avatar
求mass spec高人指点# Biology - 生物学
l*o
1
也许我在基督教上花的时间多了些(不是基督徒),总习惯于钻牛角尖。对于诸佛诸菩
萨的描述,不同佛经上有很多互相不一致的地方,比如阿弥陀佛的来历,观音的位格。
。。这些不bother你们吗?或者你们认可佛经本身可能有错误?
请指教,谢谢!
avatar
L*e
2
I am planning to prepare coIP samples and use mass spec to get a protein
binding profile. By comparing control and mutant groups, I am hoping to
find targets that are more disease relevant. I use magnetic beads for Co-IP.
Now here comes the questions:
Would it be good enough to just use SDS buffer for elution? I know this is
the case if my next step is western blotting.
If not, would an acidic glycine buffer followed by a basic buffer (Tris-HCl
) be sufficient since this only results elution of native protein complexes?
What are the other methods you recommend for removing the SDS from protein
samples in addition to running them on a gel? Columns?
Thank you!!!!
avatar
P*S
3
观世音菩萨根据众生的因缘可以有各种化现。比如圣母玛利亚是观世音菩萨的化现也不
是没有可能的。
您说佛经不一致好像不太对。但对同一段佛经,不同人有不同解释挺正常的。“佛以一
音演说法,众生随类各得解。”

【在 l***o 的大作中提到】
: 也许我在基督教上花的时间多了些(不是基督徒),总习惯于钻牛角尖。对于诸佛诸菩
: 萨的描述,不同佛经上有很多互相不一致的地方,比如阿弥陀佛的来历,观音的位格。
: 。。这些不bother你们吗?或者你们认可佛经本身可能有错误?
: 请指教,谢谢!

avatar
L*e
4
anyone ......?

IP.
HCl
complexes?

【在 L*******e 的大作中提到】
: I am planning to prepare coIP samples and use mass spec to get a protein
: binding profile. By comparing control and mutant groups, I am hoping to
: find targets that are more disease relevant. I use magnetic beads for Co-IP.
: Now here comes the questions:
: Would it be good enough to just use SDS buffer for elution? I know this is
: the case if my next step is western blotting.
: If not, would an acidic glycine buffer followed by a basic buffer (Tris-HCl
: ) be sufficient since this only results elution of native protein complexes?
: What are the other methods you recommend for removing the SDS from protein
: samples in addition to running them on a gel? Columns?

avatar
l*o
5
哦,对不起,大概是我理解错了。
我看wiki,
http://zh.wikipedia.org/wiki/%E9%98%BF%E5%BC%A5%E9%99%80%E4%BD%
各佛经所说的阿弥陀佛身世背景不一样,
《妙法莲华经》:阿弥陀佛、阿閦佛与释迦牟尼佛,在过去世中,皆是大通智胜佛的十
六个儿子之一,因修行《妙法莲华经》而成就[21]。
《悲华经》:阿弥陀佛过去世中,出生在删提岚国土,名为无诤念王,因其大臣宝海的
劝告,随宝藏如来修行,又名无量净。他生有千子,其长子不眴后来成为观世音菩萨,
次子尼摩则成为大势至菩萨,其后诸子为文殊师利、普贤、阿閦佛等。其大臣宝海即为
释迦牟尼佛的前世[22]。
《观佛三昧海经》:在过去世中,在空王佛门下有四个比丘,阿弥陀佛为第三比丘,因
修行念佛法门而成就[23]。
《阿弥陀鼓音声王陀罗尼经》:阿弥陀佛出生于清泰国土,为转轮圣王月上之子,其母
为殊胜妙颜,其子为月明[24]。
《佛说济诸方等学经》:在离垢〔火佥〕成就功称如来至真等正觉在世时,阿弥陀佛的
前世为净命比丘,释迦牟尼佛的前世为为法比丘。净法比丘一心宣扬空法,毁谤净命比
丘,最后堕入地狱。因此释迦牟尼在五浊恶世成道,而阿弥陀佛在净土成道[25]。
《一向出生菩萨经》:阿隬陀佛为大转轮王持火之子,名为不思议胜功德,他在宝功德
威宿劫王如来门下,因修持入无边门陀罗尼而成就[26]。
。。。
这是指不同前生的事,所以不矛盾,对吧?

