的说的清楚些，这样的描述很难给你提供帮助呀。
B*r
9 楼
at most 400$ or so.
(i actually don't have a budget...)
are those more expensive 400$ really better?
(i actually don't have a budget...)
are those more expensive 400$ really better?
x*o
10 楼
很好看
I*a
11 楼
没看懂，
请把问题讲清楚一点，自己明白问题，别人不明白是没用的。
请把问题讲清楚一点，自己明白问题，别人不明白是没用的。
P*0
12 楼
一分钱一分货。400快brooks brothers on sale的时候说不定有。
【在 B***r 的大作中提到】
: at most 400$ or so.
: (i actually don't have a budget...)
: are those more expensive 400$ really better?
【在 B***r 的大作中提到】
: at most 400$ or so.
: (i actually don't have a budget...)
: are those more expensive 400$ really better?
M*c
13 楼
【 以下文字转载自 LeisureTime 讨论区 】
发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
标 题: 《Black Mass》
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
看了《Black Mass》，描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演，Johnny Depp饰演狡猾
又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger，利用小时玩伴，现在的FBI探员来扩展自己的势
力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落，风格写实。推荐。
发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
标 题: 《Black Mass》
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
看了《Black Mass》，描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演，Johnny Depp饰演狡猾
又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger，利用小时玩伴，现在的FBI探员来扩展自己的势
力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落，风格写实。推荐。
v*a
14 楼
抱歉没有讲清楚。情况是这样的：拿不同cDNA sample做模板，PCR一个gene（非全长）
，大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带（经过测序验证）。然后想用PCR的
方法得到全长的该gene，设计flank该gene两端的引物后，却几乎得不到任何条带。做
到现在，试了自己的sample，也拿别人做的cDNA试（大约20多个来源不同的cDNA
sample)，只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
，所以还需要尝试更多，但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
【在 b*****o 的大作中提到】
: 能不能把如何克隆的说的清楚些，这样的描述很难给你提供帮助呀。
，大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带（经过测序验证）。然后想用PCR的
方法得到全长的该gene，设计flank该gene两端的引物后，却几乎得不到任何条带。做
到现在，试了自己的sample，也拿别人做的cDNA试（大约20多个来源不同的cDNA
sample)，只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
，所以还需要尝试更多，但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
【在 b*****o 的大作中提到】
: 能不能把如何克隆的说的清楚些，这样的描述很难给你提供帮助呀。
B*r
15 楼
Brooksbrothers factory store里的东西availability 是不是跟网上差不多？
D*r
16 楼
都上映了啊
我认识一个人在里面客串一个小角色，我去看看有没有他
我认识一个人在里面客串一个小角色，我去看看有没有他
v*a
17 楼
谢谢！重新写了，看看行不？
【在 I***a 的大作中提到】
: 没看懂，
: 请把问题讲清楚一点，自己明白问题，别人不明白是没用的。
【在 I***a 的大作中提到】
: 没看懂，
: 请把问题讲清楚一点，自己明白问题，别人不明白是没用的。
P*0
18 楼
Not sure.不过西服这东西一定要合身，要到店里让他量。
【在 B***r 的大作中提到】
: Brooksbrothers factory store里的东西availability 是不是跟网上差不多？
【在 B***r 的大作中提到】
: Brooksbrothers factory store里的东西availability 是不是跟网上差不多？
x*o
19 楼
很好看
b*n
20 楼
先连到T-easy或者Topo等克隆载体上面再做亚克隆吧
你想克隆的片段多大？
【在 v***a 的大作中提到】
: 抱歉没有讲清楚。情况是这样的：拿不同cDNA sample做模板，PCR一个gene（非全长）
: ，大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带（经过测序验证）。然后想用PCR的
: 方法得到全长的该gene，设计flank该gene两端的引物后，却几乎得不到任何条带。做
: 到现在，试了自己的sample，也拿别人做的cDNA试（大约20多个来源不同的cDNA
: sample)，只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
: ，所以还需要尝试更多，但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
你想克隆的片段多大？
【在 v***a 的大作中提到】
: 抱歉没有讲清楚。情况是这样的：拿不同cDNA sample做模板，PCR一个gene（非全长）
: ，大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带（经过测序验证）。然后想用PCR的
: 方法得到全长的该gene，设计flank该gene两端的引物后，却几乎得不到任何条带。做
: 到现在，试了自己的sample，也拿别人做的cDNA试（大约20多个来源不同的cDNA
: sample)，只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
: ，所以还需要尝试更多，但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
r*e
21 楼
没必要买太贵的吧. 你什么专业? 一般理工的专业是个西装就可以了.
