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多位点突变

多位点突变# Biology - 生物学

N*e2012-03-21 07:03

1 楼

我一直有个问题没搞清。
比如：我purchase agreement签了，inspection过了。准备申请30-year-fix贷款。我
询问了三五家贷款公司，比较每家利率后，选择给了最低利率那家。然后把所需材料给
这家。
那么，如果我不在比较利率的当天选择这家贷款并锁定利率，即使一两天后，他家再给
的利率，可能就不是他们能给的最好利率了。有这个可能吗？因为我已经给了所有材料
并开始了贷款申请程序，中断就有损失。这样，他本来也许能给个5.125%，他却只给我
5.25%.
我的贷款申请还没开始，所以想先把过程搞清楚，以免上了船就被动了。
那位给讲讲我的理解对吗？

s*r2012-03-21 07:03

2 楼

求教一个技术问题：
目的是在plasmid上一次引入三个site-directed mutation. 三个位点，间隔150bp, 800
bp, 和2K bp. 准备尝试用QuickChange Multiple Site-Directed Mutagenesis，但是
害怕间隔相差太大PCR会出错。也看了其他的一些方法，比如Andreas Seyfang &
Huaqian Jing的Multiple site-directed mutagenesis of more than 10 sites
simultaneously and in a single round （the schematic diagram was attached).
不过不确定accuracy和efficiency到底怎样。
不知道大家有什么好的建议？谢谢了先！

HL2012-03-21 07:03

3 楼

我认为不可能出现这种欺诈行为。

s*y2012-03-21 07:03

4 楼

plasmid有多大，如果没超过8,9K的话，还是建议用Stratagene的那个QuickChange kit
，大不了就是做3次，顺利的话一周之内搞定。这篇paper提的方法倒是挺有意思，但是
不知道实际操作起来如何，以后如果有机会的话（比如碰到做大规模alanine screenin
g的时候）可以试试。

800
.

【在 s****r 的大作中提到】

: 求教一个技术问题：
: 目的是在plasmid上一次引入三个site-directed mutation. 三个位点，间隔150bp, 800
: bp, 和2K bp. 准备尝试用QuickChange Multiple Site-Directed Mutagenesis，但是
: 害怕间隔相差太大PCR会出错。也看了其他的一些方法，比如Andreas Seyfang &
: Huaqian Jing的Multiple site-directed mutagenesis of more than 10 sites
: simultaneously and in a single round （the schematic diagram was attached).
: 不过不确定accuracy和efficiency到底怎样。
: 不知道大家有什么好的建议？谢谢了先！

w*n2012-03-21 07:03

5 楼

用高保真酶，整完了，测序确认，问题不大。

800
.

【在 s****r 的大作中提到】

b*n2012-03-21 07:03

6 楼

这个方法看起来很有意思，只是如果有的mutation primer没有annealing到template
strand上，那不就没突变成功么？
10个位点啊，我不相信能有100%的正确性
多少会有一些少于10个位点突变成功的

800
.

【在 s****r 的大作中提到】

i*l2012-03-21 07:03

7 楼

nod
plasmid有多大，如果没超过8,9K的话，还是建议用Stratagene的那个QuickChange kit
，大不了就是做3次，顺利的话一周之内搞定。
this is well established, and commercially QCed

kit
screenin

【在 s******y 的大作中提到】

: plasmid有多大，如果没超过8,9K的话，还是建议用Stratagene的那个QuickChange kit
: ，大不了就是做3次，顺利的话一周之内搞定。这篇paper提的方法倒是挺有意思，但是
: 不知道实际操作起来如何，以后如果有机会的话（比如碰到做大规模alanine screenin
: g的时候）可以试试。
:
: 800
: .