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要分离小鼠脾B细胞, 求教
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要分离小鼠脾B细胞, 求教# Biology - 生物学
j*e
1
【 以下文字转载自 Piebridge 讨论区 】
发信人: zairenjian (玻璃虫), 信区: Piebridge
标 题: 男人吃木瓜会不会丰胸啊?
发信站: BBS 未名空间站 (Thu May 13 01:33:53 2010, 美东)
听说木瓜能美容,今天买了个回来。但是又听说木瓜丰胸,不知道对男人有没有啥不好
的影响啊?
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W*C
2
主要是怎么提高细胞的viability,分离过程(我用MACS去除其他细胞)有哪些trick?
激活的方法比较多, LPS, IgM, IL4, PMA...怎么激活最好?
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s*e
3
男人吃了长胸肌
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s*9
4
Question is too broad. No one can answer your question.



【在 W****C 的大作中提到】
: 主要是怎么提高细胞的viability,分离过程(我用MACS去除其他细胞)有哪些trick?
: 激活的方法比较多, LPS, IgM, IL4, PMA...怎么激活最好?

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i*a
5
女瘋兇, 男撞羊

【在 j****e 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Piebridge 讨论区 】
: 发信人: zairenjian (玻璃虫), 信区: Piebridge
: 标 题: 男人吃木瓜会不会丰胸啊?
: 发信站: BBS 未名空间站 (Thu May 13 01:33:53 2010, 美东)
: 听说木瓜能美容,今天买了个回来。但是又听说木瓜丰胸,不知道对男人有没有啥不好
: 的影响啊?

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o*d
6
个人经验:B cell在体外没有刺激的情况下死的很快,即使有血清也是一样。所以想提
高细胞存活率,动作快/实验连续是一个关键。一般杀老鼠,取脾,纯化B细胞,计数
,加刺激物中间是不停。
至于要激活,看你的实验目的了。
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W*C
7

谢谢楼上的。 肯定是加血清的啦, 而且要加超低IGG的血清。
应该是连续完成的, FACS鉴定可以同时做(用CD45R).
收细胞后是用来测药效的(cytotoxicity, CTG ASSAY).
刺激Bcell增殖的时候最好专一性好, 大概是因为LPS,PMA也刺激其他免疫细胞 (eg.
T),我看别人基本都是跟IL4, IGM同时用的。

【在 o**d 的大作中提到】
: 个人经验:B cell在体外没有刺激的情况下死的很快,即使有血清也是一样。所以想提
: 高细胞存活率,动作快/实验连续是一个关键。一般杀老鼠,取脾,纯化B细胞,计数
: ,加刺激物中间是不停。
: 至于要激活,看你的实验目的了。

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s*9
8
用IgM 加anti-cd40刺激

eg.

【在 W****C 的大作中提到】
:
: 谢谢楼上的。 肯定是加血清的啦, 而且要加超低IGG的血清。
: 应该是连续完成的, FACS鉴定可以同时做(用CD45R).
: 收细胞后是用来测药效的(cytotoxicity, CTG ASSAY).
: 刺激Bcell增殖的时候最好专一性好, 大概是因为LPS,PMA也刺激其他免疫细胞 (eg.
: T),我看别人基本都是跟IL4, IGM同时用的。

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o*d
9
我没有用过IL-4,但IgM是肯定可以的,如果能用cross-link的IgM效果会更好。
另外,CD40 or anti-CD ab 和BAFF(专一性很强)是常用的Bcell刺激物。

eg.

【在 W****C 的大作中提到】
:
: 谢谢楼上的。 肯定是加血清的啦, 而且要加超低IGG的血清。
: 应该是连续完成的, FACS鉴定可以同时做(用CD45R).
: 收细胞后是用来测药效的(cytotoxicity, CTG ASSAY).
: 刺激Bcell增殖的时候最好专一性好, 大概是因为LPS,PMA也刺激其他免疫细胞 (eg.
: T),我看别人基本都是跟IL4, IGM同时用的。

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