特别是平时上班没有dress code的, 这样的公司里的同事也看不出什么西装贵什么
便宜.
【在 B***r 的大作中提到】
: Brooksbrothers factory store里的东西availability 是不是跟网上差不多？
特别是平时上班没有dress code的, 这样的公司里的同事也看不出什么西装贵什么
便宜.
【在 B***r 的大作中提到】
: Brooksbrothers factory store里的东西availability 是不是跟网上差不多？
T*s
22 楼
五十度灰女蹿红太快了
【在 M********c 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 LeisureTime 讨论区 】
: 发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
: 标 题: 《Black Mass》
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
: 看了《Black Mass》，描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
: Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演，Johnny Depp饰演狡猾
: 又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger，利用小时玩伴，现在的FBI探员来扩展自己的势
: 力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落，风格写实。推荐。
【在 M********c 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 LeisureTime 讨论区 】
: 发信人: Morningllc (绝对的优势), 信区: LeisureTime
: 标 题: 《Black Mass》
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 2 08:41:41 2015, 美东)
: 看了《Black Mass》，描写80年代波士顿南区黑帮的影片。 Scott Cooper导演。
: Johnny Depp, Benedict Cumberbatch, Dakota Johnson主演，Johnny Depp饰演狡猾
: 又心狠手辣的黑帮头子Whitey Bulger，利用小时玩伴，现在的FBI探员来扩展自己的势
: 力。影片编剧表演摄影剪接接都很不错。干净利落，风格写实。推荐。
k*0
23 楼
有没有GC rich的片段？如果GC含量局部很高，PCR时就可能出现问题。
l*e
24 楼
200, 300 的就差不多了
m*s
25 楼
第二张海报是另一个电影，Sicario
v*a
26 楼
不大，就1200多bp
【在 b******n 的大作中提到】
: 先连到T-easy或者Topo等克隆载体上面再做亚克隆吧
: 你想克隆的片段多大？
【在 b******n 的大作中提到】
: 先连到T-easy或者Topo等克隆载体上面再做亚克隆吧
: 你想克隆的片段多大？
b*d
27 楼
推荐 men's warehouse
他的导购很专业，式样和号码全，价格不贵
【在 B***r 的大作中提到】
: 求 推荐。
: 是不是 brooksbrothers算是比较贵的？
: 谢谢。
他的导购很专业，式样和号码全，价格不贵
【在 B***r 的大作中提到】
: 求 推荐。
: 是不是 brooksbrothers算是比较贵的？
: 谢谢。
b*o
28 楼
1.2kb PCR 应该很容易扩增和克隆的。
不能扩出的原因：
引物设计有问题；amplicon GC含量过高；cDNA来源的组织没有或很低的表达, Go to
UCSC genome browser to check your gene's expression in different tissues,
also you can check your gene's isoforms.
克隆不出来的原因：
要扩增片段的一侧可能有你用来做克隆的酶切位点，建议比较没有切的回收片段和酶切
之后的片段；
建议你连到T载体上，然后测序。
不能扩出的原因：
引物设计有问题；amplicon GC含量过高；cDNA来源的组织没有或很低的表达, Go to
UCSC genome browser to check your gene's expression in different tissues,
also you can check your gene's isoforms.
克隆不出来的原因：
要扩增片段的一侧可能有你用来做克隆的酶切位点，建议比较没有切的回收片段和酶切
之后的片段；
建议你连到T载体上，然后测序。
r*n
29 楼
EXPRESS
【在 b******d 的大作中提到】
: 推荐 men's warehouse
: 他的导购很专业，式样和号码全，价格不贵
【在 b******d 的大作中提到】
: 推荐 men's warehouse
: 他的导购很专业，式样和号码全，价格不贵
v*a
30 楼
多谢多谢！
【在 b*****o 的大作中提到】
: 1.2kb PCR 应该很容易扩增和克隆的。
: 不能扩出的原因：
: 引物设计有问题；amplicon GC含量过高；cDNA来源的组织没有或很低的表达, Go to
: UCSC genome browser to check your gene's expression in different tissues,
: also you can check your gene's isoforms.