【在 P****S 的大作中提到】
: 观世音菩萨根据众生的因缘可以有各种化现。比如圣母玛利亚是观世音菩萨的化现也不
: 是没有可能的。
: 您说佛经不一致好像不太对。但对同一段佛经,不同人有不同解释挺正常的。“佛以一
: 音演说法,众生随类各得解。”

avatar
o*p
6

IP.
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
Samples can be separated on a gel and subsequently cleaned up to remove SDS.
HCl
complexes?
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
Changing the pH works, but usually denatures proteins. I used to do elutions
with ammonium hydroxide (pH>10). It is both efficient and convenient. It
can be removed simply by speed vac.
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
Filter assisted sample preparation (FASP) is a popular choice.

【在 L*******e 的大作中提到】
: I am planning to prepare coIP samples and use mass spec to get a protein
: binding profile. By comparing control and mutant groups, I am hoping to
: find targets that are more disease relevant. I use magnetic beads for Co-IP.
: Now here comes the questions:
: Would it be good enough to just use SDS buffer for elution? I know this is
: the case if my next step is western blotting.
: If not, would an acidic glycine buffer followed by a basic buffer (Tris-HCl
: ) be sufficient since this only results elution of native protein complexes?
: What are the other methods you recommend for removing the SDS from protein
: samples in addition to running them on a gel? Columns?

avatar
P*S
7
一个可以是不同世。另外一个可以是不同的化身。佛经读多了之后,你就会发现本师释
迦牟尼佛的情况更不可思议。
初地菩萨我记得就能显现一百个化身,更不要说佛了。
圣经里的三位一体是比较难解释的问题。佛经里对于佛的法报化三身解释得相当清楚。
如果明白了佛的法报化三身,解释三位一体就变得非常简单了。

【在 l***o 的大作中提到】
: 哦,对不起,大概是我理解错了。
: 我看wiki,
: http://zh.wikipedia.org/wiki/%E9%98%BF%E5%BC%A5%E9%99%80%E4%BD%
: 各佛经所说的阿弥陀佛身世背景不一样,
: 《妙法莲华经》:阿弥陀佛、阿閦佛与释迦牟尼佛,在过去世中,皆是大通智胜佛的十
: 六个儿子之一,因修行《妙法莲华经》而成就[21]。
: 《悲华经》:阿弥陀佛过去世中,出生在删提岚国土,名为无诤念王,因其大臣宝海的
: 劝告,随宝藏如来修行,又名无量净。他生有千子,其长子不眴后来成为观世音菩萨,
: 次子尼摩则成为大势至菩萨,其后诸子为文殊师利、普贤、阿閦佛等。其大臣宝海即为
: 释迦牟尼佛的前世[22]。

avatar
L*e
8
OMG~~~~~~~~~
LOVE IT!
Thanks!!!!!

SDS.
elutions

【在 o******p 的大作中提到】
:
: IP.
: ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
: Samples can be separated on a gel and subsequently cleaned up to remove SDS.
: HCl
: complexes?
: ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
: Changing the pH works, but usually denatures proteins. I used to do elutions
: with ammonium hydroxide (pH>10). It is both efficient and convenient. It
: can be removed simply by speed vac.

avatar
S*G
9
这不算什么啊,佛教各宗派之间的一些分歧甚至否定才是让人比较难以直视的。
avatar
K*S
10
LOL, orbitrap

SDS.
elutions

【在 o******p 的大作中提到】
:
: IP.
: ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
: Samples can be separated on a gel and subsequently cleaned up to remove SDS.
: HCl
: complexes?
: ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
: Changing the pH works, but usually denatures proteins. I used to do elutions
: with ammonium hydroxide (pH>10). It is both efficient and convenient. It
: can be removed simply by speed vac.

avatar
S*G
11
话说回来,基督教圣经在不少外人看来是一番鬼扯,基督教徒还不是一样信得不亦乐乎
,宗教的本质不外如是。
avatar
L*e
12
lol
what was that ......profile pic?

【在 K******S 的大作中提到】
: LOL, orbitrap
:
: SDS.
: elutions

avatar
N*n
13
基督教的父与子,争个不休,不是个清静的。
avatar
x*2
14
Orbitrap是一种mass spectrometer
你的样品可以用Orbitrap分析,也可以用其它的mass spectrometer
KingofMS回帖的意思是:三楼回你帖的人用户名叫Orbitrap,真好玩儿
话说你可以多和KingofMS聊聊,他对mass spectrometer的各种应用非常了解
avatar
h*n
15
这个是因为佛教里面讲的佛,菩萨等都是有三身的。什么意思呢?
三身是指法身,报身,和化身。其中法身才是佛和菩萨心的安住地,才是佛教说的佛,
报身和化身都是为了帮助众生,必须出生,或者显现在他们能看到和交流的世界里的。
而且对于同一个佛或者菩萨,报身和化身可以很多很多。我们因为还没有解脱轮回,我
们觉受里面自己当然只有一个,但是对于佛和菩萨来说报身和化身同时可以非常多。
佛教里讲我们这个人类世界只是轮回世界的一部分,还有非物质世界等很多世界。我们
这个世界就是一个化身世界,对于同一个佛和菩萨可以有非常众多的化身,可以在我们
现在这个人类世界出生很多个化身,张三是某某菩萨的化身,李四还可以是某某菩萨的
化身。
呵呵,对于佛来说,他却可以自称从来没有出现在我们的世界,因为他指的是自己的法
身。这样你才能理解佛经里记载的佛说自己从未说法,其实释迦摩尼讲了几十年的法。
他自己却说,没讲过,因为他要开示给最高悟性的众生,佛是法身,不是显现在大家面
前这个化身佛。
只要一个众生达到初地菩萨,再谈论他在一个化身世界里的来历就没有意义了。一个初
地菩萨可以同时有100个化身。

【在 l***o 的大作中提到】
: 也许我在基督教上花的时间多了些(不是基督徒),总习惯于钻牛角尖。对于诸佛诸菩
: 萨的描述,不同佛经上有很多互相不一致的地方,比如阿弥陀佛的来历,观音的位格。
: 。。这些不bother你们吗?或者你们认可佛经本身可能有错误?
: 请指教,谢谢!

avatar
x*2
16
lol是
laughing out loud
的简写
avatar
L*e
17
谢谢,您的指点!

【在 x**2 的大作中提到】
: Orbitrap是一种mass spectrometer
: 你的样品可以用Orbitrap分析,也可以用其它的mass spectrometer
: KingofMS回帖的意思是:三楼回你帖的人用户名叫Orbitrap,真好玩儿
: 话说你可以多和KingofMS聊聊,他对mass spectrometer的各种应用非常了解

avatar
z*1
18
没做过MASS SPEC,但据说一般coIP时用双tag比较好,用peptide置换洗脱,这样特异性
好,比较容易成功。
avatar
S*s
19
1.FLAG-HA double tag->stable cell line
2.Flag elute/HA elute
3.send out for MS sequencing

IP.
HCl
complexes?

【在 L*******e 的大作中提到】
: I am planning to prepare coIP samples and use mass spec to get a protein
: binding profile. By comparing control and mutant groups, I am hoping to
: find targets that are more disease relevant. I use magnetic beads for Co-IP.
: Now here comes the questions:
: Would it be good enough to just use SDS buffer for elution? I know this is
: the case if my next step is western blotting.
: If not, would an acidic glycine buffer followed by a basic buffer (Tris-HCl
: ) be sufficient since this only results elution of native protein complexes?
: What are the other methods you recommend for removing the SDS from protein
: samples in addition to running them on a gel? Columns?

相关阅读
logo
联系我们隐私协议©2024 redian.news
Redian新闻
Redian.news刊载任何文章,不代表同意其说法或描述,仅为提供更多信息,也不构成任何建议。文章信息的合法性及真实性由其作者负责,与Redian.news及其运营公司无关。欢迎投稿,如发现稿件侵权,或作者不愿在本网发表文章,请版权拥有者通知本网处理。