: 克隆不出来的原因：
: 要扩增片段的一侧可能有你用来做克隆的酶切位点，建议比较没有切的回收片段和酶切
: 之后的片段；
: 建议你连到T载体上，然后测序。
【在 b*****o 的大作中提到】
: 1.2kb PCR 应该很容易扩增和克隆的。
: 不能扩出的原因：
: 引物设计有问题；amplicon GC含量过高；cDNA来源的组织没有或很低的表达, Go to
: UCSC genome browser to check your gene's expression in different tissues,
: also you can check your gene's isoforms.
: 克隆不出来的原因：
: 要扩增片段的一侧可能有你用来做克隆的酶切位点，建议比较没有切的回收片段和酶切
: 之后的片段；
: 建议你连到T载体上，然后测序。
P*0
31 楼
Mens' warehouse确实可以对付，但是跟brooks brother一比，高下立见。要我说就多
花几百块买BB。好西服穿在身上提气，感觉好，提高自信心。不要忘了皮鞋，如果
BUDGET有限，可以考虑men's warehouse或者Jos A Bank西服加Cole Haan dress shoes.
【在 b******d 的大作中提到】
: 推荐 men's warehouse
: 他的导购很专业，式样和号码全，价格不贵
花几百块买BB。好西服穿在身上提气，感觉好，提高自信心。不要忘了皮鞋，如果
BUDGET有限，可以考虑men's warehouse或者Jos A Bank西服加Cole Haan dress shoes.
【在 b******d 的大作中提到】
: 推荐 men's warehouse
: 他的导购很专业，式样和号码全，价格不贵
h*r
32 楼
不行就合成一个吧，那怕合成没P出来的那段也行。
d*9
33 楼
bb的太老气了,年轻人直接上一套hugo boss吧，对于刚毕业的人来说虽然贵点，但这投
资值得，以后
很多场合也能穿
shoes.
【在 P******0 的大作中提到】
: Mens' warehouse确实可以对付，但是跟brooks brother一比，高下立见。要我说就多
: 花几百块买BB。好西服穿在身上提气，感觉好，提高自信心。不要忘了皮鞋，如果
: BUDGET有限，可以考虑men's warehouse或者Jos A Bank西服加Cole Haan dress shoes.
资值得，以后
很多场合也能穿
shoes.
【在 P******0 的大作中提到】
: Mens' warehouse确实可以对付，但是跟brooks brother一比，高下立见。要我说就多
: 花几百块买BB。好西服穿在身上提气，感觉好，提高自信心。不要忘了皮鞋，如果
: BUDGET有限，可以考虑men's warehouse或者Jos A Bank西服加Cole Haan dress shoes.
r*y
34 楼
TA cloning测序看看吧 还没有遇到过片断被cleave的问题
【在 v***a 的大作中提到】
: 抱歉没有讲清楚。情况是这样的：拿不同cDNA sample做模板，PCR一个gene（非全长）
: ，大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带（经过测序验证）。然后想用PCR的
: 方法得到全长的该gene，设计flank该gene两端的引物后，却几乎得不到任何条带。做
: 到现在，试了自己的sample，也拿别人做的cDNA试（大约20多个来源不同的cDNA
: sample)，只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
: ，所以还需要尝试更多，但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
【在 v***a 的大作中提到】
: 抱歉没有讲清楚。情况是这样的：拿不同cDNA sample做模板，PCR一个gene（非全长）
: ，大部分的sample都能得到一个正确的产物短条带（经过测序验证）。然后想用PCR的
: 方法得到全长的该gene，设计flank该gene两端的引物后，却几乎得不到任何条带。做
: 到现在，试了自己的sample，也拿别人做的cDNA试（大约20多个来源不同的cDNA
: sample)，只有2个是有条带的。用这2个purify后的PCR产物做transformation都失败了
: ，所以还需要尝试更多，但又苦于能PCR得到全长的概率很小。在此请教大家。
O*S
35 楼
Hugo Boss
【在 B***r 的大作中提到】
: 求 推荐。
: 是不是 brooksbrothers算是比较贵的？
: 谢谢。
【在 B***r 的大作中提到】
: 求 推荐。
: 是不是 brooksbrothers算是比较贵的？
: 谢谢。
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